新疆阿克蘇市阿瓦提縣第四中學(xué)2025年高考全國統(tǒng)考預(yù)測密卷（2）生物試題試卷含解析

新疆阿克蘇市阿瓦提縣第四中學(xué)2025年高考全國統(tǒng)考預(yù)測密卷（2）生物試題試卷注意事項：1．答卷前，考生務(wù)必將自己的姓名、準(zhǔn)考證號填寫在答題卡上。2．回答選擇題時，選出每小題答案后，用鉛筆把答題卡上對應(yīng)題目的答案標(biāo)號涂黑，如需改動，用橡皮擦干凈后，再選涂其它答案標(biāo)號?；卮鸱沁x擇題時，將答案寫在答題卡上，寫在本試卷上無效。3．考試結(jié)束后，將本試卷和答題卡一并交回。一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1．研究發(fā)現(xiàn)，與正常女性相比，Turner綜合征患者(女性)易患血友病(伴Ⅹ染色體隱性遺傳病)，據(jù)此可推測Turner綜合征患者體內(nèi)可能（）A．多一條X染色體B．少一條X染色體C．血小板凝集成團D．紅細(xì)胞凝集成團2．下列有關(guān)免疫的敘述，錯誤的是（）A．吞噬細(xì)胞可參與非特異性免疫和特異性免疫B．B細(xì)胞受到抗原刺激后增殖分化成漿細(xì)胞和記憶細(xì)胞C．機體初次接受抗原刺激所發(fā)生的組織損傷或功能紊亂稱為過敏反應(yīng)D．防衛(wèi)、監(jiān)控和清除是免疫系統(tǒng)的三大功能3．《莊子·人間世》中莊子對弟子說：“山木自寇也，膏火自煎也，桂可食，故伐之；漆可用，故割之。人皆知有用之用，而莫知無用之用也”。語句中相關(guān)生態(tài)學(xué)原理錯誤的是（）A．“寇”“煎”“伐”“割”有利于能量流向?qū)θ祟愑幸娴牟糠諦．“膏火自煎”使得生態(tài)系統(tǒng)能量利用率降低C．“伐之”、“割之”均不利于生物多樣性的保護D．“無用之用”指生物多樣性的間接價值和潛在價值4．下圖為初級精母細(xì)胞減數(shù)分裂時的一對同源染色體示意圖，圖中1~8表示基因。不考慮突變的情況下，下列敘述正確的是（）A．1與2、3、4互為等位基因，與6、7、8互為非等位基因B．同一個體的精原細(xì)胞有絲分裂前期也應(yīng)含有基因1~8C．1與2在減數(shù)第一次分裂分離，1與3在減數(shù)第二次分裂分離D．1分別與6、7、8組合都能形成重組型的配子5．某植物的花色由A、a和B、b兩對獨立遺傳的等位基因控制，當(dāng)含有A基因時表現(xiàn)為白花，在不含A基因的前提下，BB或Bb為紅花，bb為紫花。現(xiàn)有一株白花植株和一株紫花植株雜交，F(xiàn)1中僅有白花植株和紅花植株。下列敘述正確的是（）A．親本白花植株的基因型為AaBbB．F1中白花植株和紅花植株的比例為3∶1C．F1中紅花植株自交產(chǎn)生的后代全為紅花植株D．F1中兩種花色的植株雜交，產(chǎn)生的后代中紫花植株占1/86．下圖為某種細(xì)菌中脲酶基因轉(zhuǎn)錄的mRNA部分序列?，F(xiàn)有一細(xì)菌的脲酶由于基因突變而失活，突變后基因轉(zhuǎn)錄的mRNA在圖中箭頭所示位置增加了70個核苷酸，使圖示序列中出現(xiàn)終止密碼（終止密碼有UAG、UGA和UAA）。下列有關(guān)說法錯誤的是（）A．突變基因轉(zhuǎn)錄的mRNA中，終止密碼為UGAB．突變基因表達(dá)的蛋白含115個氨基酸C．其線粒體的環(huán)狀DNA分子中每個脫氧核糖都與兩個磷酸相連D．突變基因所在DNA復(fù)制時所需的酶有解旋酶、DNA聚合酶等二、綜合題：本大題共4小題7．（9分）某生物小組利用圖1裝置培養(yǎng)某植株幼苗，通過測定不同時段密閉玻璃罩內(nèi)幼苗的O2釋放速率來測量光合速率，結(jié)果如圖2所示。請據(jù)圖回答下列問題：（1）植物根尖細(xì)胞對培養(yǎng)液中不同無機鹽離子的吸收具有選擇性，吸收速率也不相同，原因是___________________。若用缺鎂的完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，葉肉細(xì)胞內(nèi)_____合成減少，從而影響植物對光的吸收。（2）在光下，根尖細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生[H]的場所有________________。（3）曲線中t1～t4時段，玻璃罩內(nèi)CO2濃度最高點是_____；t4時補充CO2，此時葉綠體內(nèi)C5的含量____。（4）根據(jù)測量結(jié)果t4時玻璃罩內(nèi)O2的量與t0時相比增加了256mg，此時植株積累葡萄糖的量為___mg。若t5時溫度升高至35℃，植株光合作用速率的變化是_____（填“升高”、“不變”、“降低”）。8．（10分）流感病毒可引起人、禽、豬、蝙蝠等多種動物感染和發(fā)病，其遺傳物質(zhì)是單股負(fù)鏈RNA。請回答下列相關(guān)問題：（1）流感病毒具有包膜，包膜是病毒從宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜中獲得的，其基本骨架是____。（2）心血管疾病患者感染流感病毒后容易引發(fā)嚴(yán)重后果，因此醫(yī)生建議他們注射疫苗，這屬于____（填“免疫治療”或“免疫預(yù)防”）。在流行季節(jié)前接種一次，免疫力可持續(xù)一年，這是由于接種后機體產(chǎn)生了____。（3）接種流感疫苗的人，仍會患普通感冒，這是由于疫苗的作用具有____性。即使曾經(jīng)得過流感并痊愈的人，也較容易再次患病，從流感病毒的結(jié)構(gòu)分析，原因是____。（4）全病毒滅活疫苗是指將病毒培養(yǎng)在雞胚中然后進行滅活處理得到的病原體，屬于傳統(tǒng)疫苗，使用中偶見局部疼痛、紅腫等副作用。倫敦國王學(xué)院的免疫學(xué)家發(fā)現(xiàn)副作用易發(fā)人群體內(nèi)的抗體較易攻擊自身正常組織細(xì)胞，因而有更多可能罹患____病。9．（10分）乙烯具有促進果實成熟的作用，ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的兩個關(guān)鍵酶。利用反義DNA技術(shù)（原理如圖1），可以抑制這兩個基因的表達(dá)，從而使番茄具有耐儲存、宜運輸?shù)膬?yōu)點。圖2為融合ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因的反義表達(dá)載體的結(jié)構(gòu)示意圖。（1）圖2中的2A11為特異性啟動子，則2A11應(yīng)在番茄的____________（器官）中表達(dá)。（2）從番茄成熟果實中提取___________為模板，利用反轉(zhuǎn)錄法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因，以進行拼接構(gòu)成融合基因并擴增。（3）合成出的ACC氧化酶基因兩端分別含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位點，ACC合成酶基因兩端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位點，用限制酶____________對上述兩個基因進行酶切，再串聯(lián)成融合基因，相應(yīng)的Ti質(zhì)粒應(yīng)用限制酶_______________進行切割，確保融合基因能夠插入載體中。（4）為了實現(xiàn)圖1中反義基因的效果，應(yīng)將融合基因_______（正向/反向）插入在啟動子2A11的下游即可構(gòu)成反義融合基因。將表達(dá)載體與農(nóng)桿菌菌液混合后，接種在含有___的培養(yǎng)基中，可篩選出含有反義融合基因的農(nóng)桿菌，再利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)基因番茄。（5）在檢測番茄細(xì)胞中是否存在反義融合基因時，____________（填“能”/“不能”）用放射性物質(zhì)標(biāo)記的ACC氧化（合成）酶基因片段做探針進行檢測，理由是____________。10．（10分）基因打靶技術(shù)是建立在基因同源重組技術(shù)以及胚胎干細(xì)胞技術(shù)的基礎(chǔ)上而發(fā)展起來的一種分子生物學(xué)技術(shù)。請結(jié)合圖示回答下列有關(guān)問題：注：neor是新霉素抗性基因；tk基因的表達(dá)可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。（1）將目的基因和與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到__________上，構(gòu)建打靶載體（基因表達(dá)載體）。（2）打靶載體測序驗證正確后，利用__________酶，將之線性化，以提高重組率。通過__________技術(shù)將打靶載體導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，這樣打靶載體和與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有機會發(fā)生同源重組。（3）為了篩選發(fā)生同源重組的細(xì)胞，可在培養(yǎng)液中加入__________。最后還需要通過__________技術(shù)鑒定同源重組的細(xì)胞（去除靶基因），將這樣的細(xì)胞通過動物細(xì)胞培養(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細(xì)胞。其中，暫時不用的細(xì)胞進行__________保存。（4）將打靶成功的細(xì)胞注射入小鼠囊胚，移植到同種、__________的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進行妊娠檢查，確保其生下嵌合體小鼠。這種嵌合體小鼠長大后，體內(nèi)同時存在被“修飾”過的基因和未被“修飾”的基因。如果某些小鼠的__________（填“體細(xì)胞”或“生殖細(xì)胞”）恰巧被“修飾”過了，則它們的雜交后代中，就可能出現(xiàn)基因完全被“修飾”過的小鼠。11．（15分）薰衣草精油化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，難溶于水，易溶于有機溶劑。其提取的基本流程為：薰衣草花瓣→浸泡→旋蒸提取→油水混合物→精油粗產(chǎn)品→除水、過濾、精制→薰衣草精油。請回答下列相關(guān)問題：（1）此流程采取的方法稱之為__________法，為促進油水混合物中油和水分離，需向其中加入__________，為了除去分離出的油層中的水分，一般加入__________溶液，根據(jù)薰衣草精油的化學(xué)性質(zhì)，推測其提取還可以采用__________法。（2）蒸餾時間的長短會影響薰衣草精油的品質(zhì)，如果要提高品質(zhì)，需__________（填“延長”或“縮短”）蒸餾時間。蒸餾溫度的高低也會影響薰衣草精油的品質(zhì)，為探究蒸餾溫度對薰衣草精油出油率的影響，應(yīng)設(shè)置多組實驗。每組實驗至少重復(fù)3次，目的是____________。（3）此流程不適合胡蘿卜素的提取，原因是________________。

參考答案一、選擇題：（共6小題，每小題6分，共36分。每小題只有一個選項符合題目要求）1、B【解析】

染色體數(shù)目變異的基本類型：（1）細(xì)胞內(nèi)的個別染色體增加或減少，如21三體綜合征，患者比正常人多了一條21號染色體。（2）細(xì)胞內(nèi)的染色體數(shù)目以染色體組的形式增加或減少?！驹斀狻垦巡榘閄隱性遺傳病，正常情況下，女性患者需要滿足兩條X染色體上都是隱性基因時才患病，而Turner綜合征的女性患者更容易患血友病，說明很有可能是少一條X染色體，B正確，故選B。2、C【解析】

體液免疫過程為：（1）除少數(shù)抗原可以直接刺激B細(xì)胞外，大多數(shù)抗原被吞噬細(xì)胞攝取和處理，并暴露出其抗原決定簇；吞噬細(xì)胞將抗原呈遞給T細(xì)胞，再由T細(xì)胞呈遞給B細(xì)胞；（2）B細(xì)胞接受抗原刺激后，開始進行一系列的增殖、分化，形成記憶細(xì)胞和漿細(xì)胞；（3）漿細(xì)胞分泌抗體與相應(yīng)的抗原特異性結(jié)合，發(fā)揮免疫效應(yīng)。細(xì)胞免疫過程為：（1）吞噬細(xì)胞攝取和處理抗原，并暴露出其抗原決定簇，然后將抗原呈遞給T細(xì)胞；（2）T細(xì)胞接受抗原刺激后增殖、分化形成記憶細(xì)胞和效應(yīng)T細(xì)胞，同時T細(xì)胞能合成并分泌淋巴因子，增強免疫功能。（3）效應(yīng)T細(xì)胞發(fā)揮效應(yīng)。【詳解】A、吞噬細(xì)胞既參與非特異性免疫也參與特異性免疫，A正確；B、體液免疫中，人體B細(xì)胞受到抗原刺激后，在淋巴因子的作用下，可增殖分化成漿細(xì)胞和記憶B細(xì)胞，B正確；C、過敏反應(yīng)是再次接受相同抗原時所發(fā)生的組織損傷或功能紊亂，C錯誤；D、免疫系統(tǒng)的三大功能是防衛(wèi)、監(jiān)控和清除，D正確。故選C。3、C【解析】

莊子的話意思是“山上的樹木，因長成有用之材，而被人砍伐；膏能燃燒照明而受煎熬；桂樹因為可以吃，所以被人砍伐；漆樹因為可以用，所以被人割皮。人們只知道有用的好處，哪里知道無用的好處?！薄驹斀狻緼、“寇”“煎”“伐”“割”都是為人類所用，其能量流向?qū)θ祟愑幸娴牟糠郑珹正確；B、“膏火自煎”使得生態(tài)系統(tǒng)能量利用率降低，B正確；C、“伐之”不利于生物多樣性的保護，“割之”只是在樹上割開口子，漆樹依然可以生長，對生物多樣性保護無影響，C錯誤；D、“無用之用”指生物多樣性的間接價值和潛在價值，D正確。故選C。4、B【解析】

由圖可知，圖中為一對同源染色體，1與2、5與6、3與4、7與8為相同基因，1(或2)與3（或4）可能是等位基因，5(或6)與7（或8）可能是等位基因?！驹斀狻緼、根據(jù)以上分析可知，1與2為相同基因，1與3、4可能為等位基因，1與6、7、8互為非等位基因，A錯誤；B、精原細(xì)胞有絲分裂前期與其進行減數(shù)分裂時形成的初級精母細(xì)胞含有的染色體的數(shù)目和基因種類、數(shù)目均相同，均含有基因1~8，B正確；C、在不考慮交叉互換的情況下，1與2在減數(shù)第二次分裂分離，1與3在減數(shù)第一次分裂分離，C錯誤；D、根據(jù)以上分析已知，6與5相同，因此1與6形成的不是重組類型的配子，D錯誤。故選B。5、D【解析】

一株白花植株和一株紫花植株雜交，F(xiàn)1中僅有白花和紅花植株，由此可推知親本的基因型組合為AaBB×aabb。F1白花基因型為AaBb，紅花基因型為aaBb?！驹斀狻緼、由分析可知，親本白花植株的基因型為AaBB，A錯誤；B、F1中白花植株和紅花植株的比例為1∶1，B錯誤；C、F1中紅花植株（aaBb）自交產(chǎn)生的后代會出現(xiàn)紅花和紫花兩種植株，C錯誤；D、F1中的兩種植株（AaBb×aaBb）雜交，產(chǎn)生的后代中紫花植株（aabb）所占比例為1/2×1/4=1/8，D正確。故選D。6、C【解析】

密碼子共用64種，包括2種起始密碼子、3種終止密碼子和59種其他密碼子，其中起始密碼子不僅可以作為翻譯開始的信號，還能編碼相應(yīng)的氨基酸；3種終止密碼子只是終止翻譯的信號，不編碼氨基酸；59種其他密碼子只編碼相應(yīng)的氨基酸?！驹斀狻緼、密碼子是由三個相鄰的堿基組成，271個堿基和后面2個堿基一起共構(gòu)成91個密碼子，插入的70個核苷酸和后面2個堿基一起共構(gòu)成24個密碼子，后面是UGA，即為終止密碼，A正確；B、終止密碼表示翻譯結(jié)束，但不編碼氨基酸，突變基因轉(zhuǎn)錄成的mRNA中能編碼氨基酸的堿基有（271+2+70+2）＝345個，所以表達(dá)的蛋白質(zhì)含有115個氨基酸，B正確；C、題干中該生物是細(xì)菌，沒有線粒體結(jié)構(gòu)，C錯誤；D、DNA復(fù)制需解旋酶、DNA聚合酶等酶，D正確。故選C。密碼子在mRNA上，反密碼子在tRNA上，遺傳信息在DNA上。二、綜合題：本大題共4小題7、細(xì)胞膜上載體的種類和數(shù)量不同葉綠素細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)、線粒體t2降低240降低【解析】

（1）植物根尖細(xì)胞吸收無機鹽離子的方式是主動運輸，需要載體、消耗能量。由于植物細(xì)胞膜上載體的種類和數(shù)量不同，所以植物根尖細(xì)胞對培養(yǎng)液中不同無機鹽離子的吸收具有選擇性。鎂是合成葉綠素的必需元素，所以用缺鎂的完全培養(yǎng)液培養(yǎng)，葉肉細(xì)胞內(nèi)葉綠素合成減少，從而影響植物對光的吸收。（2）由于根尖細(xì)胞內(nèi)沒有葉綠體，所以在光下，根尖細(xì)胞也只能進行呼吸作用，因而細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生[H]的場所有細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)和線粒體。（3）曲線中t1～t4時段，玻璃罩內(nèi)CO2濃度最高點和最低點依次是t2和t4。t4時補充CO2，二氧化碳固定加快，五碳化合物的消耗加快，短時間內(nèi)其生成速率不變，最終導(dǎo)致葉綠體內(nèi)C5的含量降低。（4）根據(jù)測量結(jié)果t4時玻璃罩內(nèi)O2的量與t0時相比增加了256mg，此時植株積累葡萄糖的量為256÷192×180=240mg。若t5時溫度升高至35℃，由于圖示光合作用的適宜溫度是25℃，所以植株光合作用速率的變化是降低。8、磷脂雙分子層免疫預(yù)防記憶細(xì)胞特異遺傳物質(zhì)是單鏈RNA，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，容易發(fā)生變異自身免疫【解析】

1.流感病毒在脫離宿主細(xì)胞時將部分細(xì)胞膜包裹于自身形成包膜，包膜含有蛋白質(zhì)和磷脂，排列方式雙層。2.記憶細(xì)胞具有很長時間記憶該抗原特點的功能，當(dāng)抗原再次侵入機體后，會刺激記憶細(xì)胞增殖分化成漿細(xì)胞，產(chǎn)生大量抗體消滅抗原?！驹斀狻浚?）包膜是病毒從宿主細(xì)胞的細(xì)胞膜中獲得的，則包膜的基本骨架是磷脂雙分子層。（2）注射疫苗屬于免疫預(yù)防，在流行季節(jié)前接種一次，免疫力可持續(xù)一年，這是由于接種后機體產(chǎn)生了記憶細(xì)胞，當(dāng)流感病毒在接種成功后再入侵，機體更快產(chǎn)生大量抗體、效應(yīng)T細(xì)胞（和記憶細(xì)胞），因而可以有效清除病毒。（3）接種流感疫苗的人，仍然有可能得普通感冒，這是由于疫苗的作用具有特異性，只能針對流感病毒起作用。由于流感病毒的遺傳物質(zhì)是單股負(fù)鏈RNA，結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，容易發(fā)生基因變異，則即使曾經(jīng)得過流感并痊愈的人，也較容易再次感染。（4）使用傳統(tǒng)疫苗后偶見局部疼痛、紅腫等副作用，研究發(fā)現(xiàn)副作用易發(fā)人群體內(nèi)的抗體較易攻擊自身正常組織細(xì)胞，這屬于自身免疫病。本題以病毒為背景考查病毒的結(jié)構(gòu)和免疫的知識點，要求學(xué)生掌握病毒的一般結(jié)構(gòu)組成，能夠根據(jù)題意推導(dǎo)包膜的基本骨架，把握免疫學(xué)的應(yīng)用，特別是免疫預(yù)防的應(yīng)用，理解注射疫苗的作用，能夠根據(jù)RNA病毒的特點分析注射疫苗或者患病痊愈的人仍然再次患病的原因，識記免疫失調(diào)的種類和實例。9、果實RNAXbalBamHl和Sacl反向卡那霉素不能番茄細(xì)胞內(nèi)本來存在ACC合成酶基因，能與ACC合成酶基因探針發(fā)生分子雜交【解析】

分析題意和題圖：番茄細(xì)胞中原有靶基因控制合成的ACC氧化酶和ACC合成酶是番茄細(xì)胞合成乙烯的兩個關(guān)鍵酶。圖1所示為反義基因轉(zhuǎn)錄成的RNA可與靶基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA形成RNA雙鏈，使靶mRNA不能與核糖體結(jié)合或被RNA酶降解，從而阻止了ACC氧化酶和ACC合成酶的合成，影響細(xì)胞中乙烯的合成，使番茄具有耐儲存、宜運輸?shù)膬?yōu)點。圖2所示的基因表達(dá)載體的組成包括復(fù)制原點、啟動子、終止子、標(biāo)記基因和目的基因，目的基因插入點在啟動子和終止子之間?！驹斀狻浚?）乙烯具有促進果實成熟的作用，因此圖2中的2A11為特異性啟動子，則2A11應(yīng)在番茄的果實中表達(dá)。（2）從番茄成熟果實中提取RNA為模板，利用反轉(zhuǎn)錄法合成ACC氧化酶基因和ACC合成酶基因，以進行拼接構(gòu)成融合基因并擴增。（3）合成出的ACC氧化酶基因兩端分別含限制酶BamHⅠ和XbaⅠ的酶切位點，ACC合成酶基因兩端含SacⅠ和XbaⅠ的酶切位點，要將兩個基因融合，需用同一種限制酶即XbaⅠ酶對上述兩個基因進行酶切，再用DNA連接酶串聯(lián)成融合基因，這樣融合基因上有三個限制酶切點：BamHⅠ、XbaⅠ、SacⅠ，其中限制酶BamHⅠ、SacⅠ分別位于融合基因的兩端，因此相應(yīng)的Ti質(zhì)粒應(yīng)用限制酶BamHl和Sacl進行切割，確保融合基因能夠插入載體中。（4）反義融合基因是由番茄果實細(xì)胞中的靶基因轉(zhuǎn)錄出的mRNA反轉(zhuǎn)錄形成的，因此為了實現(xiàn)圖1中反義基因的效果，應(yīng)將融合基因反向插入在啟動子2A11的下游即可構(gòu)成反義融合基因。將表達(dá)載體與農(nóng)桿菌菌液混合后，接種在含有卡那霉素的培養(yǎng)基中，可篩選出含有反義融合基因的農(nóng)桿菌，再利用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法獲得轉(zhuǎn)基因番茄。（5）在檢測番茄細(xì)胞中是否存在反義融合基因時，因為番茄細(xì)胞內(nèi)本來存在ACC合成酶基因，能與ACC合成酶基因探針發(fā)生分子雜交，所以不能用放射性物質(zhì)標(biāo)記的ACC氧化（合成）酶基因片段做探針進行檢測。解答本題的關(guān)鍵是：1.讀取題干信息，結(jié)合題圖1，弄清反義基因是如何形成的。2.反義mRNA和靶mRNA實質(zhì)上是分別由靶基因的兩條鏈為模板轉(zhuǎn)錄而來。3.結(jié)合題圖和題意分析融合基因為何是反向插入在啟動子2A11的下游。10、載體（或質(zhì)粒）限制顯微注射新霉素和丙氧鳥苷DNA分子雜交液氮（或冷凍）生理狀態(tài)相同（或經(jīng)同期發(fā)情處理）生殖細(xì)胞【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)；個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等?！驹斀狻浚?）分析題圖可知，將目的基因和與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源的DNA片段都重組到載體（或質(zhì)粒）上，構(gòu)建打靶載體（基因表達(dá)載體）。（2）打靶載體測序驗證正確后，利用限制酶，將之線性化，以提高重組率。通過顯微注射技術(shù)導(dǎo)入胚胎干細(xì)胞，這樣打靶載體與細(xì)胞內(nèi)靶基因同源的區(qū)段就有幾率發(fā)生同源重組。（3）neor是新霉素抗性基因，tk基因的表達(dá)可以使無毒的丙氧鳥苷代謝為毒性物質(zhì)，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，因此為了篩選發(fā)生同源重組的細(xì)胞，可在培養(yǎng)液中加入新霉素和丙氧鳥苷。最后還需要通過DNA分子雜交技術(shù)鑒定同源重組的細(xì)胞（去除靶基因），將這樣的細(xì)胞通過動物細(xì)胞（或克?。┡囵B(yǎng)后，獲得大量打靶成功的細(xì)胞。其中，暫時不用的細(xì)胞進行液氮（或冷凍）保存。（4）將打靶成功的細(xì)胞注射入小鼠囊胚，移植到同種、生理狀態(tài)相同（或經(jīng)同期發(fā)情）的母鼠體內(nèi)，一段時間后對受體母鼠進行妊娠檢查，確保其生下嵌合