熒光分光光度法測定維生素B2的含量

1、熒光分光光度法測定維生素E2的含量實驗報告應(yīng)用化學(環(huán)境檢測與分析)、實驗?zāi)康?、 掌握標準曲線法定量分析維生素E2的基本原理。2、了解熒光分光光度計的基本原理、結(jié)構(gòu)及性能，掌握其基本操作。二、實驗原理1什么是熒光？熒光是光致發(fā)光。當物質(zhì)的分子接受光子能量被激發(fā)后，從激發(fā)單重態(tài)的最低振動能級返回 基態(tài)時發(fā)射的光。熒光與結(jié)構(gòu)的關(guān)系3熒光與環(huán)境因素的關(guān)系取代基的性質(zhì)、溶劑的極性、體系的pH和溫度。維生素 B2(Vitamin E2)C17H20N4O6，相對分子量為:,分子式:，別名：核黃素(Riboflavin , RF)，是橘黃色無臭的針狀結(jié)晶376.37。因其色黃且含有核糖醇，故稱為核黃素。

2、結(jié)構(gòu)式為：HOOHOHB2易溶于水而不由于分子中有三個芳香環(huán)，具有平面剛性結(jié)構(gòu)，因此它能夠發(fā)射熒光。維生素 溶于乙醚等有機溶劑，在中性或酸性溶液中穩(wěn)定，光照易分解，對熱穩(wěn)定。維生素B2溶液在430440nm藍光的照射下，發(fā)出綠色熒光，熒光峰在535nm附近。維生素 B2在pH= 6 7的溶液中熒光強度最大，而且其熒光強度與維生素B2溶液濃度呈線性關(guān)系，因此可以用熒光光譜法測維生素B2的含量。維生素 B2在堿性溶液中經(jīng)光線照射會發(fā)生分解而轉(zhuǎn)化為另一物質(zhì)一一光黃素，光黃素也是一個能發(fā)熒光的物質(zhì)，其熒光比維生素B的熒光強得多，故測維生素 B的熒光時溶液要控制在酸性范圍內(nèi)，且在避光條件下進行。在稀溶液

3、中，熒光強度 F與物質(zhì)的濃度c有以下關(guān)系：F= 2.303 I o e be當實驗條件一定時，熒光強度與熒光物質(zhì)的濃度呈線性關(guān)系：F=Ke這是熒光光語法定量分析的依據(jù)。三、儀器與試劑1、 主要儀器：熒光分光光度計（日立 F 7000）;比色皿：1cm；容量瓶：50mL;移液管：5mL2、 試劑：核黃素；維生素B2藥片四、實驗步驟1. 溶液的配制標準溶液的配制：精確稱取2 mg核黃素（VB2），用超純水于50ml棕色容量瓶中定容待測液的配制：將維生素R藥片研磨成粉末狀，精確稱取2mg,用超純水于50ml棕色容量瓶中定容;2. 掃描激發(fā)光譜和熒光光譜3. 標準曲線的繪制在室溫條件下，分別吸取1.0

4、、2.0、3.0、4.0、5.0標準溶液于50ml棕色容量瓶中定容。用超純水作空白試樣，測定溶液熒光強度值。用所測結(jié)果繪制熒光強度（F）對濃度（c）的曲線。4. 待測液VB2含量的測定及數(shù)據(jù)處理五、實驗結(jié)果及數(shù)據(jù)處理rrx 142.0 Dta: 411GNd.SlannfnApe(rimlErtd(nm)HeighllData)ValleyfnmlValley(Dala)1250.0280.03020138J302.04.4523020370040(2 045133402026 06340Z0442. D508.0ms508.01.7704558 55U0GMO5&75EOOO&081入 ex

5、 = 442nm6 11T5O7MlollolQo o DR B 07 9 03 E Q928.JI7 19 22.13 so o Q8-El-37:200o o o54.24.DQ.3 5 7o o o0.B6.303788入 em= 524nmVB2標準曲線及藥片中VB2含量的測定（大濃度）5 7 0 2 84 6 5 5 716.30.業(yè)乩閔12 3 4 5$Eip.H 屮總陰當衛(wèi) CffliG(imgAii AvgConcISD12EHJ139.3B511 st ord.Ar *jConeh 冊LFotce mrve throudi zero Cent = ENln 阪麗用吃 |4 O

6、DDAO： |-757H |o9S5程：b 知如9VB2標準曲線及藥片中VB2含量的測定（稀釋到中間濃度）4-16 453D.E714.5357.52 eazag40a剛妙0003.213.27篦北-ajw0.1710.4930.257 -O.5A3Q9557 013917 1.1260 58641 143mg/nL: Z3.1Q2 Dala 37.25Swip.Nq.4420/524.0C (rns/mL)Avg Cone ISO I CV需116.72C.%7六、總結(jié)、討論1、實驗注意事項：(1) 配制標準溶液時，為了減少儀器偏差，取不同體積的同種溶液應(yīng)用同一移液管。(2) 因熒光是從石英

7、池下部通過，所以拿取石英池時，應(yīng)用手指捏住池體的上部，不能接觸 下部。清洗樣品池后，應(yīng)先用吸水紙吸干四個面的液滴，再用擦鏡紙往同一方向進行輕輕擦拭。(3) 在使用熒光分光光度計時，須按照既定程序進行。在測定系列標準溶液的濃度和熒光強 度時，必須按順序放入測定。(4) 在測試樣品時，應(yīng)注意樣品的濃度不能太高，否則由于存在熒光猝滅效應(yīng)，樣品濃度與熒光強度不呈線性關(guān)系，造成定量工作出現(xiàn)誤差。2、此次實驗，影響標準曲線的線性的主要因素是配制溶液時，操作是否規(guī)范、標準。七、思考題1、試解釋熒光光度法較吸收光度法靈敏度高的原因？答：由于現(xiàn)代電子技術(shù)具有檢測十分微弱光信號的能力，并且熒光強度與激發(fā)光強度成正比， 提高激發(fā)光強度也可以增大熒光強度，使測定的靈敏度提高；而吸收光度法測定的是吸光度，不管 是增大入射光強度，還是提高檢測器的靈敏度，都會使透射光信號與入射光信號以同樣的比例增大,吸光度值不會改變，因此