細(xì)黃鏈霉菌抑制草莓重茬病效果探究

1、細(xì)黃鏈霉菌抑制草莓重茬病效果探究摘要以實(shí)驗(yàn)室保存的抗生菌為出發(fā)菌株，選擇一 株對(duì)引起草莓重茬病的鐮刀菌、絲核菌拮抗作用強(qiáng)的菌株， 經(jīng)鑒定為細(xì)黃鏈霉菌，確定生產(chǎn)培養(yǎng)基為豆餅粉4%、鋸末 12%、甘薯粉12%、細(xì)肥土 35%、石灰2. 0%,種齡為2024 h 的液體菌種，接種量為5%,培養(yǎng)基濕度在30%35%,發(fā)酵 初期室內(nèi)濕度控制在60%左右，基質(zhì)開(kāi)始轉(zhuǎn)粉時(shí)降低空氣濕 度在50%左右。關(guān)鍵詞草莓重茬病；細(xì)黃鏈霉菌；抗生菌中圖分類(lèi)號(hào)s436. 68文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼a文章編號(hào)1007-5739 (2013) 20-0113-02草莓重茬病一直是困擾草莓生產(chǎn)的重要問(wèn)題，尤其是隨著設(shè)施產(chǎn)業(yè)的不斷擴(kuò)大，這個(gè)問(wèn)

2、題越來(lái)越突出。目前，草莓 要連續(xù)種植普遍采用的方法就是澳甲烷土壤熏蒸法，但該藥 的使用成本高，藥效時(shí)間短，且澳甲烷是劇毒氣體，對(duì)大氣 臭氧層破壞嚴(yán)重。大量有毒藥劑的使用使土壤的理化性質(zhì)進(jìn) 一步惡化，肥力降低，有毒物質(zhì)積累，嚴(yán)重影響草莓的品質(zhì) 和產(chǎn)量。造成作物重茬的主要原因是土傳病害和土壤營(yíng)養(yǎng)元 素的缺乏1-2 o同一作物的耕作、施肥、灌溉等方式固定不變，連年耕作，使土壤環(huán)境惡化，肥力降低，有毒物質(zhì)積 累，有益微生物菌群數(shù)量減少，引發(fā)病原微生物的大量滋生 3。同一作物根系分布范圍及深淺一致，吸收養(yǎng)分相同， 極易導(dǎo)致某種營(yíng)養(yǎng)的消耗量增加，該耕作層某種養(yǎng)分缺失， 在連作作物中表現(xiàn)更為嚴(yán)重。1材料與方

3、法1. 1試驗(yàn)材料供試草莓拮抗菌株：實(shí)驗(yàn)室保存的多株放線(xiàn)菌株。草莓 土傳病菌：鐮刀菌(fusaricm oxysporum )、絲核菌 (rhizoctonia solani kuho),從保定滿(mǎn)城草莓園分離并保 存。供試培養(yǎng)基：放線(xiàn)菌培養(yǎng)采用高氏1號(hào)合成培養(yǎng)基，土 傳病菌培養(yǎng)采用pda培養(yǎng)基。靶標(biāo)菌株：鐮刀菌(fusaricm oxysporum)、絲核菌(rhizoctonia solani kuho)。試驗(yàn)菌 株：放線(xiàn)菌j-32o栽培盆：20 cm的塑料盆，取田間細(xì)肥土, 滅菌，每盆裝土 10 kgo栽培槽(長(zhǎng)x寬二100 cmx30 cm) 裝土，500 ml罐頭瓶、紗布、牛皮紙若干。

4、1. 2試驗(yàn)方法1.2. 1抗生菌菌株的篩選。菌種活化：將實(shí)驗(yàn)室保存 的放線(xiàn)菌種活化備用，靶標(biāo)菌活化。菌株篩選方法：將活 化好的放線(xiàn)菌株，在髙氏1號(hào)培養(yǎng)基平板上培養(yǎng)3 d后，分 別以鐮刀菌和絲核菌為靶標(biāo)菌，采用對(duì)峙培養(yǎng)法測(cè)定拮抗作 用。方法為：取活化的靶標(biāo)菌菌餅(5 mm)置于pda平板 (0 90 mm) 一側(cè)，用接種環(huán)挑取適量拮抗菌在平板另一側(cè), 30工培養(yǎng)5 d后測(cè)量抑菌帶寬度，每處理設(shè)3次重復(fù)4。1.2.2室內(nèi)盆栽試驗(yàn)。為了進(jìn)一步驗(yàn)證放線(xiàn)菌株j-32 對(duì)草莓致病菌的抑菌效果及其在土壤中的定殖性能，特進(jìn)行 室內(nèi)盆栽試驗(yàn)?；亟影袠?biāo)菌，分別測(cè)定其對(duì)土傳病害的防治 效果。將放線(xiàn)菌j-32的斜面

5、制成含砲子量為1x106個(gè)/ml 的砲子懸液，搖勻后接入盆栽草莓的根際，每株秧苗接入2 ml, 1周后以同樣方法制備靶標(biāo)菌菌懸液接入草莓的根際， 每株秧苗接入2 mlo以不接放線(xiàn)菌的處理為對(duì)照（ck）。 以絲核菌測(cè)定放線(xiàn)菌j-32的防治效果：選用苗齡20 d的草 莓苗移栽到盆中，每盆5株，5次重復(fù)。以鐮刀菌測(cè)定優(yōu) 選菌株的防治效果：選用苗齡2個(gè)月的草莓苗移植到栽培槽 中，每槽10株，5次重復(fù)。1.2.3 j-32菌劑生產(chǎn)工藝的確定。液體種子制備方法： 培養(yǎng)基含玉米粉2%、豆餅粉2%、淀粉1%,搖瓶培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速 180 r/min, 2830 °c培養(yǎng)24 h。固體種子制備方法：培養(yǎng) 基

6、含小米 100 g. kn03 0.1%、mgs04 0.05%、nacl 0.05%、 k2hp04 0. 05%.牛肉浸膏0.1%、鉄皮10%,調(diào)ph值至7.0 7. 2o將以克氏瓶（高氏1號(hào)培養(yǎng)基）培養(yǎng)成熟的jt8菌鞄 子接入固體種子培養(yǎng)基中，培養(yǎng)57d,鞄子成熟后作為固 體種子備用。2結(jié)果與分析2. 1放線(xiàn)菌對(duì)靶標(biāo)菌的抑菌效果8株放線(xiàn)菌對(duì)靶標(biāo)菌均有較好的抑制作用，其中j-88對(duì)鐮刀菌抑制作用最大，其次為j-32； j-32對(duì)絲核菌的抑制 作用最大，其次為j-88,具體見(jiàn)表1。2.2盆栽草莓發(fā)病情況在試驗(yàn)中觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，加入抗生菌后草莓苗生長(zhǎng)健壯，發(fā) 病率低，具體見(jiàn)表2。2.3 j-32菌劑

7、生產(chǎn)工藝的確定2. 3. 1培養(yǎng)基質(zhì)的選擇。試驗(yàn)選擇8組培養(yǎng)基質(zhì)配方， 分別接入液體菌種，30 £溫箱培養(yǎng)。觀(guān)察生長(zhǎng)情況，并以 培養(yǎng)結(jié)束后測(cè)定胞子數(shù)，確定較適宜的培養(yǎng)基質(zhì)，其中較好 的2組培養(yǎng)基質(zhì)的培養(yǎng)結(jié)果見(jiàn)表3o由于第2組物料成本相對(duì)較低，所以在此培養(yǎng)基的基礎(chǔ) 上做正交試驗(yàn)，進(jìn)一步確定各種成分的具體含量，因素水平 見(jiàn)表4,正交試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表5。4個(gè)因素的主次關(guān)系為：豆餅 粉鋸末甘薯粉細(xì)肥土石灰。最優(yōu)的培養(yǎng)基組合為：豆餅 粉4%、鋸末12%、甘薯粉12%、細(xì)肥土 35%、石灰2. 0%o為了驗(yàn)證最優(yōu)組合，將出發(fā)培養(yǎng)基，正交試驗(yàn)表現(xiàn)最好的培養(yǎng)基和最優(yōu)組合培養(yǎng)基進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證，驗(yàn)證結(jié)果見(jiàn)表6

8、。2. 3.2發(fā)酵培養(yǎng)。發(fā)酵原料及其培養(yǎng)條件同淺盤(pán)培養(yǎng)。發(fā)酵培養(yǎng)56 d后，基質(zhì)全部出現(xiàn)粉色胞子，此時(shí)即可出料。且在4045 £條件下，干燥至含水量10%15%,粉碎后包裝備用，并從中取樣平板測(cè)定胞子數(shù)。經(jīng)5個(gè)批次的生產(chǎn)試驗(yàn)表明，菌絲生長(zhǎng)健壯、整齊、含菌量高，培養(yǎng)結(jié)果見(jiàn)703結(jié)論與討論先用靶標(biāo)菌對(duì)試驗(yàn)室保存的放線(xiàn)菌進(jìn)行初選，然后進(jìn)行 對(duì)草莓主要拮抗菌的抑菌試驗(yàn)，與肥效菌株的拮抗試驗(yàn)對(duì)菌 株進(jìn)一步優(yōu)選，確定j-32細(xì)黃鏈霉菌(streptomyces microflavus)為草莓抗重茬菌劑的生產(chǎn)菌株。放線(xiàn)菌的培養(yǎng)基的影響大小依次為，豆餅粉鋸末甘薯 粉細(xì)肥土石灰，在菌絲生長(zhǎng)期需要的培養(yǎng)

9、基水分要高達(dá)到 60%,在砲子形成期培養(yǎng)基水分不能超過(guò)50%。復(fù)合菌劑在土 壤中形成有益微生物群體優(yōu)勢(shì)，抑制有害微生物的繁殖，抑 制土傳病害，降低發(fā)病率5-7 o4參考文獻(xiàn)1 李保國(guó)，陳超，郭素萍，等無(wú)公害草莓重茬病防 治劑對(duì)草莓生長(zhǎng)的影響j 河北果樹(shù)，2005 (1)： 7-10.2 李彥慧，李保國(guó)，劉雪春，等原美草莓重茬病防 治劑對(duì)草莓礦質(zhì)元素利用效果的研究j.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué) 報(bào)，2005, 28 (6)： 58-63.3 李保會(huì)，李青云，李建軍，等復(fù)合微生物菌肥對(duì) 連作草莓產(chǎn)量和品質(zhì)的影響j.河北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007, 11(1)： 15-17.4 田連生，王偉華，石萬(wàn)龍，等.利用木霉防治大棚 草莓灰霉病j.植物保護(hù)，2000, 26 (2)： 47-48.5 馮宗友，薛立輝，戴厚升，等“利樂(lè)資生”通用 型復(fù)合微生物肥在草莓生產(chǎn)中的應(yīng)用效果研究j.現(xiàn)代農(nóng) 業(yè)科技，2