杜仲葉 質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn) 劉電航

1、杜仲葉的質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)杜仲葉的質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn) 劉電航劉電航 研五班研五班內(nèi)容簡介內(nèi)容簡介一、杜仲葉性狀鑒定一、杜仲葉性狀鑒定二、杜仲葉顯微鑒定二、杜仲葉顯微鑒定三、光譜鑒定三、光譜鑒定四、色譜鑒定四、色譜鑒定五、理化鑒定五、理化鑒定一、杜仲葉性狀鑒定一、杜仲葉性狀鑒定1 1、【名稱名稱】杜仲科植物杜仲的干燥葉。夏、秋二季枝葉茂盛時采收，曬干或低溫烘干。2 2、【性狀性狀】 本品多破碎，完整葉片展平后呈橢形或卵形，長715cm，寬3.57cm。表面黃綠色或黃褐色，微有光澤，先端漸尖，基部圓形或廣楔形，邊緣有鋸齒，具短葉柄。質(zhì)脆，搓之易碎，折斷面有少量銀白色橡膠絲相連。氣微，味微苦。3 3、主要分布在

2、貴州、四川、廣西、廣東、湖南、河南、甘肅、陜西、江西等省區(qū)普遍種植。杜仲葉的干燥葉二、杜仲葉顯微鑒定二、杜仲葉顯微鑒定p組織構(gòu)造橫切面 1、上表皮細(xì)胞一列，下表皮細(xì)胞一列，外披單細(xì)胞非腺毛，較少易碎。2、柵欄組織一列，內(nèi)含黃棕色物質(zhì)占整個葉肉組織的三分之一左右，海綿組織細(xì)胞內(nèi)含膠絲。3、導(dǎo)管徑向排列成行，形成層明顯，韌皮部細(xì)胞內(nèi)含棕色物質(zhì)。p粉末顯微特征 膠絲較多，散在或貫穿于葉肉組織及葉脈組織碎片中，成團(tuán)。非腺毛單細(xì)胞多破碎，常彎曲。導(dǎo)管為螺紋、網(wǎng)紋導(dǎo)管。含量測定含量測定杜仲葉中分離得到的化學(xué)成分包括：木脂素類、環(huán)烯醚萜類、苯丙素類、黃酮類（槲皮素、蘆?。⒍胖倌z、維生素、苯丙酸類物質(zhì)（綠原

3、酸）2010年版藥典中對杜仲葉含量的測定方法，以綠原酸為對照品，用HPLC法進(jìn)行測定。杜仲葉中主要有效成分綠原酸具有抗菌、抗病毒、利膽、保肝、降壓、興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等作用，黃酮類化合物具有良好的抗氧化作用，可作為抗衰老、抗癌等功能保健食品的有效成分之一。半仿生法（SBE）模擬口服給藥及藥物經(jīng)胃腸道轉(zhuǎn)運(yùn)的原理，為經(jīng)消化道給藥的中藥試劑設(shè)計的一種提取工藝。半仿生法的工藝條件為：杜仲葉為原料，以磷酸氫二鈉- 檸檬酸的緩沖溶液作為提取液，m（杜仲葉）1m（提取液）= l120，提取液pH 分別為2. 0，7. 5，8. 3，在70 ，每次提取l h，提取3 次。缺點：調(diào)PH值很繁瑣，每一個中藥成分的P

4、H值都有一個固定范圍，很不好把握。三、光譜三、光譜鑒定鑒定UVUV鑒定鑒定 UV鑒定 甲醇、乙醇或其他溶劑的浸出物的UV光譜有相對的穩(wěn)定性與特征性，其光譜特征可作為特種或品種的鑒定依據(jù)。鑒定時應(yīng)與標(biāo)準(zhǔn)藥材或標(biāo)準(zhǔn)圖譜對照。稱取分離純化后的杜仲葉精提物粉末組分0.0027 g、用無水甲醇溶解、定容至10 mL，搖勻。 以無水甲醇為參比， 進(jìn)行紫外掃描。四四、色譜鑒定、色譜鑒定色譜法反映的是中藥材提取物的化學(xué)成分及含量情況，能定性定量地反映中藥材的鑒定特征，具有分離能力強(qiáng)、分析速度快、定量準(zhǔn)確的特點。三、色譜鑒定三、色譜鑒定HPLCHPLC法法【含量測定含量測定】 照高效液相色譜法測定。 色譜條件與

5、系統(tǒng)適用性試驗色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.4%磷酸溶液(13：87)為流動相；檢測波長為327nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計算應(yīng)不低于2000。 對照品溶液的制備對照品溶液的制備 取綠原酸對照品適量，精密稱定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含50mg的溶液，即得。 供試品溶液的制備供試品溶液的制備 取本品粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇25ml，稱定重量，加熱回流30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。 測定法測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10l，注入液相

6、色譜儀，測定綠原酸的峰面積，即得。 本品按干燥品計算，含綠原酸(C16H1809)不得少于0.080%。四四、色、色譜譜鑒定鑒定薄層色譜法薄層色譜法TCLTCL法法供試品溶液:取含量測定項下的供試品溶液。對照藥材溶液：另取杜仲葉對照藥材lg，加甲醇25ml，加熱回流1小時，放冷，濾過，得濾液。對照品溶液：綠原酸對照品，加甲醇制成每1ml含1mg溶液。吸取上述三種溶液各510l，分別點于同一硅膠H薄層板上，以乙酸丁酯-甲酸-水(7：2.5：2.5)的上層溶液為展開劑， 展開，取出，晾干， 置紫外光燈 (365nm)下檢視。 五、理化鑒定紙紙層析層析- -硝酸硝酸鋁比色法鋁比色法紙層析-硝酸鋁比色

7、法（亞硝酸鈉-硝酸鋁-氫氧化鈉比色法）測定杜仲葉總黃酮含量為了消除綠原酸的干擾，本研究首先采用紙層析法將樣品中的黃酮與綠原酸分離，對分離出的黃酮用硝酸鋁比色法進(jìn)行測定。實驗過程步驟供試品溶液的配置用蘆丁選擇測定波長用蘆丁繪制吸收度的標(biāo)準(zhǔn)曲線紙層析-硝酸鋁比色法測總黃酮精密度、回收率實驗總黃酮含量的測定供試品溶液的配置1、 杜仲葉樣品液制備 精密稱取杜仲葉粉，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為70%的乙醇提取3次，每次1.5h，合并濾液，濃縮定容至50ml，吸取2ml.于50ml容量瓶中，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的乙醇定容，備用。2、杜仲純粉樣品液制備 精密稱取杜仲純粉（杜仲葉水提取液濃縮干燥所得） 0.1g，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為

8、60%的乙醇定容在100ml容量瓶中，然后吸取25ml,于50ml容量瓶中用水稀釋定容至刻度，備用。3、杜仲黃酮粗品供試液制備 精密稱取杜仲黃酮（杜仲葉乙醇提取液濃縮后經(jīng)大孔樹脂吸附，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為80%乙醇洗脫，收集洗脫液后，回收溶劑濃縮干燥所得）0.1g,用水溶解在100ml容量瓶中，備用。測定波長的選擇和工作曲線的繪制測定波長的選擇和工作曲線的繪制精密稱取蘆丁20mg（烘至恒重）置100ml容量瓶中，加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為60%的乙醇定容至刻度，搖勻，取25ml用蒸餾水稀釋至50ml，準(zhǔn)確吸取0、1.0、2.0、3.0、4、0、5.0ml別置于10ml具塞試管中，先加質(zhì)量分?jǐn)?shù)為5%的亞硝酸鈉溶液0.

9、3ml，搖勻，放置6min，再加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的硝酸鋁溶液0.3ml，搖勻，放置6min,再加入1mol/LNaOH溶液4.0ml, 分別用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%的乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15min，在480、540nm的波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，選擇最佳吸收峰波長，并在此波長下作工作曲線。標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取于120干燥至恒重的蘆丁20mg,用甲醇在10ml，容量瓶中定容，用10l 微量進(jìn)樣器點樣，點樣量分別為10、20、30、40、50l ，然后用溶劑系統(tǒng)用BAW溶劑（正丁醇:冰醋酸:水=4:1:2（體積比）分別在層析缸中展開，揮干溶劑后在365nm紫外分析儀下觀察，將褐色帶狀

10、部分剪成細(xì)條，分別裝在10ml 具塞試管中，各加入5ml甲醇，超聲波震蕩20min，取出加入硝酸鋁顯色劑，在510nm下測定吸光度，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為A=0.02+6.1cry=0.9992其中，A為吸光度；c為濃度(mg/g)；r為回歸系數(shù)。測定步驟 將杜仲葉的乙醇提取物（或各種杜仲制品的溶液）定量點樣于層析紙上，用BAW溶劑（正丁醇:冰醋酸:水=4:1:2（體積比）系統(tǒng)展開，在365nm紫外分析儀下，杜仲中所含的各種黃酮為棕褐色的譜帶（自然光下為淡黃色），綠原酸為強(qiáng)烈的藍(lán)色熒光帶。將代表黃酮的譜帶用鉛筆標(biāo)記后剪下，處理方法同上，測定吸光度并下測定吸光度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算總黃酮含量。若需要，可將發(fā)熒光的綠原酸譜帶剪下，并進(jìn)行含量測定。 精密度試驗 精密度試驗以杜仲粗黃酮為樣品，平行稱取5份，用上述方法進(jìn)行測定，結(jié)果如表所示。從下表可以看出，用紙層析-硝酸鋁比色法測定杜仲中的總黃酮，標(biāo)準(zhǔn)差為10.6，說明該法重現(xiàn)性好?；厥章试囼灮厥章试囼炓远胖冱S酮粗品為供試樣，加入蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，進(jìn)行回收率試驗，結(jié)果如表B所示。由表B可以看出，該方法測定的平均回收率為99.75%。杜仲葉總黃酮含量的測定杜仲葉總黃酮含量的測定 用紙層析-硝酸鋁比色法對杜仲葉中的總黃酮進(jìn)行了測定。由下表可見，總黃酮平均含量為13.6mg。這一結(jié)果，與實際