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DB21IdentificationofGooseDownFiberinFeatherandDownProducts-PCRmethodandreal-timefluorescenc遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布I請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利,本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識別這些專利的責(zé)任。1羽絨制品中鵝絨的鑒別PCR法和實(shí)時(shí)熒光PCR法GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和3.1聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)polymerasechainrea3.2實(shí)時(shí)熒光PCRreal-timefluorescencepolymerasechainr4縮略語bp:堿基對(basepair)DNA:脫氧核糖核酸(deoxyribonuleicacid)dNTP:脫氧核苷酸三磷酸(deoxyribonucleosidetriphospha26.2組織和毛發(fā)提取試劑盒TaKaRaMiniBESTUniversalGenomicDNAExtractionKitVer.5.0(T3),10.8將核酸純化柱安置于收集管上),進(jìn)行PCR、實(shí)時(shí)熒光PCR鑒別時(shí)設(shè)置陽性對照、陰性對照和空白對照。陽性對照:擴(kuò)增鵝5’-GCTACTAGCCATACACTAC-3’5’-GTTGGATTGTCTACTGAGA-3’4并加DNAmarker點(diǎn)樣以判斷PCR產(chǎn)物的片段大小。電壓大小根據(jù)電泳鵝5’-GCTACTAGCCATACACTAC-3’5’-GTTGGATTGTCTACTGAGA-3’5’-(FAM)CGCAGACACTTCACTCGCCT(Eclipse)-3’反應(yīng)結(jié)束后,應(yīng)設(shè)置無效基線范圍,基線范圍選擇在3~15個(gè)循環(huán)5對照和空白對照結(jié)果正常者,則可判定該樣品檢出鵝源性6PremixExTaq(ProbeqPCR2×C7擴(kuò)增產(chǎn)物序列Attcctagccatgcactactcaccagacgcctcaaccgccttttcatcaatcgcccacatcactcgagacgtaaattatggctgaatcatccgctaccttcacgccaatggcgcctcaatattctttatctgcctcttcctacacatcgggcgaggcctatattactctctactcagaaacctgaaacatcggcattatcctcctgcttgcaactatagcaacagccttcataggctatgtccaaatatcattctgaggggccacagtaattacaaacttactatccgccatcc
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