DB51T 1098-2010 牛奶中磺胺二甲氧嘧啶殘留檢測方法-酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法　　

DB51/T1098—2010牛奶中磺胺二甲氧嘧啶殘留檢測方法一四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB51/T1908—2010前言 錯誤!未定義書簽。 12規(guī)范性引用文件 1 14測定方法 15測方法靈敏度、準確度、精密度 3本標準由四川省畜牧食品局提出并歸口。本標準由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準。本標準起草單位：四川省獸藥監(jiān)察所、四川省獸藥殘留監(jiān)控中心。本標準主要起草人：吳曉嵐、程江、彭莉、岳秀英、熊浩山、官艷麗、王海波。11范圍凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3制樣3.2樣品的保存4測定方法4.2試劑和材料4.2.1十二水合磷酸氫二鈉(Na?HPO4.12H?O),二水合磷酸二氫鉀(KH?PO4.2H?O),氯化鈉(NaC1),氯化鉀(KC1)。4.2.20.02MPBS緩沖液稱取5.36g十二水合磷酸氫二鈉、0.20g二水合磷酸二氫鉀、8.00g氯化鈉和0.20g氯化鉀加去離子水溶液定容至1L。4.2.3磺胺二甲氧嘧啶試劑盒：2℃~8℃保存。(采用官方備案的試劑盒)4.2.3.196孔板酶標板8條×12孔：包被有磺胺二甲氧嘧啶偶聯(lián)抗原。4.2.3.5底物溶液A。4.2.3.6底物溶液B。24.2.3.7濃縮洗滌液臨用前用水稀釋二十倍作為洗滌液。4.2.3.8濃縮復溶液臨用前用水1:1稀釋。4.2.3.9終止溶液。4.3儀器和設備4.3.1酶標儀(配備450nm濾光片)。4.3.3分析天平感量0.0001g。4.3.4漩渦混合器。4.3.5氮吹儀。4.3.6冷凍離心機。4.3.7振蕩器。4.3.9微量移液器單道50μL,100μL,1000μL多道50μL-250μL。4.4測定步驟4.4.1試料的制備試料的制備包括：——取制備后的供試樣品，作為供試試料?！≈苽浜蟮目瞻讟悠?，作為空白試料?！≈苽浜罂瞻讟悠?，添加適宜濃度的標準溶液作為空白添加試料。取制備后的試樣5.0mL于離心管中，3000r/min,10℃離心10min,吸除上層脂肪；取1ml離心后的緩沖液(見配液3)按1:19的體積比進行稀釋(即20μl牛奶+380μ10.02MPBS緩沖液);最后取20μl用于分析。4.4.3樣品測定程序(20℃~26℃條件下操作)4.4.3.1使用前將試劑盒置于室溫(20℃~26℃)平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的酶標板微孔條插入框架中，將不用的微孔條放入自封袋，保存于2℃~8℃。將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品均需做兩個平行實驗。4.4.3.2加入50μL標準溶液或試樣溶液到微孔底部，隨即加入酶標二抗50μ1/孔，再加入抗體工作液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜封板，25℃溫箱中避光反應60min。4.4.3.3加入50μL底物溶液A和50μL底物溶液B到微孔中，輕輕振蕩混勻25℃避光環(huán)境顯色30min。4.4.3.4加入50μL終止液到微孔中，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處，測定每孔吸光度值(OD4.5結(jié)果計算和表述所獲得的標準或樣品吸光度值的平均值除以第一個標準(0標準)吸光度值的平均值再乘以100%,得到以百分比給出的吸光度值，以式(1.1)表示：式中：B—為標準溶液或供試樣品的平均吸光度值；Bo—為零濃度標準溶液的平均吸光度值。以X軸為標準溶液中磺胺二甲氧嘧啶濃度(μg/L)的自然對數(shù)，Y軸為百分吸光度值，在半對數(shù)坐標紙上繪制標準曲線圖。相對應的供試樣品的濃度(μg/L)可以從標準曲線上查出。也可以求出回歸曲3DB51/T1908—2010線的方程，計算未知樣品中磺胺二甲氧嘧啶的濃度。如果有專業(yè)計算機軟件可直接求出供試樣中磺胺二甲氧嘧啶的濃度。注：檢測結(jié)果小于20.0μg/L時，可判為未檢出，大于20.0μg/L時，判為可疑，需用確證法確認。本方法在牛奶中磺胺二甲氧嘧啶的最低檢測限為