ABO血型鑒定的方法步驟與注意事項

1、一一. .原理原理根據(jù)紅細胞上有或無 A抗原或 B 抗原，將血型分為 A型、B型、AB型及()型 4 種?？衫眉t細胞凝集試驗，通過正、反定型準確鑒 定 ABO血型。所謂正定型，是用已知抗一 A和抗一 B 分型血清來測定 紅細胞上有無相應的 A抗原或 B 抗原；所謂反定型，是用已知 A細胞 和 B 細胞來測定血清中有無相應的抗一 A或抗一 B。二. 試劑和材料試劑和材料1. 抗一 A(B 型血)、抗一 B(A型血)及抗一 A十 B(0型血)分型血清(制備方法見本節(jié)附注)2. 5%A、B 及()型試劑紅細胞鹽水懸液，制備方法見本節(jié)附注；3. 受檢者血清；4. 受檢者 5%紅細胞鹽水懸液，制備方法

2、見本節(jié)附注。三. 方法方法1.試管法(1) 取潔凈小試管 3 支，分別標明抗一 A、抗一 B和抗一 A十 B,用 滴管分別加抗一 A、抗一 B 和抗一 A十 Bo分型血清各 1 滴于試管底部, 再以滴管分別加入受檢者 5%紅細胞鹽水懸液 1 滴，混和。(2) 另取潔凈小試管 3支，分別標明 A、B 和 0 細胞。用滴管分別加 入受檢者血清 1滴于試管底部，再分別以滴管加入 A、B和 0型 5%試劑紅細胞懸液 1滴，混和。(3) 立即以 lOOOr / min 離心 lmino(4) 將試管輕輕搖動，使沉于管底的紅細胞浮起，先以內(nèi)眼觀察有無凝集(或溶血)現(xiàn)象。如內(nèi)眼不見凝集，應將反應物倒于玻片上

3、，再 以低倍鏡檢查。(5)觀察結果時既要看有無凝集，更要注意凝集強度，此有助于 A、B亞型、類 B或 cisAB的發(fā)現(xiàn)。(6)凝集強度判斷標準凝集強度判斷標準4+紅細胞凝集成一大塊，血清清晰透明。3+紅細胞凝集成數(shù)小塊，血清尚清晰。2+紅細胞凝塊分散成許多小塊，見到游離紅細胞。1+肉眼可見大顆粒，周圍有較多游離紅細胞+-鏡下可見數(shù)個紅細胞凝集在一起，周圍有很多游離紅細胞MF混合凝集外觀(mixedfield)是指鏡下可見少數(shù)紅細胞凝 集，而極大多數(shù)紅細胞仍呈分散分布。表示陰性，鏡下未見凝集，紅細胞均勻分布。2.玻片法(1) 取清潔玻片 1 張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標明抗 -A、

4、抗-B和抗-A 十 B,分別用滴管滴加抗-A、抗-B 和抗-A十 B 分型 血清 1 滴于標明的方格內(nèi)，再各加受檢者 2%紅細胞懸液 1 滴，混和。(2)另取潔凈玻片一張(或白瓷板 1 塊)，用蠟筆劃成方格，標明 A 細胞、B細胞和()細胞，用滴管各加受檢者血清 1 滴，再分別用滴管 滴加 A、B和0 型試劑紅細胞懸液 1 滴。(3)將玻片(或白瓷板)不斷輕輕轉(zhuǎn)動，使血清與細胞充分混勻，連 續(xù)約15min,以肉眼觀察有無凝集(或溶血)反應。如以玻片作試驗時, 也可用低倍鏡觀察結果。四四. .結果判定結果判定ABO血型正反定型結果分型血清+受檢者紅細胞受檢者血清+試劑紅細胞受檢者血型抗-A抗-B

5、抗-ABA細胞B 細胞()細胞+A+B+0+AB注；“十”為凝集；“-為不凝集。五五附注及注意事項附注及注意事項1.分型血清質(zhì)量性能符合要求，用畢后應放置冰箱保存，以免細 菌污染。2試劑紅細胞以 3 個健康者同型新鮮紅細胞混和，用生理鹽水洗滌 1 次，以除卻存在于血清中的抗體及可溶性抗原。3試管、滴管和玻片必須清潔干燥，防止溶血。4. 操作方法應按規(guī)定，一般應先加血清，然后再加紅細胞懸液， 以便容易核實是否漏加血清。5.按理 IgM抗-A和抗-B與相應紅細胞的反應溫度以 4C 為最強，但為了防止冷凝集現(xiàn)象的干擾， 一般仍在室溫 （20-24C） 內(nèi)進行試 驗， 37可使反應減弱。6. 離心時間

6、不宜過長或過短，速度不宜過快或過慢，以防假陽性 或假陰性結果。7. 觀察時應注意紅細胞呈特異性凝集、繼發(fā)性凝固以及緡錢狀排 列的區(qū)別。8. 判斷結果后應仔細核對、記錄，避免筆誤。正反定型結果不一 致的原因六六. .常見有技術性問題或紅細胞和血清本身的問題常見有技術性問題或紅細胞和血清本身的問題1. 分型血清效價太低、親和力不強。如抗一 A血清效價不髙,可 將 A亞型誤定為 0型，AB 型誤定為 B型。2. 紅細胞懸液過濃或過淡，抗原抗體比例不適當，使反應不明顯, 誤判為陰性反應。3. 受檢者紅細胞上抗原位點過少（如亞型）或抗原性減弱（見于白血 病或惡性腫瘤：以及類 B或 cisAB 等。4.

7、受檢者血清中蛋白紊亂（髙球蛋白血癥），或?qū)嶒灂r溫度過高， 常引起紅細胞呈緡錢狀排列。5. 受檢者血清中缺乏應有的抗-A及或抗一 B 抗體， 如丙種球蛋白 缺乏癥。6. 各種原因引起的紅細胞溶解，誤判為不凝集。部分溶血時，可 溶性血型物質(zhì)中和了相應的抗體.7.由細菌污染或遺傳因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不 符的原因。8. 血清中有意外抗體，如自身抗-1,常引起干擾。9. 老年人血清中抗體水平大幅度下降正反定型結果不一致的解決 辦法如發(fā)現(xiàn) ABO正反定型結果不一致，先要重復作試驗 1 次。嚴格執(zhí) 行操作規(guī)程，使用質(zhì)量合格的試劑以及細心觀察和解釋試驗結果，就 可解決明顯的問題，對一些疑難問題

8、月必須進一步研究。檢查步驟1.另從受檢者采取 1份新鮮血液標本這樣可以糾正因污染或搞錯 樣本造成的不符合。2將紅細胞洗滌數(shù)次，配成 5%鹽水細胞懸液，用抗一 A、抗一 B、抗一A1,抗一 A十 B 及抗 H做試驗可以得到其它有用的信息。3. 對受檢紅細胞作直接抗球蛋白試驗，如結果呈陽性，表示紅細 胞已被抗體致敏。4. 用 A1、Az、B、0紅細胞及自身紅細胞檢查受檢血清。如果懷疑 是抗一 I,用 0 型（或 ABO相合的）臍血紅細胞檢查。5. 如果試驗結果未見凝集，應將細胞及血清試驗至少在室溫和 4 工 放置30n）in,用顯微鏡檢查核實。6. 如疑為 A抗原或 B 抗原減弱， 則可將受檢紅細

9、胞與抗一 A或抗 -B血清作吸收及放散試驗以及受檢者唾液作 A、B、H血型物質(zhì)測定。 后者只對80%HAB分泌型的人有用。7. 如試驗結果紅細胞呈絹錢狀排列，加等滲鹽水 1 滴，混和，往 往可使絹錢現(xiàn)象消失。應注意不應先加鹽水 1滴于受檢者血清中而后 和紅細胞作試驗，以免使血清中抗體被稀釋。8. 如受檢者為 A型血而疑為有類 B 抗原時，可用下列方法進行鑒 別：(1) 觀察細胞與抗一 A及抗一 B 的凝集強度，與抗一 A的反應要比與 抗一 B的反應強。這種區(qū)別用玻片法作試驗更為明顯。(2) 用受檢者紅細胞與自身血清作試驗，血清中的抗一 B 不凝集自 身紅細胞上的類 B抗原。(3) 檢查唾液中是否有 A、B物質(zhì)，如果是分泌型，可檢出 A物質(zhì)而 無 B物質(zhì)。(4) 核對患者的診斷，類 B抗原的形成與結腸癌、直腸癌、革蘭陰 性桿菌感染有關。9. 如發(fā)現(xiàn)多凝集現(xiàn)象，