高中生物選修一--分解纖維素的微生物的分離

1、纖維素分解微生物的分離纖維素酶纖維素酶是一種復(fù)合酶，通常被認(rèn)為至少包括三種成分，即C1酶(核酸外切酶)、CX酶(內(nèi)切酶)和葡萄糖苷酶。前兩種酶將纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。取兩個(gè)20毫升試管，實(shí)驗(yàn)：纖維素酶分解纖維素的實(shí)驗(yàn)，加入一個(gè)濾紙條，分別加入11毫升和10毫升的pH4.8和0.1毫升/升的醋酸鈉緩沖液，向第二個(gè)試管中加入1毫升纖維素酶，將兩個(gè)試管固定在錐形瓶中，在搖床上以140轉(zhuǎn)/分鐘的速度搖動(dòng)1小時(shí)。結(jié)果：第二個(gè)試管的濾紙條試管的功能是什么？建議本實(shí)驗(yàn)的自變量是纖維素酶是否存在。操作方法是在一個(gè)試管中加入適量(1mL)的纖維素酶溶液，而不是在另一個(gè)試管中加入纖

2、維素酶，但需要加入等量的緩沖液代替蒸餾水，否則溶液的酸堿度會(huì)受到影響。實(shí)驗(yàn)分析：P27的小實(shí)驗(yàn)如何構(gòu)成對(duì)照？根據(jù)是否產(chǎn)生透明圈，可以篩選纖維素分解菌，并分析培養(yǎng)基的組成。在以尿素為氮源的選擇性培養(yǎng)基上鋪展細(xì)菌，在以纖維素粉為碳源的選擇性培養(yǎng)基上鋪展細(xì)菌，固體培養(yǎng)基，液體培養(yǎng)基，篩選菌株，選擇性培養(yǎng)，思考：本實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)過程與主題2的實(shí)驗(yàn)過程有何異同？在第二個(gè)任務(wù)中，從土壤樣品制備的細(xì)菌懸液直接包被在以尿素為唯一氮源的選擇性培養(yǎng)基上，并直接分離菌落。在本課題中，通過選擇性培養(yǎng)使纖維素分解細(xì)菌增殖，然后將細(xì)菌溶液涂布在選擇性培養(yǎng)基上。其他步驟基本相同。根據(jù)受試者1的稀釋操作方法，將選擇性培養(yǎng)后的培養(yǎng)

3、基稀釋101107倍。3。梯度稀釋，4。將樣品涂布在用于鑒定纖維素分解細(xì)菌的培養(yǎng)基上，(1)制備鑒定培養(yǎng)基3360，(2)涂布平板：將0.1毫升稀釋度為104，106的細(xì)菌懸浮液涂布在平板培養(yǎng)基上，并倒置培養(yǎng)基30。鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基，(水溶性羧甲基纖維素鈉)，方法1:首先加入剛果紅進(jìn)行顯色反應(yīng)。方法2:同時(shí)加入剛果紅。培養(yǎng)微生物，倒平板，5。剛果紅染色法，選擇產(chǎn)生透明圈的菌落，一般是分解纖維素的菌落。這兩種方法的優(yōu)缺點(diǎn)是什么？顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解細(xì)菌的功能。剛果紅將導(dǎo)致殖民地的混合。操作簡(jiǎn)單，不存在菌落混合問題。1.產(chǎn)淀粉酶的微生物也會(huì)產(chǎn)生模糊透明的圓圈。2.一些微生物可以降解色

4、素并形成明顯的透明圈。在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的脲酶將尿素分解成氨，這將提高培養(yǎng)基的堿度和提高其酸堿度。將酚紅指示劑加入培養(yǎng)基中。如果酸堿度上升，指示劑會(huì)變紅，剛果紅會(huì)與纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解時(shí)，紅色復(fù)合物不能形成，以纖維素分解菌為中心的透明圓會(huì)出現(xiàn)在培養(yǎng)基上。觀察菌落周圍是否有有色環(huán)來(lái)鑒別尿素分解菌，觀察菌落周圍是否有透明環(huán)來(lái)篩選纖維素分解菌。脲酶檢測(cè)，剛果紅染色，在有明顯透明圈的菌落中，挑取接種于纖維素分解菌的選擇性培養(yǎng)基上，在300-370培養(yǎng)，得到純化培養(yǎng)物。6.凈化和培養(yǎng)。為了確認(rèn)分離的纖維素分解細(xì)菌是，需要_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _實(shí)驗(yàn)。纖維素酶的發(fā)酵方法有_ _ _ _ _ _發(fā)酵和_ _ _ _ _ _發(fā)酵。纖維素酶的測(cè)定方法是定量測(cè)定_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _