GB 5009.158-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素K1的測定

016    前  言本標(biāo)準(zhǔn)代替003蔬菜中維生素010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 嬰幼兒食品和乳品中維生素本標(biāo)準(zhǔn)與003相比,主要變化如下:標(biāo)準(zhǔn)名稱修改為“食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中維生素增加了高效液相色譜增加了液相色譜刪除了高效液相色譜0161    食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中維生素圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中維生素標(biāo)準(zhǔn)第一法為高效液相色譜二法為液相色譜適用于各類配方食品、植物油、水果和蔬菜中維生素一法 高效液相色譜理嬰幼兒食品和乳品、植物油等樣品經(jīng)脂肪酶和淀粉酶酶解,正己烷提取樣品中的維生素柱柱后還原,熒光檢測器檢測,外標(biāo)法定量。水果、蔬菜等低脂性植物樣品,用異丙醇和正己烷提取其中的維生素中性氧化鋁柱凈化,去除葉綠素等干擾物質(zhì)。用柱柱后還原,熒光檢測器檢測,外標(biāo)法定量。3 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。水乙醇(酸鉀(水硫酸鈉(丙醇(己烷(醇(色譜純。氫呋喃(色譜純。酸乙酯(乙酸(色譜純?；\(色譜純。水乙酸鈉(氧化鉀(肪酶:酶活力700U/4 淀粉酶:酶活力5 鋅粉:粒徑50m70m。0162    0%氫氧化鉀溶液:稱取2020卻后,加水至50存于聚乙烯瓶中。酸鹽緩沖液(40%水至500 正己烷0+10):量取90入10勻。動相:量取甲醇900氫呋喃100勻后,聲溶解后,準(zhǔn)品維生素314純度99%,或經(jīng)國家認(rèn)證并授予標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。生素mg/準(zhǔn)確稱取50生素甲醇溶解并定容至刻度。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器中,在避光保存,保存期2個月。標(biāo)準(zhǔn)儲備液在使用前需要進(jìn)行濃度校正,校正方法參照附錄A。生素00g/甲醇至刻度,搖勻。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器中,在避光保存,保存期2個月。生素甲醇至刻度,搖勻。準(zhǔn)系列工作溶液:甲醇定容至刻度,維生素0ng/0ng/00ng/00ng/00ng/性氧化鋁:粒徑50m150m。性氧化鋁柱:2g/6料中含10%水,可直接購買商品柱,也可自行裝填。注:中性氧化鋁柱裝填方法:a) 填料處理:取200150干燥箱中烘烤2h,加蓋后于干燥器中冷卻至室溫,緩慢加入20加邊搖,加完后加上瓶蓋,放入80烘箱中3出后,劇烈振搖,直至瓶內(nèi)氧化鋁自由流動,無結(jié)塊,置于干燥器中冷卻30用。b) 層析柱裝填:取6入篩板,加入一塊篩板,用裝填工具壓緊。柱:柱長50柱可直接購買商品柱,也可自行裝填。注:a) 鋅柱填裝方法:將鋅粉密集裝入不銹鋼材質(zhì)的柱套(柱長50。裝柱時,應(yīng)連續(xù)少量多次將鋅粉裝入柱中,邊裝邊輕輕拍打,以使裝入的鋅粉緊密。b) 鋅柱接入儀器前,須將液相色譜儀所用管路中的水排干?？诪V頭: 效液相色譜儀:帶熒光檢測器。0163    漿機(jī)。速粉碎機(jī)?？棑v碎機(jī)。旋振蕩器。溫水浴振蕩器。4.7 平:心機(jī):轉(zhuǎn)速6000r/轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。吹儀。聲波振蕩器。5 樣制備米粉、奶粉等粉狀樣品經(jīng)混勻后,直接取樣;片狀、顆粒狀樣品,經(jīng)樣本粉碎機(jī)磨成粉,儲存于樣品袋中備用;液態(tài)乳、植物油等液態(tài)樣品搖勻后,直接取樣;水果、蔬菜等取可食部分,水洗干凈,用紗布擦去表面水分,經(jīng)勻漿器勻漿,儲存于樣品瓶中備用。制樣后,需盡快測定。樣處理警示:處理過程應(yīng)避免紫外光直接照射,盡可能避光操作。幼兒食品和乳品、解準(zhǔn)確稱取經(jīng)均質(zhì)的試樣1g5g(50入5體樣品直接吸取5物油不需加水稀釋),加入磷酸鹽緩沖液(勻,含淀粉的樣品可以不加淀粉酶),加蓋,渦旋2勻后,置于372恒溫水浴振蕩器中振蕩2其充分酶解。取取出酶解好的試樣,分別加入10勻后加入10旋或振蕩提取10000r/將酶解液轉(zhuǎn)移至150置分層(如發(fā)生乳化現(xiàn)象,可適當(dāng)增加正己烷或水的加入量,以排除乳化現(xiàn)象),轉(zhuǎn)移上清液至100下層液再加入10復(fù)操作1次,合并上清液至上述旋蒸瓶中?？s將上述正己烷提取液旋蒸至干(如有殘液,可用氮?dú)廨p吹至干),用甲醇轉(zhuǎn)移并定容至5勻,液待進(jìn)樣。不加試樣,按同一操作方法做空白試驗(yàn)。0164    果、取準(zhǔn)確稱取1g5g(均質(zhì)勻漿的樣品于50入5旋1聲5加入10旋振蕩提取3000r/取上清液于25下層溶液中加入10復(fù)提取1次,合并上清液于上述容量瓶中,正己烷定容至刻度,用移液管準(zhǔn)確分取上清液1樣品中維生素10氣輕吹至干,加入1凈化?；?、濃縮將上述1提取液流至近干時,5氣吹干后,用甲醇定容至5液供分析測定。不加試樣,按同一操作方法做空白試驗(yàn)。譜參考條件a) 色譜柱:長250徑5m,或具同等性能的色譜柱;b)鋅還原柱:柱長50c)流動相:d)流速:1mL/e)檢測波長:激發(fā)波長為243射波長為430nm;f)進(jìn)樣量:10L;g)標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見附錄B。準(zhǔn)曲線的制作采用外標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行定量。將維生素定相應(yīng)的峰面積,以峰面積為縱坐標(biāo),以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算線性回歸方程。樣溶液的測定在相同色譜條件下,將制備的空白溶液和試樣溶液分別進(jìn)樣,進(jìn)行高效液相色譜分析。以保留時間定性,峰面積外標(biāo)法定量,根據(jù)線性回歸方程計(jì)算出試樣溶液中維生素 分析結(jié)果的表述試樣中維生素)計(jì)算:X=3100m000(1)式中:X 試樣中維生素位為微克每百克(g/100g);由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中維生素位為納克每毫升(ng/提取液總體積,單位為毫升(定容液的體積,單位為毫升(0165    100將結(jié)果單位由微克每克換算為微克每百克樣品中含量的換算系數(shù);m試樣的稱樣量,單位為克(g);分取的提取液體積(嬰幼兒食品和乳品、植物油2),單位為毫升(1000將濃度單位由ng/算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。7 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8 其他嬰幼兒食品和乳品、植物油,當(dāng)取樣量為1g,定容500g,定量限為5g/100g;果蔬樣品當(dāng)取樣量為5g,提取液分取5容500g,定量限為5g/100g。第二法 液相色譜理嬰幼兒食品和乳品、植物油等樣品經(jīng)脂肪酶和淀粉酶酶解,用正己烷提取樣品中的維生素聯(lián)質(zhì)譜檢測,同位素內(nèi)標(biāo)法定量。水果、蔬菜等低脂性植物樣品,用異丙醇和正己烷提取其中的維生素中性氧化鋁柱凈化,去除葉綠素等干擾物質(zhì)。用聯(lián)質(zhì)譜檢測,同位素內(nèi)標(biāo)法定量。10 試劑和材料除非另有說明,本方法所用試劑均為分析純,水為6682規(guī)定的一級水。水乙醇(酸鉀(氧化鉀(酸(色譜純。酸銨(色譜純。丙醇(己烷醇(色譜純。酸乙酯(肪酶:酶活力700U/粉酶:酶活力0166    0%氫氧化鉀溶液:稱取2020卻后,加水至50存于聚乙烯瓶中。酸鹽緩沖液(40%水至500己烷0+10):量取90入10勻。動相:聲溶解后,生素314純度生素31233937純度生素mg/準(zhǔn)確稱取50生素甲醇溶解并定容至刻度。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器中,在避光保存,保存期2個月。標(biāo)準(zhǔn)儲備液在使用前需要進(jìn)行濃度校正,校正方法參照附錄A。生素00g/甲醇至刻度,搖勻。將溶液轉(zhuǎn)移至棕色玻璃容器中,在避光保存,保存期2個月。生素g/甲醇至刻度,搖勻。生素00g/準(zhǔn)確稱取1生素甲醇溶解并定容至10生素g/甲醇至刻度,搖勻。準(zhǔn)系列工作溶液:甲醇定容至刻度,此標(biāo)準(zhǔn)系列工作液維生素0ng/0ng/00ng/00ng/00ng/性氧化鋁:粒徑50m150m。性氧化鋁柱:2g/6料中含10%水,可直接購買商品柱,也可自行裝填。注:中性氧化鋁柱裝填方法:a) 填料處理:取200150干燥箱中烘烤2h,加蓋后于干燥器中冷卻至室溫,緩慢加入20加邊搖,加完后加上瓶蓋,放入80烘箱中3出后,劇烈振搖,直至瓶內(nèi)氧化鋁自由流動,無結(jié)塊,置于干燥器中冷卻30用。b) 層析柱裝填:取6入篩板,加入一塊篩板,用裝填工具壓緊?？诪V頭:1 相色譜電噴霧離子源(0167    漿機(jī)。速粉碎機(jī)?？棑v碎機(jī)。旋振蕩器。溫水浴振蕩器。11.7 平:心機(jī):轉(zhuǎn)速6000r/轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。吹儀。聲波振蕩器。12 樣制備米粉、奶粉等粉狀樣品經(jīng)混勻后,直接取樣;片狀、顆粒狀樣品,經(jīng)樣本粉碎機(jī)磨成粉,儲存于樣品袋中備用;液態(tài)乳、植物油等液態(tài)樣品搖勻后,直接取樣;水果、蔬菜等取可食部分,水洗干凈,用紗布擦去表面水分,經(jīng)勻漿器勻漿,儲存于樣品瓶中備用。制樣后,需盡快測定。樣處理警示:處理過程應(yīng)避免紫外光照,盡可能避光操作。幼兒食品和乳品、解準(zhǔn)確稱取經(jīng)均質(zhì)的試樣1g5g(50入同位素內(nèi)標(biāo)使用液(1g/入5體樣品直接吸取5物油不需加水稀釋),加入磷酸鹽緩沖液(勻,含淀粉的樣品可以不加淀粉酶),加蓋,渦旋2勻后,置于372恒溫水浴振蕩器中振蕩2其充分酶解。取取出酶解好的試樣,分別加入10勻后加入10旋提取10000r/移上清液至另一50下層液再加入10旋5000r/并上清液,正己烷定容至25凈化?；谏鲜鎏崛∫褐屑尤?0置分層后,分取5吹至干,加入1液待進(jìn)樣。不加試樣,按同一操作方法做空白試驗(yàn)。0168    果、取準(zhǔn)確稱取1g5g(均質(zhì)勻漿的樣品于50入同位素內(nèi)標(biāo)使用液(1g/入5旋1聲5入10旋振蕩提取3000r/取上清液于25下層溶液中再加入10復(fù)提取1次,合并上清液于上述容量瓶中,正己烷定容至刻度,用移液管準(zhǔn)確分取上清液5氣輕吹至干,加入1凈化?；瘜⑸鲜?提取液流至近干時,5氣吹干后加入1液供分析測定。不加試樣,按同一操作方法做空白試驗(yàn)。譜參考條件a) 色譜柱:長50具同等性能的色譜柱;b)流動相:甲醇(酸+甲酸銨);c)流速:d)柱溫:30;e)進(jìn)樣量:5L。譜參考條件a) 電離方式:b)鞘氣溫度:375;c)鞘氣流速:12L/d)噴嘴電壓:500V;e)霧化器壓力:172f)毛細(xì)管電壓:4500V;g)干燥氣溫度:325;h)干燥氣流速:10L/i)多反應(yīng)監(jiān)測(式。錐孔電壓和碰撞能量見表1,質(zhì)譜圖見附錄C。表1 m/z)子離子(m/z)碰撞能量/272322維生素023*為定量離子。0169    準(zhǔn)曲線的制作將標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液按濃度由低到高注入液相色譜得相應(yīng)色譜峰的峰面積,以標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液中維生素生素制標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣溶液的測定將試樣溶液注入液相色譜得相應(yīng)色譜峰的峰面積,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得到試樣溶液中維生素試樣溶液中維生素性試樣中目標(biāo)化合物色譜峰的保留時間與標(biāo)準(zhǔn)色譜峰的保留時間相比較,變化范圍應(yīng)在內(nèi)。待測化合物定性離子色譜峰的信噪比應(yīng)3,定量離子色譜峰的信噪比應(yīng)10。每種化合物的質(zhì)譜定性離子應(yīng)出現(xiàn),至少應(yīng)包括一個母離子和兩個子離子,而且同一檢測批次,對同一化合物,樣品中目標(biāo)化合物的兩個子離子的相對豐度比與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液相比,其允許偏差不超過表2規(guī)定的范圍。表2 定性時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50%>20%50%>10%20%10%允許相對偏差20%25%30%50%13 分析結(jié)果的表述試樣中維生素)計(jì)算:X=3100m000(2)式中:X 試樣中維生素位為微克每百克(g/100g);由標(biāo)準(zhǔn)曲線得到的試樣溶液中維生素位為納克每毫升(ng/提取液總體積,單位為毫升(定容液的體積,單位為毫升(100將結(jié)果單位由g/00m試樣的稱樣量,單位為克(g);分取的提取液體積,單位為毫升(1000將濃度單位由ng/算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。14 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。01610   15 其他嬰幼兒食品和乳品、植物油,當(dāng)取樣量為1g,提取液分取5縮后定容1