實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求培訓(xùn)班(ppt 112頁(yè))

1、GB-19489 2004-實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求培訓(xùn)班,中國(guó)CDC傳染病所 聯(lián)系電話：01061739439 Email:xiwenlongICDC.com,什么是生物危險(xiǎn),生物危險(xiǎn)是指由生物因子形成潛在的危險(xiǎn)，當(dāng)在實(shí)驗(yàn)室中處理致病微生物時(shí)，或處理基因重組過(guò)程中產(chǎn)生的可能具有潛在生物危害的新未知基因時(shí)，或在處理致病因子的產(chǎn)物時(shí)，這些病原體有可能對(duì)實(shí)驗(yàn)室的工作人員造成危害。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室硬件條件缺失、管理制度不完善以及不規(guī)范的操作程序，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室致病因子泄漏和逃逸。則可能造成災(zāi)難性的后果。,什么是生物安全,生物安全是指避免危險(xiǎn)生物因子造成實(shí)驗(yàn)室人員暴露、向?qū)嶒?yàn)室外擴(kuò)散并導(dǎo)致危害的綜合措施。,什么是生

2、物安全實(shí)驗(yàn)室,生物安全實(shí)驗(yàn)室是指在研究傳染性疾病或微生物時(shí)能夠避免病原體意外傷害的實(shí)驗(yàn)室,氣溶膠感染主要途徑,吸球（即吸管）操作。吸球是微生物學(xué)方面最基本的器具，用吸球操作時(shí)，能導(dǎo)致氣溶膠發(fā)生，例如由吸管中向外排液，用力過(guò)猛則會(huì)使液滴飛濺，彈離液體或固體培養(yǎng)基表面，釋放出大量微粒；或者，當(dāng)吸管末端含有物快排盡時(shí)，可能產(chǎn)生氣泡，尤其是富于蛋白性懸液更易形成氣泡，而氣泡破裂就成為氣溶膠。 離心沉淀時(shí)，沉淀管裝量太滿，管蓋未蓋或不嚴(yán)，以及離心操作過(guò)操作過(guò)程中離心管破裂，都可導(dǎo)致氣溶膠散播。,氣溶膠感染主要途徑,注射器操作時(shí)，當(dāng)抽吸后或者撥出時(shí)，注射器針頭由于顫動(dòng)而散發(fā)出液體微粒。 用接種針去粘沾液體

3、時(shí)，液柱斷裂。 鏡檢涂片時(shí)，液絲斷裂。 傳染性材料傾注出來(lái)。 打開培養(yǎng)皿蓋時(shí)，蓋內(nèi)壁往往有傳染性的凝結(jié)水薄膜，因破裂而散播氣溶膠。,氣溶膠感染主要途徑,開安瓿時(shí)，如瓿內(nèi)為液體，則當(dāng)銼刀銼斷瓿頸后，即可能發(fā)生氣溶膠；如瓿內(nèi)為干燥的活菌或菌種，特別是用真空熔封的，更易產(chǎn)生溶膠。 機(jī)械振蕩和超聲振蕩，或者研磨、浸解，撥出研磨柱時(shí)，都可形成氣溶膠。 裝有液體容器的破損或液體益出。 用超聲波清洗機(jī)清洗污染器具時(shí)，也可能發(fā)生大量氣溶膠。 在粗糙的培養(yǎng)基表面涂布菌液時(shí)。 高壓滅菌器在滅菌前的排氣。 從玻璃或離心管上撥出棉塞時(shí)。 處理關(guān)過(guò)受感染動(dòng)物的籠子。,各種操作的氣溶膠飛散系數(shù),各種操作的氣溶膠飛散系數(shù),

4、各種操作的氣溶膠飛散系數(shù),各種操作的氣溶膠飛散系數(shù),可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法,可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法,可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法,可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法,可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法,可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法,可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法,可能產(chǎn)生危險(xiǎn)的設(shè)備和操作方法,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,實(shí)驗(yàn)室事故、傷害以及與工作有關(guān)的感染主要是由于人為失誤、不良實(shí)驗(yàn)技術(shù)以及儀器使用不當(dāng)造成的，實(shí)驗(yàn)室樣品的收集以及內(nèi)部傳遞和接收不當(dāng)時(shí)，都能夠帶來(lái)使相關(guān)人員感染的危險(xiǎn)。應(yīng)建立完善的管理制度與操作細(xì)則，避免或盡量減少這類問(wèn)題的發(fā)生。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,樣品容器

5、樣品容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品。樣品容器應(yīng)當(dāng)堅(jiān)固，正確地用蓋子或塞子蓋好后應(yīng)無(wú)泄漏。在容器外部不能有殘留物。容器上應(yīng)當(dāng)正確地張貼標(biāo)簽以便于識(shí)別。樣品的要求或說(shuō)明書不能夠卷在容器外面，而是要分開放置，最好放置在防水的袋子里。樣品在設(shè)施內(nèi)的傳遞為了避免意外泄漏或溢出，應(yīng)當(dāng)使用盒子等二級(jí)容器，并將其固定在架子上使裝有樣品的容器保持直立。二級(jí)容器可以是金屬或塑料制品，應(yīng)該可以耐高壓滅菌或耐受化學(xué)消毒劑的作用。密封口最好有一個(gè)墊圈，要定期清除污染。 樣品接收 需要接收大量樣品的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)當(dāng)指定專門的房間或空間。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,包裝開啟 接收和打開樣品的人員應(yīng)當(dāng)了解樣品對(duì)身體健

6、康的潛在危害，并接受過(guò)如何采用常規(guī)預(yù)防措施的培訓(xùn)，尤其是處理破碎或泄漏的容器時(shí)更應(yīng)如此。樣品要在生物安全柜內(nèi)打開，并準(zhǔn)備好消毒劑。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,移液管和移液輔助器的使用 1應(yīng)使用移液輔助器，嚴(yán)禁用口吸取。 2所有移液管應(yīng)帶有棉塞以減少移液器具的污染。 3不能向含有感染性物質(zhì)的溶液中吹人氣體。 4感染性物質(zhì)不能夠用移液管反復(fù)吹吸混合。 5不能將液體從移液管內(nèi)用力吹出。 6刻度對(duì)應(yīng)(Marktomark)移液管不需要吹出最后一滴液體，因此最好使用這種移液管。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,移液管和移液輔助器的使用 7污染的移液管應(yīng)該完全浸泡在盛有適當(dāng)消毒液的防碎容器中。移

7、液管應(yīng)當(dāng)在消毒劑中浸泡18，24小時(shí)后再進(jìn)行處理。 8盛放廢棄移液管的容器應(yīng)當(dāng)放在生物安全柜內(nèi)，而不能放在外面。 9固定有皮下注射針頭的注射器不能夠用于移液。應(yīng)當(dāng)用鈍頭導(dǎo)管替代針頭?？梢杂霉ぞ叽蜷_瓶塞后再用移液管取樣，從而避免使用注射器和針頭。 10為了避免感染性物質(zhì)從移液管中意外滴出而擴(kuò)散，在工作臺(tái)面應(yīng)當(dāng)放置一塊浸有消毒液的布或吸有消毒液的紙，使用后將其高壓滅菌或按感染性廢物處理。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,避免感染性物質(zhì)的擴(kuò)散 1為了避免轉(zhuǎn)移物質(zhì)灑落，微生物接種環(huán)的直徑應(yīng)為23mm并完全封閉，手柄(shanks)的長(zhǎng)度應(yīng)小于6cm以減小振動(dòng)?；蛘卟捎靡淮涡詼缇藓?。 2使用封閉式微

8、型電加熱器消毒接種環(huán)能夠避免在本生燈的明火上加熱所引起的感染性物質(zhì)爆濺。最好使用不需要再進(jìn)行消毒的一次性接種環(huán)。 3為了避免產(chǎn)生氣泡和氣溶膠的擴(kuò)散，不要在玻片上進(jìn)行觸酶試驗(yàn)，而應(yīng)當(dāng)采用試管、毛細(xì)管或蓋玻片法。 4準(zhǔn)備高壓滅菌和或處理的廢棄樣品和培養(yǎng)物應(yīng)當(dāng)放置在防漏的容器內(nèi)，如實(shí)驗(yàn)室廢物袋。 5在每一階段工作結(jié)束后，必須采用適當(dāng)?shù)南緞┣宄ぷ鲄^(qū)的污染。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,生物安全柜的使用 1應(yīng)參考國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)文獻(xiàn)，介紹生物安全柜的使用方法和局限性。并發(fā)給工作人員書面的操作步驟、安全或操作手冊(cè)。應(yīng)明確注明當(dāng)出現(xiàn)溢出、破損或不良操作時(shí)，安全柜就不再能保護(hù)操作者。 2生物安全柜必須

9、運(yùn)行正常時(shí)才能使用。 3生物安全柜在使用中不能打開玻璃觀察擋板。 4安全柜內(nèi)應(yīng)盡量少放置器材或樣品，不能阻礙后部的氣流循環(huán)。樣品在放人安全柜內(nèi)的工作區(qū)前需要清除表面污染。 5安全柜內(nèi)不能使用酒精燈，否則燃燒產(chǎn)生的熱量會(huì)干擾氣流并可能損壞過(guò)濾器。允許使用微型電加熱器，但最好使用一次性無(wú)菌接種環(huán)。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,生物安全柜的使用 6所有工作必須在工作臺(tái)面的中后部進(jìn)行，并能夠通過(guò)觀察擋板看到。 7盡量減少操作者身后的人員流動(dòng)。 8操作者不應(yīng)反復(fù)移出和伸進(jìn)手臂以免干擾氣流。 9實(shí)驗(yàn)記錄、移液管以及其他物品不能夠阻礙前面的空氣格柵，因?yàn)檫@將干擾氣體流動(dòng)，引起物品的潛在污染和操作者的暴

10、露。 10工作完成后以及每天下班前，應(yīng)使用適當(dāng)?shù)南緞?duì)生物安全柜的表面進(jìn)行擦拭。 11工作開始前和結(jié)束后，安全柜的風(fēng)機(jī)應(yīng)至少運(yùn)行5分鐘。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,避免感染性物質(zhì)的注入 1通過(guò)認(rèn)真練習(xí)和仔細(xì)操作，可以避免破碎玻璃器皿的意外刺傷。盡可能用塑料制品代替玻璃制品。 2皮下注射針頭、玻璃吸管以及破碎的玻璃均可能將感染性物質(zhì)注入體內(nèi)。 3以下兩點(diǎn)可以減少針刺事故： (a)注射時(shí)特別小心 (b)減少使用注射器和針頭；許多操作可用帶 有鈍頭導(dǎo)管的注射器替代?？捎靡恍┖?jiǎn)單的裝置來(lái)打開瓶塞，然后使用吸管取樣。 4不要重新給用過(guò)的針頭戴護(hù)套。 一次性注射器用完后，不必將針頭從注射器上取下

11、，應(yīng)丟棄在防穿透的帶蓋容器中。 5應(yīng)當(dāng)用塑料吸管代替玻璃吸管。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,血清的分離 1只有經(jīng)過(guò)嚴(yán)格培訓(xùn)的人員才能進(jìn)行這項(xiàng)工作。 2操作時(shí)應(yīng)戴手套以及眼睛和黏膜的保護(hù)裝置。 3規(guī)范的實(shí)驗(yàn)操作技術(shù)可以避免或盡量減少噴濺和氣溶膠的產(chǎn)生。血液和血清應(yīng)當(dāng)小心吸取，而不能傾倒。嚴(yán)禁用口吸液。 4移液管使用后應(yīng)完全浸入次氯酸鹽或其他適當(dāng)?shù)南疽褐?。移液管?yīng)在消毒液中浸泡至少18小時(shí)，然后再丟棄或滅菌清洗后重復(fù)使用。 5帶有血凝塊等的廢棄樣品管，在加蓋后應(yīng)當(dāng)放在適當(dāng)?shù)姆缆┤萜鲀?nèi)高壓滅菌和或焚燒。6為了清洗噴濺和溢出的血樣，應(yīng)當(dāng)備有每天新鮮配制的次氯酸鹽溶液。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作

12、技術(shù)規(guī)范,離心機(jī)的使用 1在使用實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)時(shí)，儀器良好的機(jī)械性能是保障微生物安全的前提條件。 2應(yīng)按照操作手冊(cè)來(lái)操作離心機(jī)。 3離心機(jī)放置的高度應(yīng)當(dāng)使低于平均身高的工作人員也能夠看到離心機(jī)腔體內(nèi)部，以正確放置十字軸和離心管套。 4離心管和盛放離心樣品的容器應(yīng)當(dāng)由厚壁玻璃制成，或最好為塑料制品，并且在使用前應(yīng)檢查是否破損。 5用于離心的試管和樣品容器應(yīng)當(dāng)始終牢固蓋緊(最好使用螺旋蓋)。 6離心管套的裝載、平衡、密封和打開必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,離心機(jī)的使用 7離心管套和十字軸應(yīng)按重量配對(duì)，并在裝載離心管后正確平衡。 8操作指南中應(yīng)給出液面距離心管邊緣需要留出

13、的空間大小。 9空離心管套應(yīng)當(dāng)用蒸餾水或乙醇(異丙醇，70)平衡。鹽溶液或次氯酸鹽溶液對(duì)金屬具有腐蝕作用，因此不能使用。 10對(duì)于危險(xiǎn)度3級(jí)和4級(jí)的微生物，必須使用可封口的離心離心管套(安全杯)。 11當(dāng)使用固定角離心轉(zhuǎn)子時(shí)，必須小心不能將離心管裝得過(guò)滿，否則會(huì)導(dǎo)致漏液。 12應(yīng)當(dāng)每天檢查離心機(jī)內(nèi)轉(zhuǎn)子部位的腔壁是否被沾染或弄臟。如污染明顯，應(yīng)重新評(píng)估離心操作規(guī)程。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,離心機(jī)的使用 13應(yīng)當(dāng)每天檢查離心轉(zhuǎn)子和離心管套是否有腐蝕或細(xì)微裂痕。 14每次使用后，要清除離心管套、轉(zhuǎn)子和離心機(jī)腔的污染。 15使用后離心管套應(yīng)當(dāng)?shù)怪么娣攀蛊胶庖毫鞲伞?16當(dāng)使用離心機(jī)時(shí)，可能

14、噴射出可在空氣中傳播的感染性顆粒。如果將離心機(jī)放置在傳統(tǒng)的前開式的I級(jí)或級(jí)生物安全柜內(nèi)，這些粒子由于運(yùn)動(dòng)過(guò)快而不能被安全柜內(nèi)的氣流截留。而在級(jí)生物安全柜內(nèi)封閉離心時(shí)，可以防止生成的氣溶膠廣泛擴(kuò)散。但是，良好的離心操作技術(shù)和牢固加蓋的離心管可以提供足夠的保護(hù)，以防止感染性氣溶膠和可擴(kuò)散粒子的產(chǎn)生。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,勻漿器搖床攪拌器和超聲處理器的使用 1實(shí)驗(yàn)室不能使用家用(廚房)勻漿器，因?yàn)樗鼈兛赡苄孤┗蜥尫艢馊苣z。使用實(shí)驗(yàn)室專用攪拌器和消化器(stomacher)更為安全。 2. 蓋子、杯子或瓶子應(yīng)當(dāng)保持正常狀態(tài)，沒(méi)有裂縫或變形。蓋子應(yīng)能封蓋嚴(yán)密，襯墊也應(yīng)處于正常狀態(tài)。,生物安

15、全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,3在使用勻漿器、搖床和超聲處理器時(shí)，容器內(nèi)會(huì)產(chǎn)生壓力，含有感染性物質(zhì)的氣溶膠就可能從蓋子和容器間隙逸出。由于玻璃可能破碎而釋放感染性物質(zhì)并傷害操作者，建議使用塑料容器，尤其是聚四氟乙烯(po1ytetranuoroe- thylene， PTFE)容器。 4使用勻漿器、搖床和超聲處理器時(shí)，應(yīng)該用一個(gè)結(jié)實(shí)透明的塑料箱覆蓋設(shè)備，并在用完后消毒?？赡艿脑?，這些儀器可在生物安全柜內(nèi)覆蓋塑料罩進(jìn)行操作。 5操作結(jié)束后，應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開容器。 6應(yīng)對(duì)使用超聲處理器的人員提供聽力保護(hù)。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,組織研磨器的使用 1使用玻璃研磨器時(shí)應(yīng)戴手套，并用一塊具

16、有吸收性的軟物包住研磨器。塑料(聚四氟乙烯)研磨器更加安全。 2操作和打開組織研磨器時(shí)應(yīng)當(dāng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,冰箱與冷柜的維護(hù)和使用 1冰箱、低溫冷柜和干冰柜應(yīng)當(dāng)定期除霜和清潔，應(yīng)清理出所有在儲(chǔ)存過(guò)程中破碎的安瓿和試管等物品。清理時(shí)應(yīng)戴厚橡膠手套并進(jìn)行面部防護(hù)，清理后要對(duì)內(nèi)表面進(jìn)行消毒。 2儲(chǔ)存在冰箱內(nèi)的所有容器應(yīng)當(dāng)清楚地標(biāo)明內(nèi)裝物品的學(xué)名、儲(chǔ)存日期和儲(chǔ)存者的姓名。未標(biāo)明的或廢舊物品應(yīng)當(dāng)高壓滅菌并丟棄。 3應(yīng)當(dāng)保存一份凍存物品的清單。 4除非采用有效防爆措施，否則冰箱內(nèi)不能放置易燃溶液并冰箱門上應(yīng)明確標(biāo)示。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,裝有凍干感染性物

17、質(zhì)安瓿的開啟 當(dāng)打開裝有凍干物的安瓿時(shí)必須小心，因?yàn)槠鋬?nèi)部可能處于負(fù)壓，瞬間進(jìn)入的空氣可能使一些物質(zhì)擴(kuò)散進(jìn)入空氣。安瓿應(yīng)該在生物安全柜內(nèi)打開，建議按下列步驟打開安瓿： 1首先清除安瓿外表面的污染。 2如果管內(nèi)有棉花或纖維塞，可以在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡。 3用一團(tuán)酒精浸泡的棉花將安瓿包起來(lái)以保護(hù)雙手，然后手持安瓿從標(biāo)記的銼痕處打開。 4將頂部小心移去并按污染物處理。 5如果塞子仍然在安瓿上，用消毒鑷子除去。 6緩慢向安瓿中加入液體來(lái)重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,裝有感染性物質(zhì)安瓿的儲(chǔ)存 裝有感染性物質(zhì)的安瓿不能浸入液氮中，因?yàn)檫@樣會(huì)造成有裂痕或密封不

18、嚴(yán)的安瓿在取出時(shí)破碎或爆炸。如果需要低溫保存，安瓿應(yīng)當(dāng)儲(chǔ)存在液氮上面的氣相中。此外，感染性物質(zhì)應(yīng)儲(chǔ)存在低溫冰柜或干冰中。當(dāng)從冷凍儲(chǔ)存器中取出安瓿時(shí)，實(shí)驗(yàn)室工作人員應(yīng)當(dāng)進(jìn)行眼睛和手的防護(hù)。以這種方式儲(chǔ)存的安瓿在取出時(shí)應(yīng)對(duì)外表面進(jìn)行消毒。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,樣品的收集、標(biāo)記和運(yùn)輸 1始終遵循常規(guī)預(yù)防措施；所有操作均要戴手套 2應(yīng)當(dāng)由受過(guò)培訓(xùn)的人員來(lái)采集病人或動(dòng)物的血樣。 3在靜脈抽血時(shí)，應(yīng)當(dāng)使用一次性的安全的抽真空設(shè)備取代傳統(tǒng)的針頭和注射器，因?yàn)檫@樣可以使血液直接采集到帶塞的運(yùn)輸管和或培養(yǎng)管中。用完后自動(dòng)廢棄針頭。 4裝有樣品的試管應(yīng)置于適當(dāng)容器中運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室，在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部轉(zhuǎn)運(yùn)也應(yīng)這

19、樣說(shuō)明書應(yīng)當(dāng)分開放置在防水袋或信封內(nèi)。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,玻璃器皿和“銳器” 1盡可能用塑料制品代替玻璃制品。只能用實(shí)驗(yàn)室級(jí)別(硼硅酸鹽)的玻璃，任何破碎或有裂痕的玻璃制品均應(yīng)丟棄。 2不能將皮下注射針作為移液管使用。可以使用鈍頭導(dǎo)管。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,用于顯微觀察的薄膜和涂片 用于顯微觀察的血液、唾液和糞便樣品在固定和染色時(shí)，并不必殺死涂片上的所有微生物和病毒。應(yīng)當(dāng)用鑷子拿取這些東西，恰當(dāng)儲(chǔ)存，并經(jīng)清除污染和或高壓滅菌后再丟棄。 自動(dòng)化儀器(超聲處理器、渦旋混合器) 1為了避免液滴和氣溶膠的擴(kuò)散，這些儀器應(yīng)采用封閉型的。 2排出物應(yīng)當(dāng)收集在封閉的容器內(nèi)進(jìn)一步

20、高壓滅菌和或廢棄。 3，在每一步完成后應(yīng)根據(jù)操作指南對(duì)儀器進(jìn)行消毒。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,組織 1組織樣品應(yīng)當(dāng)采用福爾馬林固定。小塊樣品，如針頭活檢樣品，能夠在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)固定和消毒，但是較大樣品則可能需要幾天時(shí)間。 2應(yīng)當(dāng)避免冰凍切片。如果必須進(jìn)行冰凍切片，應(yīng)當(dāng)罩住冰凍機(jī)，操作者要戴安全防護(hù)罩(面具)。清除污染時(shí)，儀器的溫度要升至20C。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,生物安全實(shí)驗(yàn)室消毒與滅活 消毒和滅菌的基本常識(shí)對(duì)于實(shí)驗(yàn)室生物安全是至關(guān)重要的。生物安全中關(guān)于清除污染的特殊要求要根據(jù)實(shí)驗(yàn)工作的類型和所操作感染性物質(zhì)的特性來(lái)決定。因此，有必要利用已知的普通信息來(lái)確立更具體的和標(biāo)

21、準(zhǔn)化的程序，以滿足某些特殊實(shí)驗(yàn)室中各種不同生物危害水平的需求。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,清除局部環(huán)境的污染 需要聯(lián)合應(yīng)用液體和氣體消毒劑來(lái)清除實(shí)驗(yàn)室空間、用具和設(shè)備的污染。清除表面污染時(shí)可以使用次氯酸鈉(Na0C1)溶液；含有1有效氯的溶液適于普通的環(huán)境衛(wèi)生設(shè)備，但是當(dāng)處理高危環(huán)境時(shí)，建議使用高濃度(5gL)溶液。用于清除環(huán)境污染時(shí)，含有3過(guò)氧化氫的溶液也可以作為漂白劑的代用品?？梢酝ㄟ^(guò)加熱多聚甲醛或煮沸福爾馬林所產(chǎn)生的甲醛蒸氣熏蒸來(lái)清除房間和儀器的污染。產(chǎn)生甲醛蒸氣。前，房間的所有開口(如門窗等)都應(yīng)用密封帶或類似物加以密封。熏蒸應(yīng)當(dāng)在室溫不低于21且相對(duì)濕度70 的條件下進(jìn)行清除

22、污染時(shí)氣體需要與物體表面至少接觸8小時(shí)。熏蒸后，該區(qū)域必須徹底通風(fēng)后才能允許人員進(jìn)入。在通風(fēng)之前需要進(jìn)入房間時(shí)，必須戴適當(dāng)?shù)姆蓝久婢?。?以采用氣態(tài)的碳酸氫銨來(lái)中和甲醛。已有報(bào)道，可采用過(guò)氧化氫溶液的氣霧熏蒸污染的空間，但對(duì)此還需要進(jìn)一步的研究。 注：甲醛是一種危險(xiǎn)和有刺激性的氣體，并懷疑有致癌性。應(yīng)使用具有供氣系統(tǒng)的全面罩式防毒面具。操作時(shí)應(yīng)當(dāng)采用“雙人”制。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,生物安全柜污染的清除 清除I級(jí)和級(jí)生物安全柜的污染時(shí)，應(yīng)當(dāng)將適量的多聚甲醛(空氣中的終濃度達(dá)到08)放在電熱板或電熱盤上(在生物安全柜外進(jìn)行控制)。然后在生物安全柜內(nèi)放置第二個(gè)放有比多聚甲醛多10 的

23、碳酸氫銨的加熱板或盤。第二個(gè)盤上覆蓋一個(gè)能夠從遠(yuǎn)處將其移走的蓋子(如連接一個(gè)能夠從生物安全柜外拉動(dòng)的繩子)，從而盡量減少對(duì)甲醛氣體的提前中和。如果相對(duì)濕度低于70 ，在使用強(qiáng)力膠帶如“管道密封膠帶”(ducttape)密封前部封閉板前，還要在安全柜內(nèi)部放置一個(gè)開口的盛有熱水的容器。如果前部沒(méi)有封閉板，則可以用重型塑料布(heavy gaugeplastic，heeting)粘貼覆蓋在前部以保證氣體不會(huì)泄漏進(jìn)入房間。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,打開多聚甲醛盤的加熱開關(guān)，1小時(shí)后或多聚甲醛完全蒸發(fā)后關(guān)閉。讓生物安全柜靜置過(guò)夜。移去第二個(gè)盤子的蓋后打開加熱開關(guān)，讓碳酸氫銨揮發(fā)。然后，關(guān)閉開關(guān)

24、并啟動(dòng)安全柜讓碳酸氫銨氣體循環(huán)1小時(shí)。移去前封閉板(或塑料布)后就可以使用生物安全柜了。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,洗手清除手部污染 接觸生物危害性材料時(shí)，必須戴合適的手套。但是這并不能代替實(shí)驗(yàn)室人員需要經(jīng)常地、徹底地洗手。接觸過(guò)生物危害性材料和動(dòng)物后、使用過(guò)衛(wèi)生間后、離開實(shí)驗(yàn)室前以及吃東西前都必須洗手。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,大多數(shù)情況下，用普通的肥皂和水徹底沖洗對(duì)于清除手部污染就足夠了。但在高度危險(xiǎn)的情況下，建議使用殺菌肥皂。手要完全抹上肥皂，搓洗至少10秒鐘，用干凈水沖洗后再用干凈的紙巾或毛巾擦干(如果有條件，也推薦使用暖風(fēng)干手器)。 推薦使用腳控或肘控的水龍頭。如果

25、沒(méi)有安裝，應(yīng)使用紙巾或毛巾關(guān)上水龍頭以防止再度污染洗凈的手。如上所述，如果沒(méi)有條件徹底洗手或洗手不方便， 應(yīng)該用酒精擦手來(lái)清除雙手的輕度污染,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,加熱滅菌和消毒 加熱是最常用的清除病原體污染的物理手段。“干”熱沒(méi)有腐蝕性，可用來(lái)處理實(shí)驗(yàn)器材中許多可耐受160C或更高溫度24小時(shí)的物品。燃燒或焚化也是一種干熱方式。高壓滅菌的濕熱法則最為有效。 煮沸并不一定能殺死所有的微生物或病原體，但如果其他方法(化學(xué)殺菌、清除污染、高壓滅菌)不可行或沒(méi)有條件時(shí)，也可以作為一種最起碼的消毒措施。 滅菌后的物品必須小心操作并保存，以保證在使用之前不再被污染。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作

26、技術(shù)規(guī)范,高壓滅菌 壓力飽和蒸汽滅菌(高壓滅菌)是對(duì)實(shí)驗(yàn)材料進(jìn)行滅菌時(shí)最有效和最可靠的方法。對(duì)于大多數(shù)目的，下列組合可以確保正確裝載的高壓滅菌器的滅菌效果： 134、2、3分鐘 126、10分鐘 121、15分鐘 115、25分鐘,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,高壓滅菌器的裝載 為了利于蒸汽的滲透和空氣排出，高壓滅菌物品應(yīng)松散包裝放置在滅菌器內(nèi)。要使蒸汽能夠作用到其內(nèi)容物。通過(guò)高壓滅菌器內(nèi)的蒸汽，由下而上置換空氣并經(jīng)排氣孔排出。當(dāng)所有的空氣排出后，關(guān)閉排氣孔的閥門，緩慢加熱使壓力和溫度上升到安全閥預(yù)置的水平。此時(shí)記為滅菌開始時(shí)間。滅菌結(jié)束后停止加熱，讓溫度下降到80以下再打開蓋子。,生物安

27、全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,高壓滅菌器使用注意事項(xiàng)下列規(guī)定能夠減小操作壓力容器時(shí)會(huì)發(fā)生的危害： 1高壓滅菌器的操作和日常維護(hù)應(yīng)由受過(guò)良好培訓(xùn)的人員負(fù)責(zé)。預(yù)防性的維護(hù)程序應(yīng)包括：由有資質(zhì)人員定期檢查滅菌器內(nèi)部、門的密封性以及所有的儀表和控制器。 2應(yīng)使用飽和蒸汽，并且其中不含腐蝕性抑制劑或其他化學(xué)試劑，這些物質(zhì)可能污染正在滅菌的物品。 3所有要高壓的物品都應(yīng)放在空氣能夠排出并具有良好熱滲透性的容器中；滅菌器內(nèi)不能塞得過(guò)緊，否則蒸汽不能均勻作用于裝載物。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,4當(dāng)滅菌器內(nèi)部加壓時(shí)，互鎖安全裝置可以防止門被打開，而沒(méi)有互鎖裝置的高壓滅菌器，應(yīng)當(dāng)關(guān)閉主蒸汽閥并待溫度下降到

28、80以下時(shí)再打開門。 5即使溫度下降到80以下，操作者打開門時(shí)也應(yīng)當(dāng)戴適當(dāng)?shù)氖痔缀兔嬲謥?lái)進(jìn)行防護(hù)。 6在進(jìn)行高壓滅菌效果的常規(guī)監(jiān)測(cè)中，生物指示 劑或熱電偶計(jì)應(yīng)置于每件高壓滅菌物品的中心。最好在“最大”裝載時(shí)用熱偶計(jì)和記錄儀進(jìn)行定時(shí)監(jiān)測(cè)，以確定滅菌程序是否恰當(dāng)。 7滅菌器的過(guò)濾器(如果有)應(yīng)當(dāng)每天拆下清洗。 8應(yīng)當(dāng)注意保證高壓滅菌器的安全閥沒(méi)有被高壓滅菌物品中的紙等堵塞。,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,焚燒 在處理那些經(jīng)過(guò)或事先未經(jīng)清除污染的動(dòng)物尸體以及解剖組織或其他實(shí)驗(yàn)室廢物時(shí)，焚燒是一種有效的方法。只有在實(shí)驗(yàn)室可以控制焚燒爐，并且能夠有效地控制溫度和配備了二級(jí)焚燒室時(shí)，才能用焚燒代替高壓

29、滅菌來(lái)處理感染性物質(zhì)。焚燒也是一種處理被朊蛋白污染物品的有效方法,生物安全實(shí)驗(yàn)室微生物操作技術(shù)規(guī)范,需要焚燒的材料(即使事先已清除污染)應(yīng)當(dāng)用袋子運(yùn)送到焚燒室，最好使用塑料袋。負(fù)責(zé)焚燒的工作人員應(yīng)當(dāng)接受關(guān)于如何裝載和控制溫度等的正確指導(dǎo)。還需要注明的是，焚燒爐的操作是否有效主要取決于對(duì)需要處理的廢物中物品的正確混合。,危險(xiǎn)度評(píng)估,危險(xiǎn)評(píng)價(jià)首先集中在實(shí)驗(yàn)室相關(guān)感染的防御上。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)涉及傳染或潛在傳染因子時(shí)，對(duì)某一個(gè)特定的操作程序或?qū)嶒?yàn)進(jìn)行危險(xiǎn)度評(píng)估，危險(xiǎn)評(píng)價(jià)幫助正確選擇生物安全水平(設(shè)施、設(shè)備和操作)，評(píng)估職業(yè)性疾病風(fēng)險(xiǎn)、采取相應(yīng)安全防護(hù)措施、減少危險(xiǎn)性事件發(fā)生。,危險(xiǎn)度評(píng)估,在進(jìn)行危險(xiǎn)性的

30、評(píng)估和選擇安全防護(hù)措施時(shí)，應(yīng)充分考慮有關(guān)實(shí)驗(yàn)以及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的特點(diǎn)、可能直接或間接參與風(fēng)險(xiǎn)的傳染性病原，工作人員的專業(yè)素養(yǎng)及經(jīng)驗(yàn)，實(shí)施項(xiàng)目的具體活動(dòng)和程序等因素，做出決策。根據(jù)傳染過(guò)程的基本因素，減少工作人員暴露的危險(xiǎn)和使環(huán)境污染降到最低限度。,危險(xiǎn)度評(píng)估,危險(xiǎn)度評(píng)估應(yīng)當(dāng)由那些對(duì)微生物特性、設(shè)備和操作程序、動(dòng)物模型、屏障設(shè)備和設(shè)施最為熟悉的人員來(lái)進(jìn)行。授權(quán)的專業(yè)人員進(jìn)行。危險(xiǎn)度評(píng)估一旦進(jìn)行，在必要時(shí)就應(yīng)當(dāng)對(duì)它進(jìn)行常規(guī)性的評(píng)估和修訂，同時(shí)要考慮收集與危險(xiǎn)程度相關(guān)的新資料以及來(lái)自科學(xué)文獻(xiàn)的其他相關(guān)的新信息。,微生物的危險(xiǎn)評(píng)價(jià)涉及范疇,1已知的傳染微生物 經(jīng)過(guò)鑒定的病原體，有實(shí)驗(yàn)室研究、疾病監(jiān)測(cè)和流行病

31、學(xué)研究危險(xiǎn)評(píng)價(jià)資料。 2未知傳染微生物 對(duì)未知傳染微生物危險(xiǎn)評(píng)價(jià)的需要考慮以下方面：傳染性、傳播途經(jīng)、發(fā)病率和死亡率等流行病學(xué)和病原血清型等生物學(xué)特性資料。,微生物的危險(xiǎn)評(píng)價(jià)涉及范疇,3基因修飾微生物 通過(guò)基因修飾技術(shù)獲得的具有新特性的微生物。通常通過(guò)受體和供體的生物特性和用量，進(jìn)行危險(xiǎn)性評(píng)價(jià)。修飾后是否改變其毒性、繁殖能力、宿主范圍，與宿主染色體整合性和對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期的影響等。 4未知傳染性的生物材料 在缺少資料證明有或沒(méi)有未知傳染性微生物材料時(shí)應(yīng)該擴(kuò)展防護(hù)范圍和提高防護(hù)級(jí)別。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,進(jìn)行微生物危險(xiǎn)度評(píng)估最有用的工具之一就是列出微生物的危險(xiǎn)度等級(jí)。然而對(duì)于一個(gè)特定的微生物來(lái)講，在進(jìn)

32、行危險(xiǎn)度評(píng)估時(shí)僅僅參考危險(xiǎn)度等級(jí)的分類是遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，適當(dāng)時(shí)還應(yīng)考慮其他一些因素，包括： 1微生物的致病性和感染劑量 越是發(fā)病率高、后果嚴(yán)重的病原越是危險(xiǎn)。病原體的來(lái)源在危險(xiǎn)評(píng)價(jià)時(shí)必須考慮在內(nèi)?！皝?lái)源”涉及到微生物來(lái)源的地域、宿主和特點(diǎn)。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,2暴露的后果 發(fā)生暴露后對(duì)人員或環(huán)境可能的危害后果 3自然感染途徑 傳染性病原能通過(guò)四種主要的感染途徑而致病。即攝人、吸人、黏膜接觸以及腸道外直接接種。感染途徑，可能與自然患病的感染途徑相類似，也可能截然不同。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,4實(shí)驗(yàn)室操作所造成的其他感染途徑(非消化道途徑、空氣傳播、食入) 傳染性病原可通過(guò)天然的或人為的方式從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)逸散

33、。經(jīng)尿液、唾液和糞便排出或從皮膚損害部位釋出是天然逸散方式的例子。促使傳染性病原從實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)逸散的人為方式有很多，用針頭和注射器從病毒血癥動(dòng)物身上抽取血樣、活組織檢查或尸體剖檢操作者時(shí)被帶有污染物的針頭、刀刃刺傷、割破或擦傷，以及被動(dòng)物咬傷而直接接種；照料動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)操作時(shí)吸人帶污染物的氣溶膠被濺出的污染物，污染的手和污染的表面接觸操作人員的眼睛、鼻腔或口腔黏膜。氣溶膠傳播的可能性越大，危險(xiǎn)性越高。通過(guò)氣溶膠傳播的疾病最容易發(fā)生實(shí)驗(yàn)室感染。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,進(jìn)行微生物危險(xiǎn)度評(píng)估最有用的工具之一就是列出微生物的危險(xiǎn)度等級(jí)。然而對(duì)于一個(gè)特定的微生物來(lái)講，在進(jìn)行危險(xiǎn)度評(píng)估時(shí)僅僅參考危險(xiǎn)度等級(jí)的分類是

34、遠(yuǎn)遠(yuǎn)不夠的，適當(dāng)時(shí)還應(yīng)考慮其他一些因素，包括： 1微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性 不僅考慮微生物的傳染性(細(xì)菌芽胞)，而且要考慮其在環(huán)境中的存活力，抗性越強(qiáng)越危險(xiǎn)。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,2所操作微生物的濃度和濃縮樣品的體積 根據(jù)研究?jī)?nèi)容，病原體濃度決定危險(xiǎn)的程度。濃度越高越危險(xiǎn)。 3適宜宿主(人或動(dòng)物)的存在 常見的人畜共患疾病 文獻(xiàn)記載的職業(yè)性疾病來(lái)源 人體患病的嚴(yán)重程度，對(duì)疾病的抵抗力,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,4從動(dòng)物研究和實(shí)驗(yàn)室感染報(bào)告或臨床報(bào)告中得到的信息 在人體數(shù)據(jù)缺乏時(shí)，動(dòng)物研究數(shù)據(jù)可對(duì)危險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供有用的資料。動(dòng)物體致病性、傳染性和傳播途徑的信息可提供有價(jià)值的提示。但推論從一種動(dòng)物到另一種動(dòng)物傳染性時(shí)

35、，必須小心驗(yàn)證。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,5計(jì)劃進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)室操作(如濃縮、超聲處理、氣溶膠化、離心等) 實(shí)驗(yàn)室操作內(nèi)容與其設(shè)備相關(guān)操作細(xì)則是否可保證其不泄露，實(shí)驗(yàn)程序和操作方法，操作的性質(zhì)和作用避免操作者攝人 吸人，直接接種，割破或擦傷，針刺，咬傷直接接觸可能性。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,6可能會(huì)擴(kuò)大微生物的宿主范圍或改變微生物對(duì)于已知有效治療方案敏感性的所有基因技術(shù) 對(duì)開展遺傳修飾微生物方面的工作進(jìn)行危險(xiǎn)度評(píng)估時(shí)，必須要包括對(duì)其潛在的危害程度、后果的嚴(yán)重性以及發(fā)生這種危害的可能性或頻率大小，宿主的易感性，宿主菌的致病性，包括毒力、傳染性、毒素生 成、宿主范圍的變化；受體的免疫程度以及免疫系統(tǒng)的狀態(tài)；暴露后果

36、的嚴(yán)重性；直接由插入的外源性基因片段所產(chǎn)生的危害當(dāng)插人外源性基因后的產(chǎn)物具有有害生物學(xué)活性危害性等方面的評(píng)估。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,當(dāng)?shù)厥欠窨梢赃M(jìn)行有效的預(yù)防或治療干預(yù) 預(yù)防和治療的有效性是應(yīng)該考慮的重要因素。有效性越低，危險(xiǎn)性越大，反之亦然。試驗(yàn)室工作人員，有無(wú)免疫預(yù)防措施，文獻(xiàn)記載 的職業(yè)性疾病，工作人員的素養(yǎng)及經(jīng)驗(yàn)。,危險(xiǎn)度評(píng)估內(nèi)容,危險(xiǎn)度評(píng)估時(shí)，只有在明確了上述信息的基礎(chǔ)上，才能明確所計(jì)劃開展的研究工作的生物安全水平級(jí)別，并選擇合適的個(gè)體防護(hù)裝備。對(duì)于那些所知甚少的樣品當(dāng)了解了足夠的信息時(shí)，才能很好地進(jìn)行上述危險(xiǎn)度評(píng)估。,菌（毒）種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定,為保證菌（毒）種管理體系能規(guī)范化

37、制度化正常運(yùn)作，制定符合本單位實(shí)際情況的菌（毒）種管理及監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP），是非常必要的，該（SOP）主要內(nèi)容包括，菌（毒）種管理與監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)總則，其內(nèi)容包括菌（毒）種接收（分離）標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）；種子批制備與質(zhì)控準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）；菌（毒）種使用、保藏、分發(fā)標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）；菌（毒）種銷毀標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）；菌（毒）種事故應(yīng)急處理標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）：菌（毒）種管理監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）。在各細(xì)則中根據(jù)其實(shí)際內(nèi)容或?qū)嶒?yàn)，制定更詳細(xì)的各實(shí)驗(yàn)獨(dú)立的操作細(xì)則，并制作對(duì)應(yīng)的規(guī)范化表格化的原始記錄。,菌（毒）種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定,1.菌（毒）種管理與監(jiān)督標(biāo)準(zhǔn)操

38、作細(xì)總則 總則的內(nèi)容主要為菌（毒）種管理與監(jiān)督的制定SOP指導(dǎo)思想、各SOP形成與批準(zhǔn)程序、主要內(nèi)容提要、以及各SOP目錄、實(shí)施與監(jiān)督部門。 2.菌（毒）種接收（分離）標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP） 菌（毒）種接收標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）要求內(nèi)容:接收(外購(gòu)、贈(zèng)送)審批與接收程序;對(duì)菌種來(lái)源,背景資料的要求、接收樣品的檢驗(yàn) 。,菌（毒）種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定,要求配套原始記錄: （1）菌（毒）種外購(gòu)(接受贈(zèng)送)申請(qǐng)表 （2）菌種來(lái)源,背景資料登記記錄 （3）菌（毒）種入庫(kù)登記表 （4）外來(lái)菌種傳代與檢驗(yàn)記錄,菌（毒）種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定,菌（毒）種分離標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）取樣程序;對(duì)菌種來(lái)源,背景資料的要求、樣品的分離操作(如分離過(guò)程較復(fù)雜可分寫各自獨(dú)立SOP) （1）樣品來(lái)源,背景資料登記記錄 （2）菌(毒)種分離記錄 （3）外來(lái)菌種傳代與檢驗(yàn)記錄 （4）菌（毒）種入庫(kù)或處理登記表,菌（毒）種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定,3.菌（毒）種種子批制備與質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP） 菌（毒）種種子批制備標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（SOP）內(nèi)容包括原代主代及工作種子批制品過(guò)程各工藝要求細(xì)則;批準(zhǔn)種子批發(fā)行使用程序,各過(guò)程應(yīng)制定相對(duì)應(yīng)實(shí)驗(yàn)原始記錄.,菌（毒）種管理與監(jiān)督系統(tǒng)的文件制定,菌（毒）種種子批質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作細(xì)則（