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備案號(hào):35077-2012DB22DB22/T1589—2012高粱品種鑒定DNA指紋法(SSR)Identificationofsorghum(Sorghumbicolor(L.)Moench)varietiesusingDNAfingerprintingmethod(SSR)吉林省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1GB/T3543.2農(nóng)作物種子檢2):5.1.25親和硅烷(bindingsil3至每種核苷三磷酸終濃度為10mmol40.25g過(guò)硫酸銨溶于1mL超純水中,混勻。5引物在DNA分析儀上使用時(shí),須在正向引物5′端加應(yīng)按本標(biāo)準(zhǔn)方法,確定其大小和對(duì)應(yīng)參照品種。參照品種的名9.1.1樣品材料可為種子、幼苗、植株幼嫩葉片等組織或器官。對(duì)d)通風(fēng)櫥下加入700μL的氯仿:異戊醇(24:1),輕輕倒轉(zhuǎn)搖動(dòng)5min~10min;),輕混勻。-20℃冰箱靜置一段時(shí)間后,至DNA凝集,室溫下鉤出DNA;6ng~40ng,其余以超純水補(bǔ)足至所需體積。如果PCR過(guò)程中不采用熱蓋程序,則反應(yīng)液上加蓋15μL礦),到下部,在上部輕輕插入梳子,使其凝聚至少1h以上。灌膠過(guò)程中防止出現(xiàn)氣泡。拔出梳子。80W恒功率預(yù)電泳30min~40min。7用移液器吹吸加樣槽,清除殘膠和氣泡,插入樣品梳子,每一個(gè)加c)染色:在新配染色液中,輕輕搖蕩20min;使用DNA分析儀的片段分析軟件,讀出每個(gè)位點(diǎn)每個(gè)樣品的等位變異片段大小數(shù)據(jù)。通過(guò)使用參照品種,消除同型號(hào)不同批次間或不同型號(hào)DNA分析儀間可能存在的系統(tǒng)誤差。比較參照品種的等位將每個(gè)核心引物位點(diǎn)的所有譜帶按擴(kuò)增片段從小到大的順序編號(hào),用二位代碼描述(依次為01、02……),對(duì)照參照品種的譜帶確定待測(cè)樣品的基因型。純合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/X,其中X為該位點(diǎn)譜帶的代碼;雜合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/Y,其中X、Y為該位點(diǎn)上兩個(gè)不同的譜帶。8純合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)記錄為X/X,其中X為該位點(diǎn)等位變異的大??;雜合位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù)215bp,則該品種在該引物位點(diǎn)上的等位變異數(shù)據(jù)記測(cè)品種在這些引物位點(diǎn)的等位變異數(shù)據(jù),利用這對(duì)待測(cè)品種進(jìn)行檢測(cè)后利用其檢測(cè)數(shù)據(jù)和數(shù)據(jù)庫(kù)中品種的數(shù)據(jù)進(jìn)行比對(duì)時(shí),先用附錄A.1中20對(duì)基對(duì)品種間差異位點(diǎn)數(shù)=0、1的情況,將這些相近品種或疑同品種與待測(cè)品種按照11.1.2的方法進(jìn)行9123456789123456789GAAATTACAATGCTACCCCTACTCTACTCCTTCCGTCCAGCAAGCGAGCTGACTTATGTACAAAGTGCTACTAAACCTATGCA引物相關(guān)信息1323324257677585
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