常見內(nèi)參基因

1、伊Act inAct in即肌動蛋白”，是細胞的一種重要骨架蛋白。同時Acti n在細胞分泌、吞噬、B -Actin移動、胞質流動和胞質分離等過程中起重要作用。Actin在不同物種之間高度保守，以至于很難獲得較好的針對acti n的抗血清。Act in大致可分為六種，其中四種是不同肌肉組織特異性的，包括 askeletal muscle actin , a-cardiac muscle act in, asmooth muscle actin ,和Ysmooth muscle actin ； 其余兩種廣泛分布于各種組織中，包括Bactin( Bnon-muscle)和 Ynon-muscle

2、act in。不同的 act in之間同源性大于 90%，但在 N-termi nal同源性僅 50%-60%，因此N-terminal常被用作actin的抗原。BActin是橫紋肌肌纖維中的一種主要 蛋白質成分，也是肌肉細絲及細胞骨架微絲的主要成分。具有收縮功能，分布廣泛。BActin用途BActin是PCR常用的內(nèi)參，BActin抗體是 Western Blot很好的內(nèi)參指數(shù)。內(nèi)參即是內(nèi)部參照(Internal Control ),對于哺乳動物細胞表達來說一般是指由管家基因編碼表達的 蛋白。它們在各組織和細胞中的表達相對恒定，在檢測蛋白的表達水平變化時常用它來做參照物。常用的蛋白質內(nèi)參有細

3、胞骨架蛋白beta-actin 或beta-tubulin 和 GAPDH(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)等。因此 BActin 抗體、BTubulin 抗體以及GAPDH抗體成為最常見的三個動物細胞內(nèi)參抗體。BActin作為內(nèi)參是得到了公認的，這是針對大多數(shù)組織和細胞來說的，它廣泛分布于細胞漿內(nèi)，表達量非常豐富。Beta-actin由375個氨基酸組成，分子量大小為42-43kDa左右。28kdactin的蛋白水平通常不會發(fā)生改變，因此被廣泛用于Western時上樣量是否一致的參照，也常被用于免疫染色觀察細胞的微絲結構。在用作 Wester

4、n的參照時，Actin抗體和 Tubulin抗體的主要不同之處在于兩者所識別蛋白的分子量不同，這樣可以選擇合適的參照 在同一塊膠同一張膜上實現(xiàn)同時檢測目標蛋白和參照蛋白。GAPDHGAPDH 或 G3PDH 是甘油醛-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydroge nase )的英文縮寫。該酶是糖酵解反應中的一個酶，由4個30 40kDa的亞基組成，分子量146kDa。該酶基因為管家(house keeping )基因，幾乎在所有組織中都高水 平表達，在同種細胞或者組織中的蛋白質表達量一般是恒定的，且不受含有的部分識別位點、佛波脂等的誘導物質的影響而保持

5、恒定，故被廣泛用作抽提t(yī)otal RNA , poly(A)+ RNA ,Western blot等實驗操作的標準化的內(nèi)參。GAPDH吉構圖常用的內(nèi)參有，ACTB (lactin、3肌動蛋白)、GAPDH或18S等。目的是在于避免 RNA 定量誤差、加樣誤差以及各 PCR反應體系中擴增效率不均一、各孔間的溫差等所造成的誤 差、這些都是 管家基因，在各個組織中的表達量相對穩(wěn)定，其中18S同整個基因譜有關 (負責裝配)，它在總RNA中占的比例最高。轉染了 GAPDH siRNA.jpg轉染了 GAPDH siRNA的Hela細胞轉染了 GAPDH相關siRNA的HeLa細胞在轉染后48小時后不斷增

6、殖。紅：被標記的siRNA ;藍：被染色的細胞核；綠色：GAPDH蛋白；（這些siRNA銳博生物均可提供）陰性對照（scrambled siRNA ）的導入（左）對 GAPDH蛋白的表達沒有影響，不過若轉入一 個以GAPDH （右）為靶標的siRNA，則會導致 GAPDH蛋白表達水平的急劇下降。GAPDH作為內(nèi)參GAPDH （甘油醛-3-磷酸脫氫酶）是參與糖酵解的一種關鍵酶，由4個30-40kDa的亞基組成，分子量146kDa，檢測條帶大約在36kDa。GAPDH 基因幾乎在所有組織中都高水平 表達，廣泛用作Western blot蛋白質標準化的內(nèi)參。因為GAPDH作為管家基因在同種細胞或者組織中的蛋白質表達量一般是恒定