3類產(chǎn)品抑菌效力檢查方法

1、1檢查內(nèi)容及步驟品名標(biāo)準(zhǔn)編號數(shù)量（支）菌種代數(shù)來源銅綠假單胞菌大腸埃希菌金黃色葡萄球菌白色念珠菌黑曲霉復(fù)核人及日期:確認(rèn)人及口期:1.2培養(yǎng)基確認(rèn)品名批號用途來源胰酪腺大豆肉湯培養(yǎng)基 胰酪ji東大豆瓊脂培養(yǎng)某接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球 菌、銅綠假單胞菌沙氏衙萄糖液體培養(yǎng)基沙氏衙萄糖瓊脂培養(yǎng)基接種口色念珠菌沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基黑曲霉復(fù)核人及日期:確認(rèn)人及日期:6.3培養(yǎng)條件確認(rèn)6.3.1本檢查法中細(xì)菌、控制菌的培養(yǎng)溫度為°c,真菌的培養(yǎng)溫度為°co6.3.2培養(yǎng)箱確認(rèn)序號培養(yǎng)箱名稱型號校驗h期校驗周期校驗單位1電熱恒溫培養(yǎng)箱hh.b11.500-s2生化培養(yǎng)箱lrh-150

2、b復(fù)核人及h期:確認(rèn)人及日期:6.4樣品來源確認(rèn)hl'l 名批號數(shù)量來源備注蛋白琥珀酸鐵ii服溶液確認(rèn)人及日期：復(fù)核人及日期:6.5操作環(huán)境確認(rèn)為的潔凈區(qū)域以內(nèi)，局部（操作臺）為級并單向流空氣。確認(rèn)人及日期：復(fù)核人及日期：7培養(yǎng)基的適用性檢查7.1抑菌劑效力測定用培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基的適用性檢查，包括成品培養(yǎng)基、由脫水培養(yǎng)基或按 處方配制的培養(yǎng)基均應(yīng)檢查。7.2菌種試驗所用的菌株傳代次數(shù)不得超過5代（從菌種保藏屮心獲得的冷凍干燥菌種為第0 代），并采用適宜的菌種保藏技術(shù)進(jìn)行保存，以保證試驗菌株的生物學(xué)特性。銅綠假單胞菌 大腸埃希菌 金黃色葡萄球菌 白色念珠菌 黑曲霉7.3菌液制備(pse

3、udomonas aeruginosa) (cmcc(b)10 104)(escherichia coli)(cmcc(b) 44 102)(staphylococcus aureus) (cmcc(b)26 003)(candida albicans)(cmcc(f) 98 001)(aspergillus niger) (cmcc(f) 98 003)7.3.1接種人腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪月東人豆肉湯培養(yǎng)基中，3035°c培養(yǎng)1824小時；接種白色念珠菌的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖液體培養(yǎng)基中，2025°c培養(yǎng)2448小時。上述培養(yǎng)物用0.

4、 9%無菌氯化鈉溶液制成每lml含菌數(shù)為50loocfu的 菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養(yǎng)基中，2025°c培養(yǎng)57天，加入35ml含0. 05% （ml/ml）聚山梨酯80的0. 9%無菌氯化鈉溶液，將泡子洗脫。然后，采用適 宜方法吸出抱子懸液至無菌氯化鈉溶液制成每lml含抱子數(shù)50loocfu的抱子懸液。7. 3.2菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小時內(nèi)使用；若保存在28°c,可在24小時內(nèi)使用。 黑曲霉抱子懸液可保存在28°c,在驗證過的貯存期內(nèi)使用。7.3.3菌液濃度確認(rèn)占占名稀釋倍數(shù)平皿計數(shù)結(jié)論皿 1 (cfu/ml)皿 2 (c

5、fu/ml)平均值(cfu/ml)大腸埃希菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌白色念珠菌黑曲霉74適用性檢查 取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌各50loocfu,分別注入無菌 平皿屮，立即傾注胰酪腺大豆瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置30 35°c培養(yǎng)48小時，計數(shù)；取白色念珠菌、黑曲霉各50loocfu,分別注入無菌平皿中,立即傾 注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，每株試驗菌平行制備2個平皿，混勻，凝固，置2025°c培養(yǎng)72 小吋，計數(shù)；同吋，用對應(yīng)的對照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗。7. 5結(jié)果判定若被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不少于對照培養(yǎng)基上菌數(shù)平均

6、數(shù)的70%,冃菌落形態(tài)大小與對 照培養(yǎng)基上的菌落一致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。檢測項菌種名稱大腸埃希菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌口色念珠菌黑曲霉試驗組菌數(shù)對照組菌數(shù)被檢培養(yǎng)基占對照 培養(yǎng)基的菌數(shù)比值標(biāo)準(zhǔn)被檢培養(yǎng)基上的菌落平均數(shù)不小于對照培養(yǎng)基上菌落平均數(shù)的70%,且菌落形 態(tài)人小與對照培養(yǎng)基上得菌落致，判該培養(yǎng)基的適用性檢查符合規(guī)定。結(jié)論檢杳人：復(fù)核人：8抑菌效力檢查方法確認(rèn)8.1菌種：同培養(yǎng)基的適用性檢查，若需要，制劑中常見的污染微生物也可作為試驗菌株。8.2菌懸液的制備8.2.1銅綠假單胞菌菌懸液：接種銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪月東大豆肉湯培養(yǎng)基小，3035°c培養(yǎng)1

7、824小吋；取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至 ,用比濁法制成每lml含菌數(shù)約為lo'cfiio8.2.2金黃色葡萄球菌菌懸液：接種金黃色葡萄球菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪豚大豆肉湯培養(yǎng)基,3035°c培養(yǎng)1824小時；取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至 ,用比濁法制成每lml含菌數(shù)約為108cfuo823大腸埃希菌菌懸液：接種大腸埃希菌的新鮮培養(yǎng)物至胰酪月東大豆肉湯培養(yǎng)基，3035°c培 養(yǎng)1824小吋；取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至 ,用比濁法制成每lml含菌數(shù)約為108cfuo8.2.4 h色念珠菌菌懸液：接種門色念珠菌于沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)

8、基中，2025°c培養(yǎng)2448 小時，加入適量的0.9%無菌氯化鈉溶液將瓊脂表面的培養(yǎng)物洗脫，然后，用適宜方法吸出菌懸 液至無菌試管內(nèi)，取上述培養(yǎng)物用0.9%無菌氯化鈉溶液稀釋至,用比濁法制成每lml含菌數(shù)約為108cfuo8.2.5黑曲霉菌懸液：操作吋關(guān)閉空調(diào)系統(tǒng)及潔凈工作臺風(fēng)機(jī)。接種黑曲霉的新鮮培養(yǎng)物至沙氏 葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基中,2328°c培養(yǎng)57天,加入35ml含0. 05% (ml/ml)聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液，將砲了洗脫，然后，用適宜方法吸出抱了懸液至無菌試管內(nèi)，用含0.05% (ml/ml)聚山梨酯80的0. 9%無菌氯化鈉溶液稀釋至,用比濁法制成

9、每lml含抱子數(shù)108cfu的抱子懸液。8.3菌液濃度確認(rèn)品名稀釋倍數(shù)平皿計數(shù)結(jié)論iiil 1 (cfu/ml)皿 2(cfu/ml)平均值(cfu/ml)大腸埃希菌金黃色葡萄球菌銅綠假單胞菌口色念珠菌黑曲霉檢查人及日期：復(fù)核人及日期:& 4菌液制備后若在室溫下放置，應(yīng)在2小吋內(nèi)使用；若保存在28°c,可在24小吋內(nèi)使用。 黑曲霉的抱子懸液可保存在28°c,在1周內(nèi)使用。8.5供試品接種(3類產(chǎn)品)8.5.1抑菌劑效力可能受試驗用容器特征的影響，如容器的材質(zhì)、性狀、體積及封口的方式等。 因此，只要供試品每個包裝容器的裝量足夠試驗用，同時容器便于按無菌操作技術(shù)接入試驗

10、菌 液、混合及取樣等，一般應(yīng)將試驗菌直接接種于供試品原包裝容器屮進(jìn)行貯存。若因供試品的性狀或每個容器裝量等因素需將供試品轉(zhuǎn)移至無菌容器時，該容器的材質(zhì)不得影響供試品的特 性（如吸附作用），特別應(yīng)注意不得影響供試品的ph, ph對抑菌劑的活性影響很大，同時容 器的口徑大小應(yīng)便于供試品的進(jìn)出及混勻。8.5.2取包裝完好的供試品5份，取適量供試品分別轉(zhuǎn)移至5個適宜的無菌容器中，毎一容器接 種一種試驗菌，蛋白琥珀酸鐵為3類供試品，3類供試品屮1g或1ml接種菌量為1010'cfu, 接種菌液的體積不得超過供試品體積的0.5%1%,充分混合，使供試品中的試驗菌均勻分布。 然后將接種的供試品在試驗

11、期間置2025°c,避光貯存，貯存溫度的變化應(yīng)盡可能控制在最小 范圍，并防止被污染。& 6存活菌數(shù)測定8. 6.1根據(jù)產(chǎn)品類型，在供試品剛接種（0時j及表2規(guī)定的間隔時間，分別從上述每個容器屮 取供試品lnil （g）,用pii7.0無菌氯化鈉-蛋門腺緩沖液稀釋成1:10、1:102、1： l（f等稀釋級。 釆用平皿法（照附錄xi j微生物限度檢查法，其中測定細(xì)菌用胰酪腺大豆瓊脂培養(yǎng)基，測定真 菌用沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）測定每份供試品小所含的菌數(shù)。8. 6.2根據(jù)菌數(shù)測定結(jié)果，計算lml （g）供試品各試驗菌所加的菌數(shù)及各間隔時間的菌數(shù)，并換 算成期值。8. 7結(jié)果判斷8.

12、7. 1抑菌劑效力根據(jù)各間隔時間的菌數(shù)lg值相對于初始值（0時菌數(shù)lg值）減少程度進(jìn)行評 價（表2），試驗結(jié)果按有效數(shù)字的修約規(guī)則進(jìn)舍，保留小數(shù)點后1位有效數(shù)字。結(jié)果符合表2 要求可判定該產(chǎn)品抑菌效力符合規(guī)定。表2抑菌劑抑菌效力判斷標(biāo)準(zhǔn)3類供試品細(xì)菌14天菌數(shù)下降不少于1.0 lg, 14天到28天菌數(shù)不增加真菌與初始值比，14、28天菌數(shù)均不增加。注：表中“不增加”是指對前一個測定時間，試驗菌增加的數(shù)量不超過0.5 igo©:蛋白琥珀酸鐵口服溶液（）、考察周期（）操作人及h期:名試驗菌株稱、x大腸埃希菌金黃色 葡萄球菌銅綠假單胞菌口色念珠菌黑曲霉級別項目0時計數(shù)結(jié)果（cfu/ml）

13、平均值（cfu/ml）ig值14天計數(shù)結(jié)果（cfu/ml）平均值(cfu/ml)ig值判定標(biāo)準(zhǔn)14天菌數(shù)下降不少于1.0 ig,與初始值比，14天菌數(shù)不增加判定結(jié)果28天計數(shù)結(jié)果（cfu/ml）平均值(cfu/ml)ig值判定標(biāo)準(zhǔn)14天到28天菌數(shù)不增加與初始值比，28天菌數(shù)不增加判定結(jié)果結(jié)果報告人及口期:復(fù)核人及日期：蛋白琥珀酸鐵口服溶液（）、考察周期（）操作人及日期:名試驗菌株稱、大腸埃希菌金黃色 葡萄球菌銅綠假單胞菌白色念珠菌黑曲霉級別項目0時計數(shù)結(jié)果（cfu/ml）平均值（cfu/ml）ig值14天計數(shù)結(jié)果（cfu/ml）平均值(cfu/ml)ig值判定標(biāo)準(zhǔn)14天菌數(shù)下降不少于1.0 ig,與初始值比，14天菌數(shù)不增加判定結(jié)果28天計數(shù)結(jié)果（cfu/ml）平均值(cfu/ml)ig值判定標(biāo)準(zhǔn)14天到28天菌數(shù)不增加與初始值比，28天菌數(shù)不增加判定結(jié)果結(jié)果報告人及日期:復(fù)核人及口期：蛋白琥珀酸鐵口服溶液（）、考察周期（）操作人及期:名試驗菌株