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1、基因工程復(fù)習(xí)題一、名詞解釋：(1020%基因工程基因工程工具酶限制性內(nèi)切酶限制性內(nèi)切酶的 Star活性PCR引物PCR擴(kuò)增平臺(tái)期DNA芯片 基因組文庫(kù) cDNA文庫(kù) 轉(zhuǎn)化 限制與修飾系統(tǒng)原位雜交：將細(xì)胞或組織的核酸固定保持在原來(lái)的位置上，然后用探針與之雜交的一種核酸分子雜交技術(shù)，該方法可較好地反映目的基因在細(xì)胞或組織中的分布和表達(dá)變化。粘性末端：雙鏈 DNA被限制性內(nèi)切酶切割后，形成的兩條鏈錯(cuò)開(kāi)幾個(gè)堿基，而不是平齊的 末端。Northern印跡雜交：將 RNA進(jìn)行變性電泳后，再轉(zhuǎn)移到固相支持物上與探針雜交的一種核 酸分子雜交技術(shù)，可用于檢測(cè)目的基因的轉(zhuǎn)錄水平。轉(zhuǎn)位：一個(gè)或一組基因片段從基因組的

2、一個(gè)位置轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位置的現(xiàn)象。基因工程：在體外，用酶學(xué)方法將各種來(lái)源的DNA與載體DNA連接成為重組 DNA，繼而通過(guò)轉(zhuǎn)化和篩選得到含有目的基因的宿主細(xì)胞，最后進(jìn)行擴(kuò)增得到大量相同重組DNA分子的過(guò)程稱為基因工程，又稱基因克隆、DNA克隆和重組DNA等。目的基因：基因工程中，那些被感興趣的、被選作研究對(duì)象的基因就叫作目的基因。連接器：人工合成的一段含有某些酶切位點(diǎn)寡核苷酸片段，連接到目的基因的兩端，便于基因重組中的切割和連接。轉(zhuǎn)化：受體細(xì)胞被導(dǎo)入外源DNA并使其生物性狀發(fā)生改變的過(guò)程。停滯效應(yīng)：PCR中后期，隨著目的 DNA擴(kuò)展產(chǎn)物逐漸積累，酶的催化反應(yīng)趨于飽和，DNA擴(kuò)增產(chǎn)物的增加減慢，進(jìn)

3、入相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)，即為停滯效應(yīng)，又稱平臺(tái)期。逆轉(zhuǎn)錄PCR:以mRNA為原始模板進(jìn)行的 PCR反應(yīng)。PCR:即聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。在模板，引物， 4種dNTP和耐熱DNA聚合酶存在的條件下，特 異性地?cái)U(kuò)增位于兩段已知序列之間的DNA區(qū)段地酶促合成反應(yīng)。a-互補(bǔ)(acomplementation ):指在 M13噬菌體DNA 或PUC質(zhì)粒序列中，插入了 lac啟動(dòng) 子-操縱子基因序列以及編碼 伕半乳糖苷酶N-端145個(gè)氨基酸的核苷酸序列(又稱 a肽)， 該序列不能產(chǎn)生有活性的 3半乳糖苷酶。感染(infection )特指以 入噬菌體、粘粒和真核細(xì)胞病毒為載體的重組DNA分子，在體外經(jīng)過(guò)包裝成具有感染能

4、力的病毒或噬菌體顆粒，才能感染適當(dāng)?shù)募?xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)增。 其中，由噬菌體和細(xì)胞病毒介導(dǎo)的遺傳信息的轉(zhuǎn)移過(guò)程又稱為轉(zhuǎn)導(dǎo)(tran sductio n)。47、轉(zhuǎn)染(transformation )指真核細(xì)胞主動(dòng)攝取或被動(dòng)導(dǎo)入外源DNA片段而獲得新的表型的過(guò)程。二、填空題(20%1、 DNA片段重組連接的方法主要有平端連接、粘端連接、同聚尾連接、加接頭連接。2、感受態(tài)細(xì)胞是指 具有攝取外源 DNA 分子能力的細(xì)胞 。3、入噬菌體蛋白對(duì)重組 DNA體外包裝時(shí)，包裝長(zhǎng)度為野生型入DNA的75105%。5、 PCR反應(yīng)體系含有耐熱的TaqDNA聚合酶，化學(xué)合成的寡核苷酸引物，四種dNTP，合 適的緩沖

5、液體系。6、 核酸探針包括：cDNA探針；基因組 DNA探針；寡核苷酸探針和RNA探針。7、 部分酶切可采取的措施有：(1) (3)等。(1)減少酶量；(2)縮短反應(yīng)時(shí)間；(3)增大反應(yīng)體積8、 DNA聚合酶I的Klenow大片段是用切割DNA聚合酶I得到的分子量為76kDa的大片段，具有兩種酶活性：(1)； 的活性。枯草桿菌蛋白酶；(1)5-3合成酶的活性；(2)3-5外切核酸酶9、 為了防止 DNA的自身環(huán)化，可用 去雙鏈 DNA。堿性磷酸酶；5端的磷酸基團(tuán)10、基因工程中有 3 種主要類型的載體： 、。質(zhì)粒DNA ;病毒 DNA ;質(zhì)粒和病毒 DNA 雜合體11、 PBR322是一種改造

6、型的質(zhì)粒，它的復(fù)制子來(lái)源于 ，它的四環(huán)素抗性基因來(lái)自于 ，它的氨芐青霉素抗性基因來(lái)自于 。 pMBl ；pSCl01 ； pSF2124(R 質(zhì)粒)13、 DNA重組連接的方法大致分為四種： (1) (3)(4)。(1)黏性末端連接；(2)平末端連接；(3) 同聚物接尾連接；(4)接頭連接法14、 差示雜交(differentialhybridization) 技術(shù)需要 。兩種不同的細(xì)胞群體能夠表達(dá)不同的基因，即在一個(gè)群體中能夠表達(dá)一些基因，而在另一個(gè)細(xì) 胞群體中不能表達(dá)這些基因16、 將含有外源基因組一個(gè)酶切片段的質(zhì)粒稱之為含有一個(gè) ，各種此類質(zhì)粒的集合體稱之為構(gòu)建了一個(gè) ?；蚪MDNA克隆

7、； 基因組DNA文庫(kù)17、 根據(jù)Northern雜交的結(jié)果可以說(shuō)明： 。外源基因是否 進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄18、 在技術(shù)中，DNA限制性片段經(jīng)凝膠電泳分離后，被轉(zhuǎn)移到硝酸纖維 素膜(或尼龍膜)上，然后與放射性的 DNA探針雜交。Southern印跡19、 可用T4 DNA聚合酶進(jìn)行平末端的 DNA標(biāo)記，因?yàn)檫@種酶具有 和的活性。5 3合成酶；35外切核酸酶20、 根據(jù)外源片段提供的遺傳表型篩選重組體，必需考慮三種因素：(1)(2)(3)。(1)克隆的是完整的基因；(2)使用的是表達(dá)載體；不含內(nèi)含子21、放射免疫篩選的原理基于以下三點(diǎn)：(1)抗體能夠被吸附到固體支持物上；(2)同一個(gè)抗原可以同幾種抗體結(jié)合

8、；(3)抗體能夠被標(biāo)記22、 黏粒(cosmid)是質(zhì)粒一噬菌體雜合載體，它的復(fù)制子來(lái)自 、COS位點(diǎn)序列來(lái)自 ，最大的克隆片段達(dá)到 kbo質(zhì)粒； 噬菌體； 4523、 限制性內(nèi)切核酸酶是按屬名和種名相結(jié)合的原則命名的，第一個(gè)大寫(xiě)字母取自 ,第二、三兩個(gè)字母取自 ，第四個(gè)字母則用 表示。屬名的第一個(gè)字母；種名的前兩個(gè)字母；株名24、 第一個(gè)分離的限制性內(nèi)切核酸酶是 ;而第一個(gè)用于構(gòu)建重組體的限制性內(nèi)切核酸酶是o EcoK ； EcoRl25、 切口移位(nick translation)法標(biāo)記 DNA 的基本原理在于利用 的和的作用。DNA聚合酶1: 5 一 3外切核酸酶；5 3合成酶26、就

9、克隆一個(gè)基因(DNA片段)來(lái)說(shuō)，最簡(jiǎn)單的質(zhì)粒載體也必需包括三個(gè)部分：、。另外，一個(gè)理想的質(zhì)粒載體必須具有 低分子量。復(fù)制區(qū)：含有復(fù)制起點(diǎn)；選擇標(biāo)記：主要是抗性基因；克隆位點(diǎn)：便于外源DNA的插入27、 pUCI8質(zhì)粒是目前使用較為廣泛的載體。pUC系列的載體是通過(guò) 和兩種質(zhì)粒改造而來(lái)。它的復(fù)制子來(lái)自 , Amp抗性基因則是來(lái)自 。pBR322和M13 ； pMBl ;轉(zhuǎn)座子28、噬菌體之所以被選為基因工程載體，主要有兩方面的原因：一是； 二是。它在纟田菌中能夠大量繁殖，這樣有利于外源DNA的擴(kuò)增；對(duì)某些噬菌體(如 噬菌)的遺傳結(jié)構(gòu)和功能研究得比較清楚，其大腸桿菌宿主系統(tǒng)的遺傳也研究得比較詳盡2

10、9、Northern印跡和Southern印跡有兩點(diǎn)根本的區(qū)別：(2)。(1) 印跡的對(duì)象不同：Northern 是RNA , Southern是DNA ； (2)電泳條件不同，前者是變性條件，后者是非變性條件30、 限制與修飾是宿主的一種保護(hù)體系，它是通過(guò) 對(duì)外源DNA的 限制 和對(duì)自身DNA的 修 飾來(lái)實(shí)現(xiàn)的。31、 II型限制酶既具有 識(shí)別位點(diǎn) 的專一性，也具有 切割位點(diǎn) 的專一性。它作用時(shí)需要 Mg2+離子作輔助因子。32、 個(gè)體之間DNA限制酶片段長(zhǎng)度存在差異稱限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP )。33、 人工感受態(tài)的大腸桿菌細(xì)胞在溫度為 時(shí)吸附DNA, 時(shí)攝人DNA。0 C ； 42

11、 C34、 野生型的噬菌體DNA不宜作為基因工程載體，原因是：（2）o （1）分子量大，（2）酶的多切點(diǎn)，（3）無(wú)選擇標(biāo)記35、 形成平末端的方法有：用產(chǎn)生平末端的限制酶切，用S1核酸酶切除粘末端，用DNA聚合酶填平粘末端。36、回收DNA片段時(shí)，在確定 DNA條帶位置時(shí)，應(yīng)使用 長(zhǎng)波長(zhǎng)紫外燈，以最大限度減 少對(duì)DNA的照射損傷。37、 基因工程受體菌的基因型常為r-m-rec-, r-表示限制缺陷型，m-表示修飾缺陷型，rec- 表示重組缺陷型。38、 CaCl2法制備感受態(tài)細(xì)胞轉(zhuǎn)化DNA時(shí)，DNA以 DNA-Ca2+ 復(fù)合物形式吸附于細(xì)胞 表面。39、 TaqDNA聚合酶具有，缺乏 因此無(wú)

12、 。5 J 3 聚合酶活性，3 宀5 外切酶活性，校正功能40、 PCR循環(huán)次數(shù)一般設(shè)定為，過(guò)多的循環(huán)次數(shù)會(huì)導(dǎo)致的出現(xiàn)。25- 30次，PCR反應(yīng)“平臺(tái)效應(yīng)”。41、 如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割雙鏈DNA產(chǎn)生5突出的黏性末端，則可以用 進(jìn)行3末端標(biāo)記。如果用限制性內(nèi)切核酸酶切割DNA產(chǎn)生的是3突出的黏性末端， 可以用進(jìn)行3末端標(biāo)記。Klenow酶填補(bǔ)的方法；T4DNA聚合酶42、 限制酶是一類專門(mén)切割 DNA的酶，它能特異性識(shí)別切割雙鏈DNA。43、需要部分酶切時(shí)可采取的方法有：減少酶的用量；縮短反應(yīng)時(shí)間；增大反應(yīng)體積。45、重組DNA技術(shù)的基本過(guò)程：目的基因的制備；載體的選擇和制備；DNA分

13、子的體外連接；將重組 DNA導(dǎo)入宿主細(xì)胞；重組體的篩選和鑒定；重組體的擴(kuò)增、表達(dá)和其他研究。46、 在分離質(zhì)粒 DNA的菌體培養(yǎng)過(guò)程中，加入氯霉素有兩個(gè)好處：可以擴(kuò)增質(zhì)粒 DNA ；抑制了菌體的數(shù)量，有利于裂解。48、II型限制酶既具有 識(shí)別位點(diǎn) 的專一性，也具有 切割位點(diǎn) 的專一性。它作用時(shí)需要 Mg2+離子作輔助因子。50、基因工程受體菌的基因型常為r-m-rec-, r-表示限制缺陷型,m-表示修飾缺陷型 ，rec-表示重組缺陷型。52、 核酸的體外標(biāo)記法分為 和。化學(xué)法；酶法53、 核酸的體外標(biāo)記法中的酶法最常用的是 和標(biāo)記。125| ;光敏生物素標(biāo)記。54、 影響核酸分子雜交的因素有

14、：（1）核酸分子的濃度與長(zhǎng)度；（2）溫度；（3）離子強(qiáng)度；（4） 甲酰胺；(5)核酸分子的復(fù)雜性；(6 )非特異性雜交反應(yīng)等。三、選擇題(20%)1下列有關(guān)基因工程技術(shù)的敘述，正確的是()CA. 重組DNA技術(shù)所用的工具酶是限制酶、連接酶和運(yùn)載體B. 所有的限制酶都只能識(shí)別同一種特定的核苷酸序列C. 選用細(xì)菌作為重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞是因?yàn)榧?xì)菌繁殖快D. 只要目的基因進(jìn)入了受體細(xì)胞就能成功實(shí)現(xiàn)表達(dá)2、下列不屬于獲取目的基因的方法是()BA. “鳥(niǎo)槍法”B.轉(zhuǎn)錄法 C.反轉(zhuǎn)錄法D.根據(jù)已知氨基酸序列合成法3、以下說(shuō)法正確的是() AA. 在真核細(xì)胞的基因結(jié)構(gòu)中，編碼區(qū)也含有不能編碼蛋白質(zhì)的序列B.

15、終止子是轉(zhuǎn)錄終止的信號(hào)，因此它的DNA序列與終止密碼 TAA相同C. 基因的非編碼區(qū)通常不起什么作用D. 啟動(dòng)子的作用是阻礙RNA聚合酶的移動(dòng)，并使其從DNA模板鏈上脫離下來(lái)4、 n型限制性內(nèi)切核酸酶：()B(A) 有內(nèi)切核酸酶和甲基化酶活性且經(jīng)常識(shí)別回文序列(B) 僅有內(nèi)切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供(C) 限制性識(shí)別非甲基化的核苷酸序列(D)有外切核酸酶和甲基化酶活性(E)僅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一種酶提供5、 關(guān)于宿主控制的限制修飾現(xiàn)象的本質(zhì)，下列描述中只有()不太恰當(dāng)。 B(A) 由作用于同一 DNA序列的兩種酶構(gòu)成(B) 這一系統(tǒng)中的核酸酶都是H類限制性內(nèi)切

16、核酸酶(C) 這一系統(tǒng)中的修飾酶主要是通過(guò)甲基化作用對(duì)DNA進(jìn)行修飾(D) 不同的宿主系統(tǒng)具有不同的限制-修飾系統(tǒng)6、 在下列進(jìn)行 DNA部分酶切的條件中，控制那一項(xiàng)最好?() B(A) 反應(yīng)時(shí)間(B)酶量(C)反應(yīng)體積(D)酶反應(yīng)的溫度7、 限制性內(nèi)切核酸酶可以特異性地識(shí)別：() B(A) 雙鏈DNA的特定堿基對(duì)(B)雙鏈DNA的特定堿基序列(C) 特定的三聯(lián)密碼(D)以上都正確8、 在基因工程中，可用堿性磷酸酶() A(A) 防止DNA的自身環(huán)化(B)同多核苷酸激酶一起進(jìn)行DNA的5 末端標(biāo)記(C)制備突出的3 末端(D)上述說(shuō)法都正確9、 下面關(guān)于松弛型質(zhì)粒(relaxed plasmi

17、d)性質(zhì)的描述中，()是不正確的C(A) 質(zhì)粒的復(fù)制只受本身的遺傳結(jié)構(gòu)的控制，而不受染色體復(fù)制機(jī)制的制約, 因而有較多的拷貝數(shù)(B) 可以在氯霉素作用下進(jìn)行擴(kuò)增(C)通常帶有抗藥性標(biāo)記(D) 同嚴(yán)緊型質(zhì)粒融合后，雜合質(zhì)粒優(yōu)先使用松弛型質(zhì)粒的復(fù)制子10、 下列哪種克隆載體對(duì)外源DNA的容載量最大？() C(A)質(zhì)粒 (B)黏粒 (C)酵母人工染色體(YAC)(D) 噬菌體 (E) cDNA表達(dá)載體11、 Col El是惟一用作基因工程載體的自然質(zhì)粒，這種質(zhì)粒：() ACD(A)是松弛復(fù)制型(B)具有四環(huán)素抗性(C) 能被氯霉素?cái)U(kuò)增(D)能產(chǎn)生腸桿菌素)B12、 同一種質(zhì)粒 DNA，以三種不同的形

18、式存在，電泳時(shí)，它們的遷移速率是：(a)OCDNASCDNALDNA(b)SCDNALDNAOCDNA(c)LDNAOCDNASCDNA(d)SCDNAOCDNALDNA13、 能夠用來(lái)克隆 32kb以下大小的外源片段的質(zhì)粒載體是()A(A)charomid (B)plasmid (C)cosmid (D)phagemid14、 雙脫氧末端終止法測(cè)序體系與PCR反應(yīng)體系的主要區(qū)別是前者含有()D(A)模板 (B)引物(C) DNA 聚合酶(D) ddNTP15、PCR實(shí)驗(yàn)的特異性主要取決于()(A) DNA聚合酶的種類(C)引物序列的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)度(E) 循環(huán)周期的次數(shù)16、常用的Southern

19、轉(zhuǎn)膜方法有哪幾種(A)硝酸纖維素膜法(C)電轉(zhuǎn)印法17、 原位雜交可以用來(lái)檢測(cè)()(A) DNA (B) RNA18、核酸酶S1能降解()AC(A) DNA 單鏈(C) RNA單鏈(E)緩沖液C(B)反應(yīng)體系中模板 DNA的量(D)四種dNTP的濃度)。BCD(B) 毛細(xì)管虹吸印跡法(D)真空轉(zhuǎn)移法ABCD(C) cDNA ( D) RNA 和 DNA(B) DNA 雙鏈(D) DNA/RNA 雜交雙鏈19、構(gòu)建載體時(shí)，使用雙酶切相對(duì)于單酶切的優(yōu)點(diǎn)在于( A、B、C、D)(A)避免載體自身環(huán)化(B)提高連接效率(C)控制外源基因的插入方向(D) 便于轉(zhuǎn)化后的篩選(E)便于修改閱讀框20、 獲得

20、DNA重組體后，還需進(jìn)一步鑒定，可采用的方法有：(A B C D)21、(A) DNA序列測(cè)定(C)酶切鑒定(E) 進(jìn)行定點(diǎn)突變(B) PCR鑒定(D)表達(dá)產(chǎn)物的鑒定外源基因與載體的連接方式有:(A B C D E)(A)粘端連接(B) 平端連接(C) 加同聚尾連接(D)加人工接頭連接(E) 用 T 載體連接22、關(guān)于多克隆位點(diǎn)，下列敘述正確的是:(A B D)(A)是外源基因的插入部位(B) 由許多酶切位點(diǎn)組成(C) 是宿主細(xì)胞上的一段特殊序列(D) 是人工合成的一段 DNA序列(E) 含有藥物抗性基因23、用藍(lán)白斑篩選重組子時(shí)，IPTG的作用是:(A)(A) 誘導(dǎo)載體上的Lac Z基因表達(dá)

21、(B)作為顯色反應(yīng)的指示劑(C)作為酶的作用底物(D)誘導(dǎo)載體上的抗性基因表達(dá)E. 誘導(dǎo)宿主上的Lac Z基因表達(dá)24、PUC系列載體的抗性篩選標(biāo)記為:(A)卡那霉素(B)四環(huán)素(C)氨芐青霉素(D)G418(E) 氯霉素25、.免疫印跡法篩選重組體的原理是:(E)(A)根據(jù)載體抗性基因的表達(dá)(B)根據(jù)載體報(bào)告基因的表達(dá)(C)根據(jù)DNA與DNA的雜交(D) 根據(jù) DNA與mRNA的雜交(E)根據(jù)外源基因的表達(dá)26、Ti 質(zhì)粒：()ACDE(A)可從農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)到植物細(xì)胞中(B)作為雙鏈DNA被轉(zhuǎn)移作為細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)物和植物的生長(zhǎng)激素(F)在植物細(xì)胞中作為染色體外質(zhì)粒(E)(C) 在植物中導(dǎo)致腫瘤(D)

22、介導(dǎo)冠癭堿的合成,需要細(xì)菌的vir基因幫助轉(zhuǎn)移28、 關(guān)于cDNA的最正確的說(shuō)法是：( )C(A)同mRNA互補(bǔ)的單鏈DNA (B)同mRNA互補(bǔ)的雙鏈DNA(C)以mRNA為模板合成的雙鏈 DNA(D)以上都正確29、 用堿法分離質(zhì)粒 DNA時(shí)，染色體DNA之所以可以被除去，是因?yàn)椋? )C(A)染色體DNA斷成了碎片(B)染色體DNA分子量大，而不能釋放(C)染色體變性后來(lái)不及復(fù)性(D)染色體未同蛋白質(zhì)分開(kāi)而沉淀30、 關(guān)于堿解法分離質(zhì)粒DNA，下面哪一種說(shuō)法不正確 ?( )D(A)溶液I的作用是懸浮菌體(B)溶液H的作用是使 DNA變性(C) 溶液川的作用是使 DNA復(fù)性(D) 質(zhì)粒DN

23、A分子小，所以沒(méi)有變性，染色體變性后不能復(fù)性31、 在下列表型中，()是基因工程上理想的受體菌表型B(A)r+m+rec*(B)rmrec(C)rmrec+(D)r+m+rec；32、cDNA文庫(kù)包括該種生物的( )AA某些蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因B所有蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)基因C所有結(jié)構(gòu)基因 D內(nèi)含子和調(diào)控區(qū)33、Southem印跡的DNA探針()雜交。CA只與完全相同的片段B可與任何含有相同序列的DNA片段C可與任何含有互補(bǔ)序列的 DNA片段D可與用某些限制性內(nèi)切核酸酶切成的DNA片段 E以上都是34、 用下列方法進(jìn)行重組體的篩選，只有()說(shuō)明外源基因進(jìn)行了表達(dá)。CASouthem 印跡雜交 BNorthe

24、m 印跡雜交CWestern印跡D原位菌落雜交35、報(bào)告基因() ACDA以其易于分析的編碼序列代替感興趣基因的編碼序列B以其易于分析的啟動(dòng)子區(qū)代替感興趣基因的啟動(dòng)子區(qū)C能用于檢測(cè)啟動(dòng)子的活性D能用于確定啟動(dòng)子何時(shí)何處有活性 36、在利用lacZ失活的顯色反應(yīng)篩選法中，IPTG的作用是( )AA誘導(dǎo)宿主的a肽的合成B誘導(dǎo)宿主的3肽的合成C作為酶的作用底物D作為顯色反應(yīng)的指示劑37、切口移位是指在()作用下，使()帶上放射性標(biāo)記。BA DNA聚合酶I , RNA B DNA聚合酶I, DNAC DNA聚合酶川，RNA D DNA聚合酶川，DNA38、用免疫化學(xué)法篩選重組體的原理是A根據(jù)外源基因的

25、表達(dá)C根據(jù)mRNA同DNA的雜交39、分離質(zhì)粒DNA時(shí)，用蔗糖的目的是:A. 抑制核酸酶的活性C.加速蛋白質(zhì)變性40、CsCl-EB密度梯度離心法純化質(zhì)粒( )AB根據(jù)載體基因的表達(dá)D根據(jù)DNA同DNA的雜交( )BB. 保護(hù)DNA，防止斷裂D.有利于細(xì)胞破碎DNA 的原理是: ( )CA氯化銫可以較多地插入到線狀DNA中去B氯化銫可以較多地插入到 SC DNA中去C EB可以較多地插入到線狀 DNA中去D EB可以較多地插入到 SC DNA中去41、用堿法分離質(zhì)粒 DNA時(shí)，染色體DNA之所以可以被除去，是因?yàn)椋海?）CA染色體DNA斷成了碎片B染色體DNA分子量大，而不能釋放C染色體變性后

26、來(lái)不及復(fù)性D染色體未同蛋白質(zhì)分開(kāi)而沉淀42、切口平移法標(biāo)記 DNA探針時(shí)，需用的酶是：（B）A限制酶BDNase ICRNaseDDNA 連接酶E拓?fù)洚悩?gòu)酶43、重組 DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞的方法有:(A B C )A.轉(zhuǎn)化B.轉(zhuǎn)染C. 轉(zhuǎn)導(dǎo)D.轉(zhuǎn)位E.轉(zhuǎn)錄44、 關(guān)于菌落雜交法篩選重組體，下列敘述正確的是：（B D）A. 需要外源基因的表達(dá)B.需要探針與外源基因有同源性C. 需要IPTG誘導(dǎo)D.不需要外源基因的表達(dá)E. 不需要探針與外源基因有同源性45、 核酸分子雜交時(shí)，用于標(biāo)記的探針可以是：（A B）A.DNAB. RNAC.抗原D. 抗體E.DNA 連接酶46、限制性內(nèi)切酶可特異性識(shí)別(

27、B )A. 雙鏈DNA的特定堿基對(duì)B.雙鏈DNA的特定堿基序列C.單鏈RNA的特定堿基序列D.單鏈DNA的特定堿基序列E雙鏈RNA的特定堿基對(duì)47、下列因素中影響限制酶切割的有（A,B,C,D,E）鹽濃度A. EDTA濃度 B.甘油濃度C. DNA純度D.酶的自身活性 E.48、重組連接時(shí)，反應(yīng)體系必須的組分有（A、C）A . Mg2+B. BSA C. ATPD. PO43- E . EDTA49、PCR產(chǎn)物具有特異性是因?yàn)椋ǎ〤A. Taq DNA酶保證了產(chǎn)物的特異性B. 合適的變性，退火，延伸溫度C. 選擇特異性的引物D. 引物的Tm值不同.50、要使目的基因與對(duì)應(yīng)的載體重組，所需的兩種

28、酶是（）A 限制酶連接酶解旋酶還原酶A . B . C. D .51、 用堿法分離質(zhì)粒 DNA時(shí)，染色體DNA之所以可以被除去，是因?yàn)椋篊A. 染色體DNA斷成了碎片B. 染色體DNA分子量大，而不能釋放C. 染色體變性后來(lái)不及復(fù)性D. 染色體未同蛋白質(zhì)分開(kāi)而沉淀52、 同一種質(zhì)粒 DNA，以三種不同的形式存在，電泳時(shí)，它們的遷移速率是：BA. OC DNASC DNAL DNAB. SC DNAL DNAOC DNAC. L DNAOC DNA.SC DNAD. SC DNAOC DNAL DNA53、 在基因操作中所用的限制性核酸內(nèi)切酶是指（B ）A . I類限制酶 B. II類限制酶 C

29、. III類限制酶D.核酸內(nèi)切酶E. RNAase54、 下列關(guān)于同裂酶的敘述錯(cuò)誤的是（B ）A. 是從不同菌種分離到的不同的酶，也稱異源同工酶。B. 它們的識(shí)別序列完全相同。C. 它們的切割方式可以相同，也可以不同。D. 有些同裂酶識(shí)別的完整序列不完全一樣，但切割位點(diǎn)間的序列一樣。E. 兩種同裂酶的切割產(chǎn)物連接后，可能會(huì)丟失這兩個(gè)同裂酶的識(shí)別位點(diǎn)。55、需進(jìn)行DNA部分酶切時(shí)，控制下列哪種條件最合適（D ）A.反應(yīng)時(shí)間B.反應(yīng)體積 C. PH D.限制酶量E.反應(yīng)溫度56、 在回收DNA片段時(shí)，觀察電泳結(jié)果為盡量減少對(duì)DNA的照射損傷應(yīng)使用（A ）A .長(zhǎng)波長(zhǎng)紫外B.短波長(zhǎng)紫外C .長(zhǎng)波長(zhǎng)紅

30、外D.短波長(zhǎng)紅外E. ABCD都不可57、 DNA回收時(shí)，如要除去 EB （漠化乙錠）可用下列那種試劑（ A ）A .正丁醇B.苯酚 C.氯仿 D.異戊醇 E.乙醇58、 大腸桿菌出現(xiàn)感受態(tài)的生理期是（B ）A .潛伏期B.對(duì)數(shù)期 C.對(duì)數(shù)后期D.平衡期 E.衰亡期59、PCR實(shí)驗(yàn)的特異性主要取決于（C）10A.DNA聚合酶的種類B.反應(yīng)體系中模板DNA的量C.引物序列的結(jié)構(gòu)和長(zhǎng)度E.循環(huán)周期的次數(shù)D.四種dNTP的濃度60、在加熱或紫外線照射下，鍵則不受影響的稱為（可導(dǎo)致兩條DNA鏈中間的氫鏈斷裂， 而核酸分子中所有的共價(jià)）。 AA. DNA 變性 B. DNA復(fù)性 C. DNA 重組 D.

31、 DNA 雜交61、將RNA或 DNA變性后直接點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上，用于基因組中特定基因及其表達(dá)的定性及定量研究，稱為（）。CA.原位雜交B.核酸酶保護(hù)實(shí)驗(yàn)C.斑點(diǎn)印跡D.狹縫印跡62、在Southern印跡雜交中用來(lái)標(biāo)記核酸探針最常用的核素是（）。AA. 32 l335125.A P B. H C. S D. I四、簡(jiǎn)答題（30%）1、簡(jiǎn)述用雜交法從文庫(kù)中篩選重組DNA的基本過(guò)程。答：一般要先得到文庫(kù)的轉(zhuǎn)化菌或噬菌體，涂板培養(yǎng)，形成單菌落或噬菌斑，將其影印到硝酸纖維素膜上，細(xì)菌影印物需在膜上重新形成菌落，而噬菌斑影印無(wú)須進(jìn)一步培養(yǎng)。經(jīng)過(guò)裂解一DNA變性一固定一制備探針一雜交一放射自顯影等過(guò)

32、程，最后從原始平板上挑取陽(yáng)性 克隆。2、如果用EcoR I酶切DNA時(shí)出現(xiàn)星活性，試分析原因？答：主要原因有：酶濃度太高；高 PH；低鹽；含 Mn2+、Cu2+等非Mg2+金屬離子；甘油 濃度高于5% ;存在某些有機(jī)溶劑。3、 某一質(zhì)粒載體有 Tetr和Ampr的表型，在Amp抗性基因中有一 EcoR I的酶切位點(diǎn)，現(xiàn) 用EcoRI切割載體進(jìn)行基因重組，問(wèn)如何用抗性變化篩選含有插入片段的重組體？先將重組體的轉(zhuǎn)化菌落涂布含有Tet抗性的平板，再?gòu)闹刑羧】筎et的菌落接種于含有Amp抗性的平板，選取不在 Amp抗性的平板上生長(zhǎng)而僅在Tet抗性的平板上生長(zhǎng)的菌落即可得到轉(zhuǎn)化有重組體的菌落。4、當(dāng)兩種

33、限制酶反應(yīng)條件不同時(shí)，若要用雙酶切，應(yīng)采取什么措施？為什么？答：要避免星活性及部分酶切。（1 ）先用低鹽緩沖液中活性最高的酶切，再補(bǔ)鹽和第二種酶；（2 ）用一種酶消化后，以酚：氯仿：異戊醇抽提，再經(jīng)乙醇沉淀，將DNA重新溶解與適合第二種酶的緩沖液，加第二種酶消化；（3）先低溫酶，后高溫酶；（4）使用通用緩沖液。115、如何將一平末端的 DNA片段與BamH I形成的粘末端連接？答：使用加接頭連接法。人工合成一段含BamH I酶切位點(diǎn)的DNA短片段，然后與該平末端片段兩端連起來(lái)，用 BamH I切割連接片段，即可形成 BamH I的粘末端。6、什么是同聚尾連接法？具有哪些優(yōu)缺點(diǎn)？答：同聚尾連接法

34、是利用末端轉(zhuǎn)移酶在載體和外源DNA的3 端各加上一段互補(bǔ)的寡聚核苷酸，形成人工粘性末端，然后在DNA連接酶的作用下，連接成重組DNA。其優(yōu)點(diǎn)在于（1 ）由于同一 DNA兩端粘尾相同，不會(huì)自身環(huán)化；（2）連接效率高；（3）用任何一種方法制備的 DNA都可用這種方法連接。其缺點(diǎn)在于（1）方法復(fù)雜；（2）外源片段較難回收；（3）由于添加了同聚尾，可能會(huì) 影響外源基因表達(dá)。10、什么叫穿梭載體？答：含有細(xì)菌質(zhì)粒和克隆的真核生物DNA片段的雜種質(zhì)粒，有兩個(gè)復(fù)制起點(diǎn)和既能在細(xì)菌又能在真核細(xì)胞中進(jìn)行選擇的選擇標(biāo)記，所以，很容易從一宿主轉(zhuǎn)到另一個(gè)宿主（來(lái)回穿梭）。12、 簡(jiǎn)述限制性內(nèi)切核酸酶（Restrict

35、ion en do nuclease）的概念及其生物學(xué)功能？限制性內(nèi)切核酸酶：是一類能夠識(shí)別雙鏈 DNA分子中的某種特定核苷酸序列，并由此切割DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的核酸內(nèi)切酶。生物學(xué)功能： 酶的切割位點(diǎn)可為獲得 DNA物理圖譜的特殊標(biāo)記 禾U用限制性內(nèi)切酶可切割產(chǎn)生特殊DNA片段的能力，使得純化這些 DNA片段成為可能 獲得的限制性DNA片段可作為DNA操作中的基本介質(zhì)13、 試回答影響限制性內(nèi)切核酸酶（Restriction endonuclease）切割效率的因素？外因：是可以預(yù)見(jiàn)的，如反應(yīng)條件（緩沖液、反應(yīng)溫度、反應(yīng)時(shí)間、終止酶切的 方法）、底物的純度（是否有雜質(zhì)、是否有鹽酚的污染）、何時(shí)加酶

36、、操作是否恰當(dāng)、 反應(yīng)體積等等內(nèi)因：星星活性、末端長(zhǎng)度、位點(diǎn)偏愛(ài)、甲基化底物、底物的構(gòu)象14、 .何謂Star activity ?簡(jiǎn)述Star activity的影響因素及克服方法？在極端非標(biāo)準(zhǔn)條件下，限制酶能切割與識(shí)別序列相似的序列，這個(gè)改變的特殊性稱 為星星活性。影響因素：甘油濃度高（5%、酶過(guò)量（ 100U/微升）、離子強(qiáng)度低（v 25mM、PH值過(guò)高（ 8.0 ）、加了有機(jī)溶劑、用其它二價(jià)陽(yáng)離子如 Mn+ Cu+、Co+、Zn+弋替了 Mg+克服方法：減少酶的用量可避免過(guò)份地酶切，減少甘油濃度，保證反應(yīng)體系中無(wú)有12機(jī)溶劑或乙醇，提高離子強(qiáng)度到100-150 mM（如果不會(huì)抑制酶活性

37、的話），降低反應(yīng)PH值到PH7.0，使用Mg+乍二價(jià)陽(yáng)離子18、說(shuō)明San ger DNA測(cè)序法的原理。答：San ger DNA測(cè)序法是建立在兩個(gè)基本原理之上：（1）核酸是依賴于模板在聚合酶的作用下由5端向3端聚合（DNA聚合酶參與了細(xì)菌修復(fù) DNA合成過(guò)程）；（2）可延 伸的引物必須能提供游離的3羥基末端，雙脫氧核苷酸由于缺少游離的3羥基末端，因此會(huì)終止聚合反應(yīng)的進(jìn)行。如果分別用4種雙脫氧核苷酸終止反應(yīng)，則會(huì)獲得4組長(zhǎng)度不同的DNA片段。通過(guò)比較所有 DNA片段的長(zhǎng)度可以得知核苷酸的 序列。19、影響DNA遷移率的因素有哪些？影響DNA遷移率的因素有：DNA分子的大小，瓊脂糖濃度，DNA的

38、構(gòu)象，所加電壓，溫度，嵌入染料的存在和電泳緩沖液的組成。四、問(wèn)答題：1、什么是藍(lán)白斑篩選法 ？答：這種方法是根據(jù)組織化學(xué)的原理來(lái)篩選重組體。主要是在載體的非必要區(qū)插入一個(gè)帶有大腸桿菌一半乳糖苷酶的基因片段，攜帶有 lac基因片段的載體轉(zhuǎn)入lac的宿主菌后，在含有 5漠一4氯一3引哚一 一D 半乳糖苷（X-gal）平板上形成淺藍(lán)色的噬菌 斑。外源基因插人lac（或lac基因部分被取代）后，重組的噬菌體將喪失分解X-gal的能力，轉(zhuǎn)入lac-宿主菌后，在含有 5漠一4 氯一3引哚一 一D 半乳糖苷（X-gal）平板上形成 白色的噬菌斑，非重組的噬菌體則為藍(lán)色噬菌斑。3、 試述切口平移法標(biāo)記DNA探

39、針的原理。答：切口平移法是目前實(shí)驗(yàn)室中最常用的一種DNA探針標(biāo)記方法。其原理是利用DNase I在DNA雙鏈上隨機(jī)切割單鏈，造成單鏈切口，切口處產(chǎn)生一個(gè)5末端和一個(gè)3末端，3末端即可作為引物。 利用大腸擴(kuò)菌 DNA聚合酶I的5t3核酸外切酶活性在切口處將舊鏈 從5末端逐步切除。同時(shí)，在DNA聚合酶I的5t3聚合酶活性的催化下 依次將dNTP連接到切口的3末端-OH上，以互補(bǔ)的DNA單鏈為模板合成新的DNA鏈。如果在反應(yīng)液中含有一種或多種標(biāo)記的核苷酸（如32P-dCTP），則這些標(biāo)記的核苷酸將替代原來(lái)的核苷酸殘基，從而形成高放射性活性的DNA探針。用此法標(biāo)記的核苷酸的摻入率可達(dá)2030%。4、將

40、外源性 DNA克隆到b-LacZ區(qū)段的插入型噬菌體上后，如何篩選重組噬菌體？答：3半乳糖苷酶失活的插入型載體，在其基因組中含有一個(gè)大腸桿菌的lacZ區(qū)段，此區(qū)段編碼有3半乳糖苷酶基因lacZ，在誘導(dǎo)物IPTG （異丙基硫代半乳糖苷）存在下，3半乳糖苷酶能作用X-gal（5-漠-4-氯3-吲哚-3D-半乳糖苷）形成藍(lán)色化合物（5-漠-4-氯靛藍(lán)）。這 樣由這種載體感染的大腸桿菌lac-指示菌（lac基因缺陷菌），涂布在補(bǔ)加有IPTG和X-gal的培養(yǎng)基平板上，會(huì)形成藍(lán)色的噬斑，但若在lacZ區(qū)段上插入外源 DNA片段，就會(huì)阻斷313半乳糖苷酶基因lacZ的編碼序列，這種入重組體感染的lac-指示

41、菌由于不能合成3半乳糖苷酶，只能形成無(wú)色的噬菌斑，相反未發(fā)生外源基因插入則出現(xiàn)藍(lán)色噬菌斑，以利篩選。6、整個(gè)基因克隆的過(guò)程則包括哪些步驟？答：i)用于基因克隆的 DNA材料的選擇，及 DNA分子的片段化；ii)外源DNA片段與載 體分子的體外連接反應(yīng)；iii)將人工重組的 DNA分子導(dǎo)入它們能夠進(jìn)行正常復(fù)制的寄主細(xì) 胞的程序；iv)獲得了重組體分子的轉(zhuǎn)化子克隆的選擇或篩選。7、 YAC載體具有什么樣的功能性DNA序列？為什么在克隆大片段時(shí)，YAC具有優(yōu)越性？答： YAC帶有天然染色體所有的功能元件，包括一個(gè)著絲粒，一個(gè)DNA復(fù)制起點(diǎn)，兩個(gè)端粒。YAC能夠容納長(zhǎng)達(dá)幾百 kb的外源DNA，這是質(zhì)粒和黏粒辦不到的。大片段的插 入更有可能包含完整的基因，在染色體步移中每次允許更大的步移距離，同時(shí)能夠減少完整基因