腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)課件

1、腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)1腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)20152015年年7 7月月1313日日腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)2一、常用實驗動物及選擇一、常用實驗動物及選擇品系選擇品系選擇 名稱名稱毛色毛色免疫特性免疫特性適合實驗適合實驗BALB/cBALB/c白色野生型同基因型腫瘤實驗C57BLC57BL黑色野生型同基因型腫瘤實驗Nude BALB/c,Nude BALB/c,裸鼠裸鼠無毛胸腺缺陷，T細胞缺陷人移植瘤實驗SCIDSCID白色T、B細胞減少，細胞免疫和體液免疫缺陷，巨噬細胞和NK細胞正常免疫功能重建，腫瘤學(xué)NOD/SCIDNOD/SCID白色與SCID相比，NK細胞減少免

2、疫功能重建，腫瘤學(xué)NOG/NSGNOG/NSG白色IL-2受體缺陷，與NOD/SCID相比，天然和獲得性免疫缺陷更高免疫功能重建，腫瘤細胞治療BALB/cC57BL裸鼠裸鼠SCIDNOD/SCIDNOG/NSG腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)3 成年動物的年齡、體重和壽命比較成年動物的年齡、體重和壽命比較 小鼠小鼠 大鼠大鼠 豚鼠豚鼠 兔兔 狗狗 成年日齡（天）成年日齡（天） 6590 85110 90120 120180 250360 成年體重（成年體重（g） 2028 200280 350600 20003500 800015000 平均壽命（年）平均壽命（年） 12 23 2 56 1317 最高

3、壽命（年）最高壽命（年） 3 4 6 13 34 一、常用實驗動物及選擇一、常用實驗動物及選擇年齡選擇年齡選擇 一般購買一般購買6-8周小鼠，用于實驗周小鼠，用于實驗 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)4二、小鼠的飼養(yǎng)二、小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境環(huán)境 n 微生物控制等級選擇微生物控制等級選擇 v 普通級動物：示教、預(yù)實驗普通級動物：示教、預(yù)實驗v 清潔級動物：適用大多數(shù)科研。清潔級動物：適用大多數(shù)科研。v 無特定病原體動物（無特定病原體動物（SPFSPF）：為理想的健康）：為理想的健康動物，適用于所有科研、檢定。動物，適用于所有科研、檢定。v 無菌動物（無菌動物（GFGF）：適用于特殊研究。）：適用于特殊研究。 腫

4、瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)5n 動物室環(huán)境控制要求值動物室環(huán)境控制要求值項目項目控制要求值控制要求值備注備注溫度溫度2127按動物品種而有若干差別按動物品種而有若干差別濕度濕度4555%氣流速度氣流速度1025cm/秒秒避免直吹風(fēng)避免直吹風(fēng)換氣次數(shù)換氣次數(shù)815次次/小時小時100%新鮮空氣（如使用循環(huán)空氣，不新鮮空氣（如使用循環(huán)空氣，不應(yīng)超過總空氣量的應(yīng)超過總空氣量的1/3）照明照明75300lux定時人工照明（分置小瓦數(shù)日光燈）定時人工照明（分置小瓦數(shù)日光燈）氨濃度氨濃度20ppm以下以下噪音噪音50分貝以下分貝以下無動物時（有動物時，除狗居外，不高無動物時（有動物時，除狗居外，不高于于65分貝

5、）分貝）二、小鼠的飼養(yǎng)二、小鼠的飼養(yǎng)環(huán)境環(huán)境 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)6n 動物飼養(yǎng)密度動物飼養(yǎng)密度 動物飼養(yǎng)密度應(yīng)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，有一定的活動面積，不動物飼養(yǎng)密度應(yīng)符合衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)，有一定的活動面積，不能過分擁擠。能過分擁擠。 各種動物所需籠具的面積和體積因飼養(yǎng)目的而異，哺乳各種動物所需籠具的面積和體積因飼養(yǎng)目的而異，哺乳期所需面積較大，期所需面積較大，一般小鼠一般小鼠4-6只只/籠籠。 二、小鼠的飼養(yǎng)二、小鼠的飼養(yǎng)密度密度 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)7二、小鼠的飼養(yǎng)二、小鼠的飼養(yǎng)墊料、飼料、水墊料、飼料、水 n 墊料、飼料均需經(jīng)過輻照并密封包裝。墊料、飼料均需經(jīng)過輻照并密封包裝。n 水，自來水水，自來

6、水121度高壓滅菌度高壓滅菌20min。n 飼料選擇營養(yǎng)均衡的配方飼料即可，特殊情況才選飼料選擇營養(yǎng)均衡的配方飼料即可，特殊情況才選 擇高蛋白，高脂肪飼料。擇高蛋白，高脂肪飼料。腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)8三、腫瘤建模三、腫瘤建模 n 腫瘤模型類型：腫瘤模型類型：皮下移植瘤、肺轉(zhuǎn)移模型、原位移植瘤；皮下移植瘤、肺轉(zhuǎn)移模型、原位移植瘤；n 查閱文獻確定細胞接種濃度：查閱文獻確定細胞接種濃度：一般一般1 1* *10106 6 個細胞左右；個細胞左右；n 預(yù)實驗：預(yù)實驗：以以2 2倍比例選擇三個細胞濃度開展預(yù)實驗；倍比例選擇三個細胞濃度開展預(yù)實驗；n 準(zhǔn)備細胞：準(zhǔn)備細胞：細胞重懸于細胞重懸于PBSPB

7、S、生理鹽水或基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，定量；、生理鹽水或基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，定量； n 接種：接種：皮下接種可選擇乙醚麻醉，皮下接種可選擇乙醚麻醉，100 ul/100 ul/位點；肺轉(zhuǎn)移位點；肺轉(zhuǎn)移 尾靜脈注射，用小鼠固定器，尾靜脈注射，用小鼠固定器，200ul/200ul/只；只；n 對于皮下移植瘤，如需細胞數(shù)量較大，可以接種組織塊兒；對于皮下移植瘤，如需細胞數(shù)量較大，可以接種組織塊兒；n 皮下接種部位：皮下接種部位：FlankFlank，背頸部，腋窩。，背頸部，腋窩。腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)9四、標(biāo)記與分組四、標(biāo)記與分組 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)10四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組單色染色法單色染色法腫瘤學(xué)動物

8、實驗技能培訓(xùn)11四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組單色染色法單色染色法腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)12四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組雙色染色法雙色染色法腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)13四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組雙色染色法雙色染色法腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)14腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)15四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組其他方法其他方法 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)16四、標(biāo)記及分組四、標(biāo)記及分組分組分組 n 一致性原則一致性原則 n 差異是絕對的，一致是相對的差異是絕對的，一致是相對的 n 利用隨機數(shù)字表進行隨機分組，最大限度避免人為因素利用隨機數(shù)字表進行隨機分組，最大限度避免人為因素 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)17五、治療、給藥

9、五、治療、給藥 n 治療起點和途經(jīng)根據(jù)不同的腫瘤和治療藥物不同而定；治療起點和途經(jīng)根據(jù)不同的腫瘤和治療藥物不同而定；n 皮下移植瘤，尾靜脈給藥：皮下移植瘤，尾靜脈給藥：50 mm3,100 mm3；n 皮下移植瘤，瘤內(nèi)給藥：皮下移植瘤，瘤內(nèi)給藥：200-300 mm3；n 腹腔給藥。腹腔給藥。 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)18六、腫瘤的測量六、腫瘤的測量 n 皮下移植瘤：皮下移植瘤：游標(biāo)卡尺測量，稱重，小動物活體成像；游標(biāo)卡尺測量，稱重，小動物活體成像； n 肺轉(zhuǎn)移瘤：肺轉(zhuǎn)移瘤：肺表面結(jié)節(jié)數(shù)，小動物活體成像；肺表面結(jié)節(jié)數(shù)，小動物活體成像；腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)19n皮下移植瘤實驗：皮下移植瘤實驗：生

10、存期較長，有如下情況者處死小鼠，生存期較長，有如下情況者處死小鼠， 記為死亡：記為死亡：l 腫瘤長徑達到腫瘤長徑達到2cm，或體積大于，或體積大于1cm3；l 蜷縮不動；蜷縮不動；l 毛發(fā)蓬松臟亂無光；毛發(fā)蓬松臟亂無光；l 對外界刺激無反應(yīng)；對外界刺激無反應(yīng)；l 體重明顯下降的（體重明顯下降的（24h內(nèi)下降內(nèi)下降2-3g）。）。 七、小鼠生存期統(tǒng)計七、小鼠生存期統(tǒng)計治療終點治療終點 n 轉(zhuǎn)移瘤實驗：轉(zhuǎn)移瘤實驗：一般生存期較短；一般生存期較短； 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)20八、動物組織標(biāo)本采集八、動物組織標(biāo)本采集 l 收集心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，福爾馬林固定，收集心、肝、脾、肺、腎等主要臟器，福爾馬林固定， HE染色觀察治療毒性；染色觀察治療毒性；n 治療實驗：治療實驗：l 收集腫瘤組織，福爾馬林固定，觀察腫瘤指標(biāo)；收集腫瘤組織，福爾馬林固定，觀察腫瘤指標(biāo)；n 免疫熒光實驗：免疫熒光實驗：收集新鮮組織，做冰凍切片；收集新鮮組織，做冰凍切片； 腫瘤學(xué)動物實驗技能培訓(xùn)21九、動物實驗倫理九、動物實驗倫理 n 悉心照料動物，保證正常生存條件；悉心照料動物，保證正常生存條件；n 皮下移植瘤體積最大長至長徑皮下移植瘤體積最大長至長徑2cm或體積或體積1cm3；n 實驗結(jié)束對小