基因工程載體ppt課件

1、Made by lionchpMade by lionchp 依功能：克隆載體、表達(dá)載體、轉(zhuǎn)錄載體依功能：克隆載體、表達(dá)載體、轉(zhuǎn)錄載體 克隆、表達(dá)的根本流程：克隆、表達(dá)的根本流程： 克隆載體克隆載體 轉(zhuǎn)錄載體轉(zhuǎn)錄載體 DNA DNA RNA 蛋白質(zhì)蛋白質(zhì) 表達(dá)載體表達(dá)載體 依組成：質(zhì)粒、噬菌體、病毒、粘性載體、依組成：質(zhì)粒、噬菌體、病毒、粘性載體、 人工染色體人工染色體 可承載基因量：依次增大可承載基因量：依次增大 依類(lèi)型：依類(lèi)型： 原核載體：質(zhì)粒、噬菌體原核載體：質(zhì)粒、噬菌體 真核載體：酵母、病毒真核載體：酵母、病毒 兩類(lèi)載體兩類(lèi)載體 分泌型載體：傳導(dǎo)入受體細(xì)胞后，表達(dá)產(chǎn)分泌型載體：傳導(dǎo)入受

2、體細(xì)胞后，表達(dá)產(chǎn)生生 蛋白產(chǎn)物釋放出來(lái)的載體蛋白產(chǎn)物釋放出來(lái)的載體 穿越載體：傳導(dǎo)入受體細(xì)胞后，可在各細(xì)穿越載體：傳導(dǎo)入受體細(xì)胞后，可在各細(xì)胞胞 間傳送的載體間傳送的載體 可獨(dú)立復(fù)制：有復(fù)制子可獨(dú)立復(fù)制：有復(fù)制子 含多個(gè)酶切位點(diǎn)：利于雙酶切含多個(gè)酶切位點(diǎn)：利于雙酶切 含抗性標(biāo)志基因：利于重組體挑選含抗性標(biāo)志基因：利于重組體挑選 質(zhì)量數(shù)?。嚎山雍贤庠促|(zhì)量數(shù)?。嚎山雍贤庠碊NA的量大的量大 復(fù)制區(qū)：一個(gè)載體就是一個(gè)復(fù)制子復(fù)制區(qū)：一個(gè)載體就是一個(gè)復(fù)制子 啟動(dòng)子：基因可表達(dá)啟動(dòng)子：基因可表達(dá) 標(biāo)志基因例如抗藥基因：標(biāo)志基因例如抗藥基因： 標(biāo)志基因的作用：標(biāo)志基因的作用： 構(gòu)造：構(gòu)造：cccDNA閉合、

3、環(huán)狀、共價(jià)閉合、環(huán)狀、共價(jià) 分類(lèi)：分類(lèi)： 根據(jù)復(fù)制類(lèi)型根據(jù)復(fù)制類(lèi)型 嚴(yán)緊型：一個(gè)細(xì)菌中不能有過(guò)多的該種質(zhì)粒嚴(yán)緊型：一個(gè)細(xì)菌中不能有過(guò)多的該種質(zhì)粒 松弛型：一個(gè)細(xì)菌中可有多個(gè)該種質(zhì)粒松弛型：一個(gè)細(xì)菌中可有多個(gè)該種質(zhì)粒20個(gè)個(gè) 根據(jù)挪動(dòng)性接合性根據(jù)挪動(dòng)性接合性 轉(zhuǎn)移型接合型：可經(jīng)過(guò)性菌毛進(jìn)入另一細(xì)菌轉(zhuǎn)移型接合型：可經(jīng)過(guò)性菌毛進(jìn)入另一細(xì)菌 非轉(zhuǎn)移型非接合型：不可經(jīng)過(guò)性菌毛進(jìn)入另非轉(zhuǎn)移型非接合型：不可經(jīng)過(guò)性菌毛進(jìn)入另一一 細(xì)菌細(xì)菌根據(jù)作用根據(jù)作用F質(zhì)粒：質(zhì)粒：R質(zhì)粒：質(zhì)粒：Col質(zhì)粒：質(zhì)粒： 命名：命名：PBR322為例為例 P：質(zhì)粒：質(zhì)粒 BR：發(fā)現(xiàn)、構(gòu)建該質(zhì)粒的實(shí)驗(yàn)室：發(fā)現(xiàn)、構(gòu)建該質(zhì)粒的實(shí)驗(yàn)室/作

4、者名首作者名首字字 母簡(jiǎn)寫(xiě)母簡(jiǎn)寫(xiě) 322：該質(zhì)粒的實(shí)驗(yàn)編號(hào)：該質(zhì)粒的實(shí)驗(yàn)編號(hào) 特征：特征： 一個(gè)質(zhì)粒就是一個(gè)復(fù)制子一個(gè)質(zhì)粒就是一個(gè)復(fù)制子 不相容性：有一樣復(fù)制起點(diǎn)和分配區(qū)的質(zhì)不相容性：有一樣復(fù)制起點(diǎn)和分配區(qū)的質(zhì) 粒不能共存于一個(gè)宿主細(xì)胞中粒不能共存于一個(gè)宿主細(xì)胞中 幾種常見(jiàn)的質(zhì)粒載體幾種常見(jiàn)的質(zhì)粒載體 PBR322：PUC18/19PUC18/19：PGEM-3ZPGEM-3Z：PGEM-4ZPGEM-4Z： 雙酶切雙酶切 方法：用兩種不同的內(nèi)切酶分別切目的片方法：用兩種不同的內(nèi)切酶分別切目的片段段 與載體，各自得到兩個(gè)不同的黏性與載體，各自得到兩個(gè)不同的黏性末末 端端 作用：目的片段可按順序

5、接合到載體上，作用：目的片段可按順序接合到載體上，單單 酶切的載體兩邊是兩個(gè)一樣的黏性酶切的載體兩邊是兩個(gè)一樣的黏性末末 端，目的片段結(jié)合到載體上的順序端，目的片段結(jié)合到載體上的順序不不 確定確定 抗性挑選抗性挑選 插入失活：目的基因插入載體時(shí)，插入到插入失活：目的基因插入載體時(shí)，插入到載載 體的標(biāo)志基因當(dāng)中，破壞了該體的標(biāo)志基因當(dāng)中，破壞了該基基 因，使此載體失去對(duì)應(yīng)的抗性因，使此載體失去對(duì)應(yīng)的抗性 應(yīng)防止插入失活的緣由：不插入失活時(shí)，應(yīng)防止插入失活的緣由：不插入失活時(shí)，培培 養(yǎng)的細(xì)胞菌落培育基中參與一種抗生素養(yǎng)的細(xì)胞菌落培育基中參與一種抗生素載載 體上有對(duì)應(yīng)抗性基因，能繼續(xù)生長(zhǎng)的菌體上有對(duì)

6、應(yīng)抗性基因，能繼續(xù)生長(zhǎng)的菌落落 為陽(yáng)性克隆，即我們要的菌落為陽(yáng)性克隆，即我們要的菌落插入失活后的挑選：影印法培育細(xì)胞插入失活后的挑選：影印法培育細(xì)胞A A、B B兩個(gè)培育基中菌落位置分別相等，兩個(gè)培育基中菌落位置分別相等，A A中中參與參與A A抗生素，抗生素，B B中參與中參與B B抗生素抗生素挑選出有挑選出有A A、B B兩抗性基因，但兩抗性基因，但A A被插入失活的被插入失活的重組載體：重組載體：A A中的且中的且B B中不死的菌落為陽(yáng)性克中不死的菌落為陽(yáng)性克 隆，即我們要的菌落隆，即我們要的菌落 藍(lán)白斑挑選藍(lán)白斑挑選 原理：原理：IPTG誘導(dǎo)誘導(dǎo)LacZ乳糖支配子中表乳糖支配子中表 達(dá)出的酶可與達(dá)出的酶可與X-gal成藍(lán)色吲哚產(chǎn)物成藍(lán)色吲哚產(chǎn)物 互補(bǔ)：載體上有互補(bǔ)：載體上有片段，菌體基因組中有片段，菌體基因組中有LacZLacZ缺缺片段，陽(yáng)性克隆菌便有片段，陽(yáng)性克隆菌便有完好完好LacZ，可加，可加IPTG誘導(dǎo)產(chǎn)生酶，加誘導(dǎo)產(chǎn)生酶，加X(jué)-gal成