（食品科學(xué)專(zhuān)業(yè)論文）辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素Blt1gt檢測(cè)及應(yīng)用.pdf

貴州大學(xué)碩十學(xué)位論文 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 檢測(cè)及應(yīng)用 摘要 貴州優(yōu)質(zhì)辣椒具有色澤紅潤(rùn)、油分重、香味濃、辣味適中的特點(diǎn)，是開(kāi)發(fā)辣 椒系列制品的極好原料。目前，辣椒調(diào)味品現(xiàn)已成為貴州食品工業(yè)新興產(chǎn)業(yè)，也 是貴州出口食品的重要產(chǎn)品，已遠(yuǎn)銷(xiāo)2 1 個(gè)國(guó)家和地區(qū)。但辣椒調(diào)味品中a f b l 污 染已成為阻礙出口的貿(mào)易壁壘，為了擴(kuò)大辣椒調(diào)味品出口、確保產(chǎn)品質(zhì)量、打破 國(guó)外技術(shù)壁壘，發(fā)展貴州經(jīng)濟(jì)，保證食品安全和滿足出口快速檢測(cè)需要，需要建 立一種靈敏度高、特異性強(qiáng)、簡(jiǎn)便快速、容易普及應(yīng)用的方法來(lái)檢測(cè)食品中黃曲 霉毒素b 1 ( a f bj ) 。 本文采用e l i s a 方法檢測(cè)辣椒調(diào)味品中的a f b l ，針對(duì)辣椒調(diào)味品成分的復(fù) 雜性，預(yù)處理過(guò)程中采用不同有機(jī)溶劑甲醇水溶液配比對(duì)a f b l 進(jìn)行提取優(yōu)化， 同時(shí)分析樣品中p h 、含鹽量和油脂等因素對(duì)e l i s a 法檢測(cè)a f b l 結(jié)果的影響。 研究表明，應(yīng)用8 0 甲醇水溶液提取a f b l ，調(diào)整辣椒調(diào)味品p h 值在6 8 之間， 控制辣椒調(diào)味品氯化鈉含量在1 0 - 2 0 范圍，用石油醚將樣品處理液中油脂提 取可以較好消除檢測(cè)干擾。通過(guò)對(duì)e l i s a 方法定量檢測(cè)a f b l 的可行性進(jìn)行系統(tǒng) 的研究和驗(yàn)證，建立了e l i s a 方法評(píng)價(jià)指標(biāo)，確立了e l i s a 定量分析的質(zhì)控參 數(shù)，e l i s a 分析方法的線性范圍為o 1 p _ g k g 1 0 v t g k g ，相關(guān)系數(shù)為o 9 9 2 1 。向樣 品中分別添加1 p , g k g 、5 p , g k g 、1 0 p , g k 9 3 個(gè)濃度水平的a f b l 標(biāo)準(zhǔn)品，平均回收 率分別為7 8 2 5 ，9 0 9 ，8 4 5 5 ，檢測(cè)靈敏度為o 0 1 i | t g k g 。同時(shí)，應(yīng)用g b t 1 8 9 7 9 2 0 0 3 食品中黃曲霉毒素的測(cè)定一免疫親和層析凈化高效液相色譜法與 e l i s a 方法進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，并向樣品中分別添加1 1 x g k g 、5j _ t g k g 、1 0 1 a g k 9 3 個(gè) 濃度水平的a f b l 標(biāo)準(zhǔn)品，平均回收率為7 3 3 7 ，8 8 4 7 ，9 3 5 8 ；兩種方法 質(zhì)控參數(shù)均達(dá)到中華人民共和國(guó)進(jìn)出口商品檢驗(yàn)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)s n t0 0 0 1 - - 1 9 9 5 出 口商品中農(nóng)藥、獸藥殘留量及生物毒素檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)的基本規(guī)定。應(yīng)用兩種 方法對(duì)樣品測(cè)定值進(jìn)行研究分析，擬合回歸方程為：y = o 9 8 0 3 x + 0 1 2 9 4 相關(guān)系 數(shù)為：0 9 7 8 6 。從回歸方程和相關(guān)系數(shù)中可以得出：e l i s a 方法和h p l c 方法相 關(guān)性較好。從而證實(shí)了e l i s a 方法用于食品分析中的可行性。并對(duì)貴州出入境 檢驗(yàn)檢疫局從貴州省辣椒調(diào)味品生產(chǎn)企業(yè)抽取的有代表性辣椒調(diào)味品1 2 0 件進(jìn) 行a f b l 的檢驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果表明，油辣椒系列a f b l 含量為1 6 9 3 - 3 0 2 s 肛g k g ，糟 辣椒系列a f b l 含量為o 6 3 2 1 0 7 9 1 a e d k g ，香辣菜系列a f b l 含量為 貴卅l 大學(xué)顧士學(xué)位論文辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 檢測(cè)及應(yīng)用 o 5 9 9 0 9 5 6 p g k g ，雞辣椒系列a f b l 含量為1 1 1 9 - 1 8 7 4 p g k g ，風(fēng)味豆豉系列 a f b l 含量為3 9 7 9 6 3 9 1 p g k g ，肉絲豆豉系列a f b l 含量為3 6 1 4 - 4 6 9 6 9 9 k g ， 辣三丁油辣椒系列a f b l 含量為1 9 1 7 2 7 4 2 9 9 k g ，初步掌握了辣椒調(diào)味品中 a f b l 污染情況。 本文對(duì)e l i s a 方法檢測(cè)辣椒調(diào)昧品中a f b l 的不確定度依據(jù)分層建模理論進(jìn) 行了評(píng)定。并對(duì)樣品的均勻性以及在稱(chēng)量、提取、凈化和儀器檢測(cè)等過(guò)程中引起 的不確定度進(jìn)行了逐層分析，根據(jù)不同類(lèi)型分別評(píng)定，其中稱(chēng)量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確 定度2 9 1 x 1 0 ，樣品稀釋準(zhǔn)備的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度6 2 6 1 0 一，a f b l 標(biāo)準(zhǔn)品校準(zhǔn) 帶來(lái)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度1 0 0 2 1 0 0 ，e l i s a 實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程的不確定度 2 8 5 1 0 。2 ，酶標(biāo)儀讀數(shù)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度及數(shù)據(jù)處理帶來(lái)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度均 為5 x 1 0 一，通過(guò)分步計(jì)算和整體合成，辣椒調(diào)味品測(cè)定合成不確定度為3 1 7 ； 在置信水平9 5 時(shí)，擴(kuò)展不確定度為6 3 4 ：通過(guò)評(píng)定確定了檢測(cè)結(jié)果置信范圍， 合理地表征被測(cè)量值的分散性。使附有不確定度說(shuō)明的測(cè)量結(jié)果更加完整并具有 一定意義。 本文分析辣椒調(diào)味品中a f b l 影響因素，建立了快速、批量檢測(cè)辣椒調(diào)味品 中a f b ，的方法，同時(shí)對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)估，確定檢測(cè)結(jié)果置信范圍， 并對(duì)并對(duì)貴州省貴陽(yáng)市市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)的1 2 0 件辣椒調(diào)味品樣品進(jìn)行a f b l 的檢驗(yàn)，初 步掌握了貴州省貴陽(yáng)市市場(chǎng)上辣椒調(diào)味品中a f b ，污染情況。為擴(kuò)大辣椒調(diào)味品 出口、確保產(chǎn)品質(zhì)量、打破國(guó)外技術(shù)壁壘，加快貴州經(jīng)濟(jì)發(fā)展做出一定貢獻(xiàn)。 關(guān)鍵詞：辣椒；調(diào)味品；黃曲霉毒素b 1 ：e l i s a ；h p l c ；不確定度 i i 貴卅1 大學(xué)碩十學(xué)位論文辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 檢測(cè)及應(yīng)用 a b s t r a c t t h ec a p s i c u mo fg u i z h o up r o v i n c eh a sl u s t e rm d d y oh i 曲o i lc o n t e n t ，t h i c kf l a g r a n c e a n ds u i t a b l eh o t n e s sc h a r a c t e r i s t i c sa n ds oo n i ti st h ee x t r e m e l yg o o dr a wm a t e r i a lo f t h e c a p s i c u ms e r i e sp r o d u c t a tp r e s e n t ，t h ec a p s i c u mh a sa l r e a d yb e e ne m e r g i n gi n d u s t r yo ff o o d i n d u s t r yi ng u i z h o u ，i t sa l s ow a se x p o r t sf o o dt h ei m p o r t a n tp r o d u c t ，a n dh a sb e e ns o l di n2 1 c o u n t r i e sa n dt h ea r e a t oe n s u r ef o o ds a f e t ya n dt h en e e d so fo u t p u t ，t h em e t h o do f d e t e c t i n ga f l a t o x i n ，w h i c hi sh i g hs e n s i t i v i t y , s t r o n gs p e c i f i c i t y , s i m p l e ，f a s ta n de a s y t op u ti n t oe f f e c t , i sb a d l yn e e d e d t h i sa r t i c l es t u d i e da n de v a l u a t e dt h ea p p l i c a t i o no fe l i s ai nt e s t so fa f b li n c a p s i c u mf l a v o r s o m ef a c t o r st h a tc o u l db r i n ge r r o r st or e s u l t sw e r ea l s oa n a l y z e d i t w a sf o u n dt h a te l i s aw a so ff e a s i b l ew a yt od e t e c to fa f b li nc a p s i c u mf l a v o r p r o d u c t s s o m ec o n t r o lp a r a m e t e r si nq u a n t i t a t i v ea n a l y s i so fe l i s aw e r ee s t a b l i s h e d 功er e s u l t sc e r t i f i e dt h ef e a s i b i l i t yo f e l i s ai nd e t e c t i o no f a f b li nc a p s i c u mf l a v o r e l i s as h o w e dl i n e a rr a n g eo f0 1 g & g - lo o g & g t h er e l a t e dc o e f f i c i e n tj so 9 9 21 a d d i n ga f b lt oc a p s i c u mf l a v o rs a m p l e s ，t h ec o n c e n 仕a f i o ni s 1g g k g ，5 9 9 k ga n d l o p g k gs e p a r a t e l y ，a v e r a g er e c o v e r yr a t ei s7 8 2 5 9 0 9 a n d8 4 5 5 s e n s i t i v i t y i so ，1 p g k g e f f e c to f p h ，s a l t e dd e n s i t ya n df a to nt h et e s t i n gr e s u l t so f e l i s aw e r e a l s os t u d i e d t h ei n f l u e n c eo ft h e s ef a c t o r sh a sc e r t i f i e di nt h er e s u l t s h o w e v e r ，t h e s e e f f e c t sc o u l db ed i m i n i s h e dw h e nt h ee x t r a c t i o nw a s1 e a c h e dw i t hc e r t a i ns o t v e n t s b e f o r et e s t i n g t h er e s u l t sw o u l dp r o v i d et h e o r yi n f o r m a t i o nt ot h ef o u n d a t i o no f e x t r a c t i o nm e t h o d so f a f b li nc a p s i c u mf l a v o rs a m p l e t h e u n c e r t a i n t yo fd e t e r m i n a t i o no fa f l a t o x i nb lb ye l i s am e t h o di nt h i sp a p e r i se v a l u a t e db a s e do nt h et h e o r yo fl a y e rm o d e l i n ge v a l u a t i o n t h em o d e lo fe a c h s u b v a r i a b l ea r ee s t a b l i s h e du n d e rt h ei n d i v i d u a la n a l y s i so ft h e u n c e r t a i n t yc a u s e db y t h e h o m o g e n e i t y o fs a m p l e ，t h e p r o c e s s e ss u c h a s e x t r a c t i o n ，p u r i f i c a t i o na n d i n s t r u m e n t a ld e t e c t i o ne t c s y n t h e s i su n c e r t a i n t yi s3 1 7 ，e x p a n s i o nu n c e r t a i n t yi s 6 3 4 b yc o m p a r i s o nw i t ht h em e t h o do fe l i s a ，w eu s e dg b t18 9 7 9 2 0 0 3t o d e t e r m i n ea f l a t o x i n sc o n t e n ti nf o o d c l e a n u pb yi m m u n o a f f l n i t yc h r o m a t o g r a p h ya n d i i i 貴i i 大學(xué)碩士學(xué)位論文 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 椅測(cè)及應(yīng)用 d e t e r m i n a t i o nb yh i 曲一p e r f o r m a n c e l i q u i dc h r o m a t o g r a p h yt h r o u g ht h ec o n t r o l e x p e r i m e n t ，a n da d d e da f b lt oc a p s i c u mf l a v o rs a m p l e s ，w h i c hc o n c e n t r a t i o ni s 1p g k g ，5 9 9 k ga n dlo g g k gs e p a r a t e l y , t h e nw eg a i n e da v e r a g er e c o v e r yr a t et h a ti s 7 3 3 7 8 8 4 7 a n d9 3 5 8 a n dt h er e l a t e dc o e f f i c i e n t so 9 7 8 6 c o m p a r i n gt h r o u g h t h ee x p e r i m e n t ，t h ee l i s am e t h o da n dt h eh p l cm e t h o dh a v eb e t t e rc o r r e l a t i o n t h e r e f o r ew ec o n f i r m e dt h ee l i s am e t h o du s e di nf o o da n a l y s i si sf e a s i b l e a t i e r d e t e r m i n i n gt h e1 2 0c a p s i c u mf l a v o rs a m p l e sf r o mt h eg u i z h o up r o v i n c eb ye l i s a ， t h e ya l lr e a c hn a t i o n a ls t a n d a r d s i nv i e wo ft h e c o m p l e x i t yo fc o n s t i t u e n to fc a p s i c u m f l a v o ri n g u i z h o u ， i n f l u e n c i n gf a c t o r so fi t sa f b lh a v eb e e na n a l y s e d ，t h em e t h o do ff a s ta n db a t c h d e t e r m i n a t i o no fa f b l ，i nt h i s w a y , q u a l i t ys a f e t yo fc a p s i c u mf l a v o r c a nb e g u a r a n t e e d ，i t se x p o r tc a nb ep r o m p t e d ，a n di tc a nd oac e r t a i nc o n t r i b u t i o nt ot h e p r o s p e r i t yo f g u i z h o u k e yw o r d s ：c a p s i c u m f l a v o ra f l a t o x i nb ie l i s ah p l c u n c e r t a i n t y 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b ，檢測(cè)及應(yīng)用 原創(chuàng)性聲明 本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行 研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他 個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究曾做出重要貢獻(xiàn)的 個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律責(zé) 任由本人承擔(dān)。 論文作者簽名： 芻趣 日期： 關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明 本人完全了解貴州大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留 或向國(guó)家有關(guān)部門(mén)或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借 閱；本人授權(quán)貴州大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù) 進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。 ( 保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定) 論文作者簽名：弛導(dǎo)師簽名： 日期： 貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b ，檢測(cè)及應(yīng)用 第一章前言 1 1 黃曲霉毒素的研究背景 早在一九一五年，人們就已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，油料作物的種子榨油后的油餅，發(fā)霉以后用作 飼料時(shí)，會(huì)引起家畜中毒。一九四0 年人們發(fā)現(xiàn)，黃曲霉的培養(yǎng)物能使動(dòng)物中毒。直到 九六0 年六月到八月問(wèn)，英國(guó)英格蘭南部及東部地區(qū)，有十萬(wàn)只火雞，由于不知名的 疾病，引起迅速死亡。因病因不明，定為“火雞的x 病” 3 3 1 。后來(lái)又發(fā)現(xiàn)在小雞、小鴨、 野雞、豬小牛和魚(yú)類(lèi)中，也發(fā)現(xiàn)類(lèi)似的疾病。經(jīng)病理檢查發(fā)現(xiàn)，肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞退行性變， 膽管上皮細(xì)胞異常增生。經(jīng)過(guò)兩年的研究發(fā)現(xiàn)，從飼料中分離出的黃曲霉所產(chǎn)生的熒光 代謝物質(zhì)造成了火雞死亡，將其命名為黃曲霉毒素，該結(jié)果引起了全世界的轟動(dòng)。這一 結(jié)果開(kāi)辟了真菌毒素毒理學(xué)和檢測(cè)技術(shù)研究的熱潮。 自從一九六0 年英國(guó)發(fā)現(xiàn)火雞的黃曲霉毒素中毒癥以來(lái)，世界各國(guó)對(duì)真菌毒素開(kāi)展 了大量的研究工作。一七一一年起，人們發(fā)現(xiàn)吃進(jìn)污染麥角菌引起中毒開(kāi)始到現(xiàn)在，在 各種真菌毒素中，己發(fā)現(xiàn)毒性強(qiáng)的有黃曲霉毒素( a f l a t o x i n ) 、赭曲霉毒素( o c h r a t o x i n ) 、 黃綠青霉素( c i t r c o v i d d i n ) 、紅色青霉素b ( r u b r a t o x i nb ) 和青霉酸( p e n i c i l l i ca c i d ) 等。按目前的研究，黃曲霉毒素( b l 、g i ) 、黃變米毒素( 1 u t e o s k y r i n ) 、展青霉素( p a t u l i n ) 和島青霉毒素( i s l a n d i t o x i n ) 等六種可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物致癌。在這六種能致癌的真菌毒素 中，黃曲霉毒素b l ( a f b l ) 對(duì)人類(lèi)和家畜的健康危害很大【1 。2 】，其后許多學(xué)者證明黃曲 霉毒素不但引起急性中毒，長(zhǎng)期食用受其污染的食品可引起癌癥，黃曲霉毒素b l 是目 前所有致癌物中最有害的一種m3 5 3 6 3 7 1 。具有很強(qiáng)的毒性、致癌性、致突變性和致畸 毒性m3 8 1 。攝入后可引起人或家畜的急性或慢性真菌中毒癥( 1 1 y c o t o x i c o s l s ) 。 由于黃曲霉毒素對(duì)人、家畜和家禽的健康危害極大，甚至引起急性中毒導(dǎo)致死亡【3 9 1 ， 成為了最受人們注意的一種真菌毒素。近年來(lái)，美國(guó)、英國(guó)和日本等國(guó)對(duì)黃曲霉毒素都 作了大量研究工作【3 1 ，已在糧食、油料作物的種子、水果、干果、蔬菜、調(diào)味品、煙草、 黃麻、乳類(lèi)、乳制品、肉類(lèi)、魚(yú)蝦類(lèi)、發(fā)酵產(chǎn)品和飼料內(nèi)，甚至在一些酒類(lèi)和食品工業(yè) 用的酶制劑中，都發(fā)現(xiàn)了黃曲霉毒素；并對(duì)黃曲霉毒素毒性和中毒機(jī)理做了系統(tǒng)研究。 現(xiàn)在，有關(guān)黃曲霉毒素污染食品和飼料的管理?xiàng)l例已在美國(guó)、日本、歐盟付諸實(shí)施。世 界衛(wèi)生組織、美國(guó)、日本、歐盟等多次對(duì)食品和飼料中黃曲霉毒素的最大允許量做了嚴(yán) 格規(guī)定。 我國(guó)于2 0 世紀(jì)7 0 年代初組織了2 2 個(gè)省市的衛(wèi)生防疫部門(mén)對(duì)當(dāng)?shù)厣a(chǎn)的花生、花 貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 檢測(cè)及應(yīng)用 生油、玉米、小麥和豆類(lèi)等糧油食品共約3 0 0 0 0 份樣品用t l c 法測(cè)定了其中的a f b l 。 調(diào)查發(fā)現(xiàn)，花生、花生油和玉米中a f b l 的污染最嚴(yán)重，大米、小麥和豆類(lèi)a f b i 的污 染比較輕，南方的谷物受a f b l 的污染比北方嚴(yán)重。1 9 7 7 年測(cè)定了廣西南寧2 0 7 份玉米， 有1 6 5 份為a f b 陽(yáng)性樣品，陽(yáng)性率為7 9 7 。1 9 7 8 年玉米的污染率為4 0 ，1 9 8 3 年和 1 9 8 4 年分別為1 4 9 和1 8 8 ，a f b , 的水平依次為3 1 0 0 1 t g k g 、4 4 0 p g k g 、1 6 4 1 t g k g 和6 8 1 t g k g 。1 9 9 2 年的污染調(diào)查表明，a f b l 水平為5 0 , - - 1 1 0 r t g k g ，仍有5 5 6 的花 生油檢出a f b l ，含量范圍僅為5 啦1 1 1 p g k g ；有5 6 的玉米品檢出a f b j ，含量范圍 為規(guī)定的限量范圍【4 】。 近年來(lái)，世界各國(guó)對(duì)a f b 。的限量標(biāo)準(zhǔn)逐年降低，有關(guān)部門(mén)將黃曲霉毒素的研究列 為重點(diǎn)科研項(xiàng)目，在降低食品和飼料中黃曲霉毒素的同時(shí)，快速、準(zhǔn)確的黃曲霉毒素檢 測(cè)方法的建立已取得初步進(jìn)展。 1 2 黃曲霉毒素的分布、產(chǎn)生及性質(zhì) 1 2 1 黃曲霉毒素的分布范圍 黃曲霉毒素分布的范圍很廣，凡是污染了能產(chǎn)生黃曲霉毒素的真菌的糧食、油料作 物的種子、水果、干果、蔬菜、調(diào)味品、煙草、黃麻、乳類(lèi)、乳制品、肉類(lèi)、魚(yú)蝦類(lèi)、 發(fā)酵產(chǎn)品和飼料中，都有可能存在黃曲霉毒素。甚至在沒(méi)有發(fā)現(xiàn)真菌、真菌絲體或胞子 的食品和農(nóng)副產(chǎn)品上，也找到了黃曲霉毒素。花生、玉米最易污染黃曲霉毒素，小米、 高粱、木豆和白薯次之【柏】。資料表明，全世界每年約有2 5 的谷物受到霉菌毒素的影 響”1 。因此對(duì)其必須給予足夠重視。 1 2 2 黃曲霉毒素的種類(lèi)及理化性質(zhì) 黃曲霉毒素( a f l a t o x i n s ) 是由黃曲霉( a s p e r g i l l u sf l a v u $ ) 、 寄生曲霉( a p a r a s i t i e u s ) 和集峰曲酶( a n o m i u s ) 的某些產(chǎn)毒菌 株產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，從一九六一年發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素以來(lái)，黃曲 霉毒素的種類(lèi)越來(lái)越多。目前已經(jīng)確定出結(jié)構(gòu)的黃曲霉毒素有b l 、b 2 、g l 、g 2 、m l 、 m 2 等1 7 4 “億4 3 】種，并已經(jīng)用化學(xué)方法合成出來(lái)。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，各種黃曲霉毒素 彼此十分相似，含c 、h 、o 三種元素，其基本結(jié)構(gòu)都有一個(gè)二呋南環(huán)和一個(gè)氧雜萘鄰?fù)?( c o u m a r i n ，香豆素) ；前者為毒素后者為致癌物質(zhì)。黃曲霉毒素在紫外照射下能發(fā)出強(qiáng) 烈的熒光【們。根據(jù)其在紫外光下發(fā)生熒光的顏色及薄層層折時(shí)r f 直的不同分別命名為黃 曲霉毒素b 】、b 2 和g l 、g 2 。在3 6 5 n m 波長(zhǎng)下b 卜b 2 呈藍(lán)紫色熒光；g l 、g 2 呈黃綠色熒光。 貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 檢測(cè)及應(yīng)用 黃曲霉毒素的分子量為3 1 2 - - 3 4 6 。其中黃曲霉毒素b l 的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如圖。黃曲霉毒素難 溶于水，易溶于油、甲醇、丙酮和氯仿等有機(jī)溶劑，但不溶于石油醚、己烷和乙醚中。 一般在中性及酸性溶液中較穩(wěn)定，但在強(qiáng)酸性溶液中稍有分解，在p h 9 1 0 的強(qiáng)堿溶液 中分解迅速。其純品為無(wú)色結(jié)晶，耐高溫，黃曲霉毒素b - 的分解溫度為2 6 8 c ，紫外線 對(duì)低濃度黃曲霉毒素有一定的破壞性。 1 2 3 黃曲霉毒素的毒性與致癌性 黃曲霉毒素對(duì)包括家禽和家禽在內(nèi)的若干動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是 對(duì)肝臟的損害。黃曲霉毒素在食品和飼料中含l m g k g 以上就有劇毒，其毒性是氰化鉀的 1 0 倍，為砒霜的6 8 倍。大多數(shù)產(chǎn)毒黃典霉菌產(chǎn)生黃曲霉毒素b 1 的量比其它黃曲霉毒素多， 而且黃曲霉毒素b l 在全部黃曲霉毒素中毒性最強(qiáng)【7 】o 因此，1 9 9 3 年黃曲霉毒素被世界衛(wèi) 生組織( w h o ) 的癌癥研究機(jī)構(gòu)( i n t e r n a t i o n a la g e n c yf o rr e s e a r c ho nc a n c e r ，i a r c ) 劃 定為i 類(lèi)致癌物 4 4 1 ，一般以b 。作為動(dòng)物毒性試驗(yàn)。動(dòng)物因種類(lèi)、性別、年齡、營(yíng)養(yǎng)狀況 不同對(duì)黃曲霉毒素b 。的敏感性有很大差異，最敏感的動(dòng)物為雛鴨。動(dòng)物急性中毒時(shí)主要 表現(xiàn)為食欲下降，體重減輕，死后解剖肉眼可見(jiàn)肝臟出血、壞死；病理變化主要表現(xiàn)為 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性、壞死、脂肪侵潤(rùn)，纖維化及膽管上皮細(xì)胞增生，一次小劑量的黃曲霉 毒素造成的生理變化是可以恢復(fù)的，如果多次重復(fù)攝入則可成不可恢復(fù)性病變。除肝臟 外，其它臟器如脾、腎、睪等亦可引起退行性病變。 此外，美國(guó)b u t l e r 【4 5 1 教授以黃曲霉毒素對(duì)大鼠進(jìn)行了連續(xù)四代的繁殖試驗(yàn)，第一代 和第二代的飼料中各含有黃曲霉毒素量0 i _ t g k g 、l i - t g k g 、1 0 1 t g k g ，其它兩代的飼料中含 有1 0 x g k g 濃度的黃曲霉毒素，并一直喂至2 1 月齡。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，喂低量的雌雄鼠的生 存率比對(duì)照組( 無(wú)毒的) 高。三代的受孕率相似，仔鼠的存活率與斷奶鼠的體重，不論 其飼料中含黃曲霉毒素量為1 i x g k g 或1 0 g k g ，也不論喂養(yǎng)時(shí)間的長(zhǎng)短，都無(wú)顯著性差 異。特別是，沒(méi)有一只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生肝癌，只是飼以含黃曲霉毒素b 11 0 0 i _ t g k g 達(dá)7 6 周 之久的大鼠肝臟損害率比對(duì)照組高。 黃曲霉毒素對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的生物化學(xué)影響，一般認(rèn)為可影響一些與肝臟有關(guān)的酶活性 變化，如使血清中異檸檬酸脫氫酶、堿性磷酸酶、轉(zhuǎn)氨酶的活性增高，有人還認(rèn)為可影 響酶和脂肪的代謝。 黃曲霉毒素可使魚(yú)類(lèi)和哺乳類(lèi)動(dòng)物誘發(fā)肝癌，其作用的靶器官主要為肝臟 4 6 1 。它 能夠?qū)е赂闻K壞死、癌變、肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、腎腫瘤掣4 7 】，引起急性和亞急性中毒， 貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 。檢測(cè)及應(yīng)用 各種動(dòng)物對(duì)黃曲霉毒素致癌的敏感性不同，如以最低致癌劑量比較，魚(yú)最敏感，在其飼 料中含有黃曲霉毒素b 1 0 1 t t g k g ，9 個(gè)月后即可引起肝癌；大鼠飼料中含黃曲霉毒素 b 1 5 t t g k g ，6 7 周后導(dǎo)致肝癌【4 8 1 。大鼠致癌試驗(yàn)中，大劑量數(shù)次攝入和4 , n 量反復(fù)攝入 都可導(dǎo)致大鼠發(fā)生肝癌，后者出現(xiàn)較前者遲，這說(shuō)明黃曲霉毒素在致癌性上存在著“劑 量與反應(yīng)”的關(guān)系。關(guān)于猴的致癌試驗(yàn)，有報(bào)導(dǎo)一例雄猴，每日每公斤攝入典曲霉毒素 b 0 0 2 m g ，5 年半年后發(fā)生巨大肝細(xì)胞癌【“5 0 1 。 黃曲霉毒素除主要可引發(fā)肝癌外，由于毒素侵入試驗(yàn)動(dòng)物的途徑不同，也可引起其 它部位如腎、胃、支氣管、腺體和皮下組織的癌腫。 美國(guó)b u t l e r 【5 1 1 教授曾將黃曲霉毒素b i 與過(guò)去認(rèn)為致癌性極強(qiáng)的一些化合物進(jìn)行比 較，對(duì)大白鼠經(jīng)口攝入致肝癌量，黃曲霉毒素b 1 為1 0 微克天，而二甲基亞硝胺則需 7 5 0 微克天，奶油黃為9 0 0 0 微克天，由此可見(jiàn)黃曲霉毒素b l 是已知致癌化學(xué)物質(zhì)中的 最強(qiáng)的一種。 1 3 黃曲霉毒素與人類(lèi)和動(dòng)物健康的關(guān)系 黃曲霉毒素雖然對(duì)動(dòng)物有強(qiáng)烈的毒性和致癌性，而且有些食物確實(shí)受到污染，但對(duì) 人類(lèi)的危害，迄今為止，只有間接的驗(yàn)證，尚缺直接的證據(jù)。一些流行病學(xué)的調(diào)查和研 究結(jié)果表明，世界上許多肝癌高發(fā)區(qū)，食品被黃曲霉毒素污染率較高。 江蘇省啟東市是全國(guó)肝癌發(fā)病率最高的地區(qū)，據(jù)一些專(zhuān)家研究顯示這與當(dāng)?shù)厝藗儗?duì) 糧食儲(chǔ)存方法不當(dāng)，再加上氣候溫暖潮濕，糧食受黃曲霉菌污染所致【8 】。 我國(guó)臺(tái)灣省曾發(fā)現(xiàn)三家農(nóng)民3 9 人中有2 5 人中毒。發(fā)霉大米為可疑食物。大米深棕 色，黃曲霉毒素b l 含量最高者為2 2 5 9 1 a g k g 及1 8 2 4 9 9 k g 。2 5 人中3 個(gè)小孩死亡，但 未做尸檢，肝臟病不明。以該批霉米喂雛鴨，肝臟顯示黃曲霉毒素中毒的病變【5 2 】。 非洲一名1 5 歲兒童食用污染a f b l 的木薯引起急性中毒死亡，經(jīng)檢測(cè)木薯中含 a f b l l 7 m g k g 。另一起為一名體重1 0 k g 兒童食用污染a f b l 的米飯2 天后死亡。經(jīng)檢測(cè) 米飯中含6 m g ，k 一叼。 a b d u l k a d a r ( 2 0 0 0 ) 報(bào)道【5 3 】，1 9 9 7 年6 月- - 1 9 9 8 年1 2 月卡塔爾進(jìn)口的可食性堅(jiān)果受黃曲 霉毒素b l 的嚴(yán)重污染，其中8 1 份樣品中受黃曲霉毒素b l 污染的有1 9 份，含量范圍為 0 5 3 - 2 8 9 9 9 k g ，1 9 9 8 年1 0 1 份樣品中有4 8 份樣品中黃曲霉毒素b l 含量在1 2 2 7 5 t t g k g 。 有關(guān)黃曲霉毒素在不同動(dòng)物體內(nèi)的代謝和引起的生物化學(xué)變化，已有一些綜述性的 報(bào)掣5 5 孤5 7 1 。但還有許多問(wèn)題有待深入研究。闡明黃曲霉毒素在機(jī)體中的代謝情況， 貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 檢測(cè)及應(yīng)用 對(duì)了解其中毒與致癌機(jī)理有一定的幫助。有關(guān)黃曲霉素素b l 的代謝情況，現(xiàn)己初步明 確以下幾點(diǎn)： 動(dòng)物攝取黃曲霉毒素b l 后，在體內(nèi)形成代謝物m i 。m l 是b i 的羥基化衍生物，最 初在羊奶中發(fā)現(xiàn)，故命名。牛、羊等動(dòng)物食入含有黃曲霉毒素b 的飼料后，其奶中即 有m 排出，研究發(fā)現(xiàn)m l 有致癌性【1 0 1 。其外觀為白色或微黃色的粉末，分子式為 c 1 7 h 1 2 0 7 ，分子量為3 2 8 3 9 m o l 。經(jīng)毒理學(xué)研究，a f m i 的l d s o = 0 3 m g k g ( o r a l ， d u c k l i n g ) ，1 9 8 7 年w h o 將其定為一類(lèi)致癌物，是公認(rèn)肝致癌物和d n a 破壞劑5 8 5 9 鯽。 動(dòng)物攝入b 。后，在奶、尿液、血液中都有b l 或其它代謝物檢出。組織器官中以肝 臟最為重要，各種動(dòng)物肝臟均有b l 或其它代謝物出現(xiàn)，腎、脾、腎上腺中亦可含有b l ， 但在肝臟中的蓄積作用顯著較其它組織高，這可能由于肝臟是體內(nèi)進(jìn)行物質(zhì)代謝過(guò)程的 主要器官，許多有毒物質(zhì)往往在肝臟中進(jìn)行代謝后，再由腎臟排出，因此尿液中亦有 b - 及其代謝物的出現(xiàn)。 1 4 黃曲霉毒素的預(yù)防及去毒 1 4 1 黃曲霉毒素預(yù)防 黃曲霉毒素對(duì)人和各類(lèi)生物表現(xiàn)出很強(qiáng)的毒性，而且有明顯的致癌能力。因此，關(guān) 于黃曲霉毒素的預(yù)防的研究工作，非常引人注目。食品和飼料中的黃曲霉及其毒素應(yīng)以 防霉為主。如前所述，糧食中霉菌生長(zhǎng)繁殖的條件主要是適宜的溫度和水份，尤其水份 更為重要。因此，最切實(shí)可行的防霉措施是控制糧食作物在收獲后的水份含量。一般來(lái) 說(shuō)，糧食作物在收獲以后迅速把水份含量( 一般可達(dá)2 5 ) 降至1 4 以下，使環(huán)境相 對(duì)濕度不超過(guò)7 0 ，溫度降至1 0 c 以下，就可防止霉菌的生長(zhǎng)與產(chǎn)毒。因此，糧食作 物在收獲以后，應(yīng)避免長(zhǎng)時(shí)間堆放在田間，并應(yīng)及時(shí)搬運(yùn)到場(chǎng)地散開(kāi)通風(fēng)。特別是南方 一些地區(qū)，氣候比較炎熱潮濕，收獲后又經(jīng)常遇到陰雨，盡快設(shè)法使其干燥，防止霉菌 的繁殖，尤為重要。 經(jīng)驗(yàn)證明，保持糧粒和花生外殼的完整，可以有效地防止黃曲霉菌的侵染，在收獲、 儲(chǔ)存、運(yùn)輸各個(gè)環(huán)節(jié)中對(duì)這一點(diǎn)均應(yīng)予以注意。 防止糧食在儲(chǔ)存過(guò)程中的發(fā)熱霉變，目前還試用一些化學(xué)薰蒸劑，如溴甲烷、二氯 乙烷、環(huán)氧乙烷等。前兩種是殺滅倉(cāng)庫(kù)害蟲(chóng)的薰蒸劑，主要通過(guò)它們殺滅倉(cāng)蟲(chóng)，防止蟲(chóng) 體表面沾染的霉菌菌絲孢予而播散；環(huán)氧乙烷用來(lái)防霉，效果較好，據(jù)某單位試用，每 立方米用1 0 0 - 2 0 0 克，封閉數(shù)日，可使米粒的霉菌數(shù)減少9 0 以上，并且效用可維持4 貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b t 檢測(cè)及應(yīng)用 個(gè)月，環(huán)氧乙烷為無(wú)色液體，沸點(diǎn)1 0 7 ，易燃，揮發(fā)快，上述試驗(yàn)于開(kāi)封后第五日即 測(cè)不出殘留量。但環(huán)氧乙烷對(duì)人體有毒，使用時(shí)需注意安全。 1 4 2 黃曲霉毒素去毒方法 對(duì)于已經(jīng)含有黃曲霉毒素的食品和飼料，由于黃曲霉毒素十分耐熱，加熱到2 0 0 ( 2 才能完全被破壞，因此一般烹調(diào)加工法均不能徹底破壞毒素。當(dāng)糧食作物己被黃曲霉毒 素污染時(shí)，如何去毒是一個(gè)復(fù)雜的問(wèn)題，而且由于糧食作物數(shù)量大，種類(lèi)多，也給去毒 工作帶來(lái)一定的困難。 目前去毒方法大部分研究國(guó)內(nèi)尚處于試驗(yàn)階段，當(dāng)前實(shí)際應(yīng)用的有以下幾種： a 人工或機(jī)械撿除霉粒：此法適用于花生仁，效果較好。由于黃曲霉毒素主要集中 在霉壞、破損、皺皮及變色的花生粒中，因此只要從花生仁中挑除霉壞粒即可使黃曲霉 毒素含量大為降低，經(jīng)嚴(yán)格挑選后可達(dá)到容許量標(biāo)準(zhǔn)以下，有人試驗(yàn)5 0 公斤花生仁， 經(jīng)挑選后霉粒控制在3 0 粒以下，則其黃曲霉毒素含量可降至5 r t g k g 以下。其中花生也 可以應(yīng)用活性白土吸附法驅(qū)除花生油中的黃曲霉毒素達(dá)到同樣效果。 b 植物油的堿去毒：油料作物的種子污染黃曲霉毒素后，榨出的油中亦含有毒素。 用堿煉法去毒，能達(dá)到較滿意的效果，而堿煉法本來(lái)就是油的一種精制方法。具體作法 是用1 的燒堿精煉，再用水洗兩次( 1 0 份油用1 份水) ，然后再用白陶土9 0 作用5 - 3 0 分鐘，油中的黃曲霉毒素含量可降至5 1 t g k g 以下，堿煉法去毒的原理是n a o h 可打破 黃曲霉毒素b 。的六碳環(huán)內(nèi)酯，變成香豆毒素鹽，其反應(yīng)如下： 矗a 0 h c l 如加鹽酸，香豆素鹽可變?yōu)辄S曲霉毒素b l ，但香豆素鹽溶于水，在水洗時(shí)可被洗去。 c 對(duì)于喂飼動(dòng)物霉變較厲害的飼料時(shí)，可通過(guò)在飼料中添加蛋白質(zhì)含量較高的魚(yú)粉 等飼料也可大大降低黃曲霉毒素對(duì)動(dòng)物的危害。 d 生物脫毒法該法篩選某些微生物，利用其生物轉(zhuǎn)化作用，使霉菌毒素破壞或轉(zhuǎn)變 為低毒物質(zhì)。已經(jīng)報(bào)道的微生物有無(wú)根根酶、米根酶、黑曲霉、枯草桿菌等對(duì)去除黃曲 霉毒素有較好的效果。 e 輻射法紫外線或7 射線可有效地殺死霉菌和破壞黃曲霉毒素的化學(xué)結(jié)構(gòu)，以達(dá)到 6 貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b 檢測(cè)及應(yīng)用 去毒的目的。用高壓汞燈紫外線大劑量的照射，去毒率可達(dá)9 7 9 9 。 f 添加維生素c 維生素c 可阻斷黃曲霉毒素b l 的環(huán)氧化作用從而阻止其氧化為活 性形式的毒性物質(zhì)。在日糧中添加一定量的維生素c ，再加上適當(dāng)水平的氨基酸，是克 服黃曲霉毒素中毒的有效方法。 g 黏結(jié)劑法目前使用黏結(jié)劑在體外的黏結(jié)黃曲霉毒素b l 功效已經(jīng)得到肯定，主要 的黏結(jié)劑有水合硅鋁酸鈉鈣( h s c a s ) ，黏土，沸石、膨潤(rùn)土、活性碳、蒙脫土等黏結(jié) 劑。但h s c a s 在體內(nèi)的黏結(jié)效果同體外一樣。黏結(jié)劑對(duì)黃曲霉毒素的黏結(jié)要達(dá)到好的 ，一、 效果，對(duì)黏結(jié)劑的最起碼要求是具有多孔性，且其孔徑在o 0 1 5 - 0 0 9 0 毫米( 1 5 0 埃- 9 0 0 。 i 埃) 范圍內(nèi)。 h 允許量標(biāo)準(zhǔn)的制訂，食品中有害物質(zhì)允許量的制訂，除了對(duì)人民健康提供保障外， 也還能促進(jìn)食品的生產(chǎn)，保障人民的生活需要。黃曲霉毒素在食品中的允許量，許多國(guó) 家也都向低的趨勢(shì)發(fā)展，但這只有在防霉去毒的措施跟上后，允許量也才有減低的基礎(chǔ)， 世界衛(wèi)生組織( w h o ) 建議自1 9 7 5 年4 月1 日起將1 9 7 0 年所規(guī)定的果實(shí)及其產(chǎn)品中 的黃曲霉毒素的“可行性標(biāo)準(zhǔn)”( “a c t i o n a b l el e v e l ”) 由2 0 p g k g 降至1 5 p g k g 以下，在 將來(lái)隨著檢驗(yàn)水平的提高，限量標(biāo)準(zhǔn)將進(jìn)一步下降。目前，我國(guó)對(duì)一般食品允許量是 5 p g k g ，在加入w t o 后，容許量將下降到o 1 1 p 啦g 。 1 5 黃曲霉毒素的限量標(biāo)準(zhǔn) 由于黃曲霉毒素的危害及分布的廣泛性，世界各國(guó)非常重視食品和飼料中存在黃曲 霉毒素的問(wèn)題。很多國(guó)家都普查了黃曲霉毒素的污染情況，并采取了一定的措施，制定 了相關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)。 世界衛(wèi)生組織、聯(lián)合國(guó)糧食和農(nóng)業(yè)組織及國(guó)際兒童福利基金會(huì)于一九六六年規(guī)定食 品中黃曲霉毒素的最高允許量為3 0 p 眺。一九七。年起，世界衛(wèi)生組織決定將食品 中黃曲霉毒素的最高允許量由3 0 t t g k g 降低到2 0 i t g k g 。一九七五年又從2 0 1 x g k g 降低為 1 5 弘g ，k 9 1 1 l 。1 9 9 5 年世界衛(wèi)生組織制定的食品中a f b l 最高允許濃度為1 5 “g k g ，嬰兒食 品中不得檢出【6 2 】；美國(guó)聯(lián)邦政府有關(guān)法律規(guī)定人類(lèi)消費(fèi)食品和奶牛飼料中的總黃曲霉毒 素含量( 指b l + b 2 + g 1 + g 2 的總量) 不能超過(guò)1 5 n g k g ；歐盟國(guó)家的規(guī)定更加嚴(yán)格，要求人類(lèi) 生活消費(fèi)品中的a f b i 的含量不超過(guò)2 姍肚g ，總量不超過(guò)4 峙依一6 3 】。我國(guó)對(duì)a f b l 的污染 和控制也非常重視，曾組織專(zhuān)門(mén)人員對(duì)肝癌高發(fā)區(qū)的江蘇、廣西等省連續(xù)多年進(jìn)行流行 病學(xué)調(diào)查和監(jiān)測(cè)，并在1 9 8 2 年頒布了糧油和發(fā)酵食品中的a f b - 允許量標(biāo)準(zhǔn)。各國(guó)對(duì)食品 貴州大學(xué)碩士學(xué)位論文 辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒索b 一檢測(cè)及應(yīng)用 和飼料中黃曲霉限量正逐年降低，并根據(jù)本國(guó)情況制定了嚴(yán)格的標(biāo)準(zhǔn)。 下面是部分國(guó)家和地區(qū)制定的黃曲霉毒素限量標(biāo)準(zhǔn)，見(jiàn)表1 1 。 表1 1 部分國(guó)家和地區(qū)對(duì)食品中黃曲霉毒素的最高允許含量【1 2 】 1 6 黃曲霉毒素分析方法概述 ，) 由于黃曲霉毒素具有毒性大、致癌力強(qiáng)、含量低( 通常0 2 0 0 p g k g ，即0 2 0 0 a g k g ) 一 和結(jié)構(gòu)相似的特點(diǎn)，目前食品中a f b - 限量已經(jīng)成為限制出口的技術(shù)壁壘，為保障食用 者健康及對(duì)出口貿(mào)易需要，提高a f b l 的檢測(cè)能力、發(fā)展快速準(zhǔn)確靈敏的檢測(cè)技術(shù)勢(shì)在 必行。自6 0 年代以來(lái)，建立的檢測(cè)方法已經(jīng)達(dá)3 0 余種，這些方法可分為五大類(lèi)【13 】：一 類(lèi)是定性檢測(cè)方法，主要是一些簡(jiǎn)單生物學(xué)方法( 約1 0 種，現(xiàn)在已停止使用) ；第二類(lèi)是 半定量檢測(cè)方法如薄層色譜法( t l c ) ；第三類(lèi)是定量檢測(cè)方法，包括建立在色譜基礎(chǔ) 上的理化方法，如液相色譜法( l c ) 、高效液相色譜法( h p l c ) 、和近年來(lái)新發(fā)展的質(zhì) 譜檢測(cè)( m a s s ) ；第四類(lèi)是建立在免疫化學(xué)基礎(chǔ)上的可快速測(cè)定的方法，如放射免疫測(cè) 定( r i a ) 和酶聯(lián)免疫測(cè)定方法( e l i s a ) ；第五類(lèi)是免疫化學(xué)和儀器分析結(jié)合的方法免 疫親和柱一熒光分光光度法、免疫親和柱h p l c 法【1 4 “甑6 6 1 等。 1 6 1 薄層色譜法( t l c ) t l c 法是檢測(cè)a f b l 的最常用的方法，也是我國(guó)測(cè)定食品及飼料中a f b l 的國(guó)家標(biāo) 準(zhǔn)之一，其原理是試樣中黃曲霉毒素b 。經(jīng)提取、濃縮、薄層分離后，在波長(zhǎng)3 6 5 n m 紫 外光下產(chǎn)生藍(lán)紫色熒光，根據(jù)其在薄層上顯示熒光的最低檢出量來(lái)測(cè)定含量1 1 5 】。t l c 有 單向展開(kāi)和雙向展開(kāi)法，其中雙向展開(kāi)法能進(jìn)一步除去樣品中的雜質(zhì)，提高靈敏度，省 貴州人學(xué)碩十學(xué)位論文辣椒調(diào)味品中黃曲霉毒素b t 檢測(cè)及應(yīng)用 去了柱層析等凈化操作步驟。由于t l c 方法測(cè)定黃曲霉毒素b 1 不是很專(zhuān)一，樣品中其 他熒光物質(zhì)的干擾，使其它雜質(zhì)的r f 值與a f t b l 一致，造成測(cè)量誤差，要確定是否是 黃曲霉毒素，常常需要其它的實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。 為提高t l c 分辨率，高效薄層層析法( h p t l c ) 已廣泛應(yīng)用于一些樣品的黃曲霉 毒素的測(cè)定，c o k 一6 7 】認(rèn)為：利用h p t l c 法分析黃曲霉毒素可根據(jù)分析樣品，改變各種 分析條件，如溶劑、進(jìn)樣技術(shù)、展開(kāi)槽、檢測(cè)方式等，以得到最佳效果。用雙向h p t l c 快速分析農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉毒素，以苯一乙腈萃取，無(wú)水乙醚初展，再以c h c l 廣二甲苯一 丙酮展開(kāi)，3 6 6 n m 檢測(cè)，可使b l 、b 2 、g 卜g 2 的檢出限達(dá)o 8 、o 4 、o 7 、o 4 p , g k g 。薄 層掃描儀的出現(xiàn)，使t l c 或h p t l c 法實(shí)現(xiàn)了定性定量的自動(dòng)化，而不需要目測(cè)最低黃 曲霉毒素含量，展開(kāi)后可選擇一定波長(zhǎng)，以標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照，直接測(cè)定a f t b l 的含量，使 分析速度加快。 雖然t l c 法由于設(shè)備簡(jiǎn)單，成本低，易于普及到基層單位測(cè)定，國(guó)內(nèi)外仍然使用， 但由于該方法操作步驟多，樣品前處理煩瑣，并且提取和凈化效果不夠理想，提取液中 雜質(zhì)較多因而在展開(kāi)時(shí)影響斑點(diǎn)的熒光度，導(dǎo)致靈敏度下降。但t l c 法是a f b l 的經(jīng)典 方法，仍為普通實(shí)驗(yàn)室的