《糧油檢驗 苦杏仁苷含量的測定 高效液相色譜法》

1LS/T6151—2024糧油檢驗苦杏仁苷含量的測定高效液相色譜法本文件描述了高效液相色譜法測定苦杏仁苷含量的扦樣、試樣制備、操作步驟、結果表示和精密度。本文件適用于植物油料、餅粕及植物油中苦杏仁苷含量的測定。本方法在油料中苦杏仁苷的檢出限分別為40mg/kg,定量限80mg/kg;在植物油中苦杏仁苷的檢出限80mg/kg,定量限160mg/kg;在餅粕中苦杏仁苷的檢出限為2mg/kg,定量限4mg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T5491糧食、油料檢驗扦樣、分樣法GB/T5524動植物油脂扦樣GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T15687動植物油脂試樣的制備3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理樣品經甲醇提取后，采用高效液相色譜分離，在波長210nm條件下測定苦杏仁苷含量，外標法定量。5試劑除非另有說明，所用試劑均為分析純(AR),水應符合GB/T6682中一級水的規(guī)定。5.2甲醇-水混合液(20+80,體積比):取20mL甲醇加入80mL水，混勻。5.3石油醚：沸程30℃~60℃。5.4苦杏仁苷標準品：純度≥98%。5.5苦杏仁苷標準儲備溶液(500μg/mL):準確稱取25.0mg(精確至0.0001g)苦杏仁苷標準品(5.4)置于50mL容量瓶中，用甲醇(5.1)溶解并定容，搖勻，保存于4℃,根據(jù)每次用量分裝備用，有效期1個月。2LS/T6151—20246儀器和設備7.2植物油扦樣按GB/T5524執(zhí)行。8試樣制備9操作步驟心管置于超聲波發(fā)生器(6.5)中，底部樣品重懸后，開始計時30min(期間每隔10min水平振蕩1次)3LS/T6151—20249.2餅粕樣品：準確稱取0.1g～0.4g(精確至0.0001g)粉碎的樣品于50mL離心管(6.4)中，用移液管準確加入20.0mL甲醇(5.1),蓋塞，按8.1“將離心管置于超聲波發(fā)生器(6.5)中，底部樣品重懸后，……待上機分析”操作。9.3植物油樣品：準確稱取植物油樣品1.0g(精確至0.0001g)于10mL離心管(6.9)中，加入3mL甲醇(5.1),渦旋1min后，放入超聲波發(fā)生器(6.5)中超聲20min(隔10min上下振蕩1次),4000r/min離心10min后，將提取上清液轉移至5mL容量瓶中，再在樣品中加入1mL甲醇(5.1),猛烈振搖30s后，放入超聲波發(fā)生器(6.5)中超聲10min,4000r/min離心10min,將上清液并入之前的提取液中，再加入1mL甲醇(5.1),猛烈振搖30s后，再重復提取1次。將3次甲醇提取液合并于5mL容量瓶中，并定容至刻線后，混勻。準確吸取提取液1.0mL于5mL離心管(6.9)中，再準確加入1.0mL甲醇-水混合液(5.2)稀釋混勻(如出現(xiàn)乳濁，屬正?，F(xiàn)象),用微孔濾頭(6.10)過濾至澄清后，轉移至進樣瓶中，待上機分析。9.4色譜參考條件色譜參考條件如下。a)色譜柱：C18柱(250mm×4.6mm,5μm)或性能相當者。b)流動相：甲醇-水混合液(5.2)。d)柱溫：30℃。e)檢測器：檢測波長210nm?？嘈尤受諛藴噬V圖見附錄A。9.5測定9.5.1標準曲線將苦杏仁苷標準工作溶液(5.6)依次由低質量濃度至高質量濃度注入高效液相色譜儀中進行分析，記錄峰面積，以苦杏仁苷峰面積為縱坐標，以苦杏仁苷質量濃度為橫坐標，繪制標準曲線。9.5.2樣品測定將樣品待測溶液注入高效液相色譜儀中進行分析，記錄峰面積，根據(jù)樣品測試溶液的峰面積與標準曲線比較，計算出樣品測試溶液中苦杏仁苷的質量濃度。如果樣品測試溶液的峰面積超出標準曲線范圍，應適當稀釋濾液，重新進行測定。9.5.3空白試驗除不加試樣外，根據(jù)樣品類型采用相同的操作步驟做空白試驗。10結果表示試樣中苦杏仁苷含量(X)>0.1%時，以質量分數(shù)表示，按式(1)計算：…………(1)4LS/T6151—式中：XpPoNm——樣品中苦杏仁苷含量，%; ——試樣提取液的體積，單位為毫升(mL);——濾液(提取液)的稀釋倍數(shù)；——試樣質量，單位為克(g);100、1000000——單位換算常數(shù)。計算結果保留小數(shù)點后兩位。試樣中苦杏仁苷含量(X)≤0.1%時，以mg/kg表示，按式(2)計算：式中：…………X——樣品中苦杏仁苷含量，單位為毫克每千克(mg/kg);p——從標準工作曲線得到的待測液中苦杏仁苷的質量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);po——從標準工作曲線得到的空白液中苦杏仁苷的質量濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);V——試樣提取液的體積，單位為毫升(mL);N——濾液(提取液)的稀釋倍數(shù)；m——試樣質量，單位為克(g);1000——單位換算常數(shù)。計算結果保留小數(shù)點后一位。11精密度11.1重復性在重復條件下獲得的兩個獨立測試結果的絕對差值大于重復性限(r)的情況不超過5%?？嘈尤受蘸康闹貜托韵?r)見附錄B。11.2再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩個獨立測試結果的絕對差值大于再現(xiàn)性限(R)的情況不超過5%?？嘈尤受蘸康脑佻F(xiàn)性限(R)見附錄B。5LS/T6151—2024(資料性)苦杏仁苷標準色譜圖苦杏仁苷標準色譜圖見圖A.1。圖A.1苦杏仁苷標準色譜圖6LS/T6151—2024(資料性)實驗室間比對試驗統(tǒng)計結果組織10家實驗室對8個不同樣品進行實驗室間比對試驗，建立了本方法的精密度。結果按GB/T6379.1和GB/T6379.2統(tǒng)計分析，統(tǒng)計結果見表B.1。表B.1實驗室間比對試驗統(tǒng)計結果樣品編號12345678實驗室數(shù)目參加統(tǒng)計實驗室數(shù)目8離群實驗室數(shù)目00200000平均值4.56%2.71%0.12%6.18%3.28%<檢出限72.7mg/kg143.6mg/kg重復性標準偏差S,0.150.080.0040.170.10 重復性限r0.430.230.010.460.29重復性變異系數(shù)/%2.68 再現(xiàn)性標準偏差SR0.250.130.020.310.35再現(xiàn)性限R0.710.360.050