微生物學(xué) 實驗1普通光學(xué)顯微鏡的使用及細菌形態(tài)的觀察

1、實驗一普通光學(xué)顯微鏡的使用及細菌形態(tài)的觀察，主要有：文晴生命學(xué)學(xué)院，2020/7/15，實驗課的要求，制圖要求：實驗報告用藍色或黑色的鋼筆、圓珠筆或簽字筆作成，用鉛筆作成(包括視野、觀察結(jié)果、倍率等)。 值班要求：四人一組，包括退貨、黑板、地面、柜臺等，值班結(jié)束后經(jīng)老師同意可以離開。 一、實驗?zāi)康牧私怙@微鏡的結(jié)構(gòu)和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用方法學(xué)習(xí)油鏡的原理和使用方法，掌握并觀察細菌的三種基本形態(tài)，目鏡、鏡筒、轉(zhuǎn)換器、物鏡、通光孔、聚光器、壓板回形針、反射鏡、鏡座、粗準焦螺旋、細焦點，以及普通光學(xué)顯微鏡的基本實驗原理：顯微鏡的工作原理，物鏡上的標識牌，顯微鏡的總倍率=物鏡倍率x目鏡倍率，油

2、鏡的倍率可達100，倍率這一大透鏡，焦距長度短，直徑小，但所需照度最大。從低倍鏡向高倍鏡移動時，通過增加照明強度、增大虹膜光圈，來增大高倍鏡及油鏡下視野的亮度。 從標本的玻璃板透過來的光線，根據(jù)介質(zhì)密度(從玻璃板進入空氣，進入鏡頭)，一部分光線由于折射和全內(nèi)反射不能進入鏡頭，使用油鏡入射的光線很少，物體像不清楚。 為了不損害通過的光，使用油鏡時，在油鏡和玻璃板之間必須加入接近玻璃折光率的鏡油(通常使用瀝青膠，其折光率為n=1.52 )。 增加視野的入光量，使物像更鮮明。 顯微鏡的極限分辨率和極限分辨率(resolution or resolving power )是指顯微鏡能夠判別兩點間的最小

3、距離的能力。 從物理上看，光學(xué)顯微鏡的極限分辨率受光的干涉現(xiàn)象和所使用的物鏡鏡頭性能的限制可以表示為，式中，D=顯微鏡極限分辨率2點間的最短距離=光波波長(平均0.55m) NA=物鏡的數(shù)值孔徑。 顯微鏡的性能、數(shù)值孔徑取決于物鏡的鏡角和玻璃板與透鏡之間介質(zhì)的折光率，NA=n sin(/2) n:可表示為物鏡與被檢體之間介質(zhì)的折光率：鏡嘴角。 以香柏油為介質(zhì)的油鏡能夠達到的數(shù)值孔徑(NA通常為1.21.4 )高于低倍鏡、高倍鏡等物鏡(NA均小于1.0 )。 數(shù)值孔徑通常為0.65左右的高倍鏡只能識別距離為0.4m以上的物體，但油鏡的極限分辨率可達到0.2m左右。三、實驗器材1、標本片：四聯(lián)球菌

4、、枯草芽孢桿菌2、試劑：瀝青膠、混合二甲苯3、儀器及其他用具：顯微鏡、擦鏡紙等，四、實驗步驟1、顯微鏡觀察步驟1 )低倍鏡觀察(10 ) :打開電源， 打開顯微鏡的電源開關(guān)3 .將低倍鏡移動到鏡筒正下方的旋轉(zhuǎn)變換器4 .一邊調(diào)節(jié)光源的強度，一邊對準目鏡，仔細觀察，視野亮度均勻5 .將標本放置在載物臺上，旋轉(zhuǎn)促動器，使觀察的目標物位于圓孔的正中間7 .用左眼觀察目鏡，調(diào)節(jié)粗的、細的準焦點螺旋，直到目標物清晰為止。(注意：用眼睛注視物鏡，以免物鏡與載玻片碰撞。) 、用高倍鏡的操作轉(zhuǎn)換物鏡。 旋轉(zhuǎn)變換器將低倍鏡變換成高倍鏡(注意：變換物鏡時，為了避免透鏡和標本片碰撞，從側(cè)面觀察，如果高倍鏡接觸標本片

5、，請立即停止旋轉(zhuǎn)，用低倍鏡重新對焦)對焦。 調(diào)節(jié)光圈，使光的亮度變得適當(dāng)，然后調(diào)節(jié)細的標準焦點螺旋直到目標物清晰為止進行觀察。移動促動器，找到合適的目標物，移動到視野中心進行觀察。 (高倍鏡看不到目標物的話，可以更換油鏡進行觀察)，切換油鏡的操作1 .油鏡。 調(diào)節(jié)粗對準螺旋，載物臺下降約2 cm，切換油鏡鏡頭2 .加香瀝青膠。 從樣品片的鏡檢部滴下瀝青膠的側(cè)面看，用粗的準焦點螺旋慢慢抬起載物臺，將油透鏡浸泡在油中，正好接近載玻片3 .對焦。 使聚光器上升，使虹膜光圈大幅打開，緩慢調(diào)節(jié)細微的準焦點螺旋，直至一盞茶上照明的物體像清晰為止。 4 .觀察。 多觀察一些視野，選擇菌體分布均勻的視野進行菌體形態(tài)和序列方式的觀察。 2、將顯微鏡用完畢后的處理光強度調(diào)節(jié)到最弱，拔掉電源開關(guān)，降低電源插頭，降低載物臺，漂亮地擦拭鏡頭上的瀝青膠，沾一點混合二甲苯，擦拭鏡頭上的剩馀油跡，擦拭剩馀的混合二甲苯，使顯微鏡的各部分恢復(fù)原狀，使物鏡“八” 擦拭鏡體、五、實驗數(shù)據(jù)及處理結(jié)果，繪出油鏡下觀察的兩種細菌的形態(tài)及不同的細菌細胞球的排列方式。 四聯(lián)球菌(10100 )桿菌120(10100 )，六、思考和討論用油鏡觀察時應(yīng)注意的問題是什么？在載玻片和鏡片之間注入什么油？ 起什么作用？