自身抗體的應(yīng)用及研究進(jìn)展

1、自身抗體的應(yīng)用及研究進(jìn)展自身抗體的應(yīng)用及研究進(jìn)展 2011-04-132酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA） 1間接免疫熒光法（IFA Indirect Fluorescent Assay ）3免疫印跡法（IB）WesternblotLIA4其它：IDA、RIA等全自動自身抗體分析儀全自動自身抗體分析儀u自動化檢測自動化檢測u檢測定量化檢測定量化u單個項(xiàng)目隨時檢測單個項(xiàng)目隨時檢測u多個項(xiàng)目同時檢測多個項(xiàng)目同時檢測u45-90分鐘報告結(jié)果分鐘報告結(jié)果u原廠質(zhì)控和校正血清原廠質(zhì)控和校正血清u精確溫度調(diào)控系統(tǒng)精確溫度調(diào)控系統(tǒng)u五點(diǎn)定標(biāo)、三重檢測五點(diǎn)定標(biāo)、三重檢測25wash 2wash 3read 3was

2、h 1read 1read 2disp15101520風(fēng)濕病的實(shí)驗(yàn)室診斷u血清學(xué)檢查血清學(xué)檢查 自身抗體自身抗體特異性特異性 非特異的免疫相關(guān)指標(biāo)非特異的免疫相關(guān)指標(biāo)u滑液分析滑液分析u一般的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目一般的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目項(xiàng)目項(xiàng)目檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法SLE四項(xiàng)四項(xiàng)ANA間接免疫熒光抗DSDNA抗體間接免疫熒光抗組蛋白抗體ELISA抗核小體抗體ELISAENA系列系列抗RNP免疫印跡、 ELISA抗SM免疫印跡、 ELISA抗SSA免疫印跡、 ELISA抗SSB免疫印跡、 ELISA抗JO-1免疫印跡、 ELISA抗SCL-70免疫印跡、 ELISA抗核糖體P蛋白免疫印跡、 ELISARA三項(xiàng)三

3、項(xiàng)AKA（抗角質(zhì)蛋白抗體）間接免疫熒光抗RA33ELISA抗CCP（抗環(huán)瓜氨酸肽抗體）ELISAANCA四項(xiàng)四項(xiàng)P-ANCA（熒光模型為核周模型）間接免疫熒光C-ANCA（熒光模型為細(xì)胞質(zhì)模型）間接免疫熒光MPO-ANCA（髓過氧化酶抗體）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗體）ELISA常常見見的的自自身身抗抗體體及及其其檢檢測測方方法法(1)(2)自身免疫肝炎七項(xiàng)自身免疫肝炎七項(xiàng)ANA間接免疫熒光抗LMA抗（肝細(xì)胞膜抗體）間接免疫熒光ASMA（抗平滑肌抗體）間接免疫熒光抗LKM（抗肝腎微粒體抗體）間接免疫熒光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗體）間接免疫熒光AMA（線粒體抗體）間接免疫熒光抗L

4、SP（抗肝臟特異性蛋白抗體）間接免疫熒光RF三項(xiàng)三項(xiàng)RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂綜合征三項(xiàng)（抗磷脂綜合征三項(xiàng)（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗體）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗體ELISA常常見見的的自自身身抗抗體體及及其其檢檢測測方方法法抗Ku抗體（Ku)抗Mi抗體（Mi-2）抗PM-Scl抗體抗JO-1抗體（JO-1）多發(fā)性肌炎、皮肌炎抗線粒體抗體M2型（AMA-M2）原發(fā)性膽汁性肝硬化抗nRNP抗體（U1-snRNP）混合性結(jié)締組織病（MCTD）抗Scl-70抗體（Scl-70）抗著絲點(diǎn)B抗體（CENP-B）系統(tǒng)性硬化

5、抗SSB/La抗體抗SSA/R052抗體抗SS-A/R060抗體干燥綜合征/系統(tǒng)性紅斑狼瘡抗核糖體P蛋白（PO）抗增殖細(xì)胞核抗原抗體（PCNA)抗Sm抗體抗組蛋白抗體抗核小體抗體抗雙鏈DNA抗體IgG抗體系統(tǒng)性紅斑狼瘡項(xiàng)項(xiàng) 目目 名名 稱稱 疾疾 病病ANA譜譜17項(xiàng)（免疫印跡法）項(xiàng)（免疫印跡法）(3)常常見見的的自自身身抗抗體體及及其其檢檢測測方方法法( (一一) )類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RARA）u類風(fēng)濕因子（RF）u早期診斷的系列指標(biāo)抗RA33/36抗體抗核周因子（APF）抗角蛋白抗體（AKA）抗Sa抗體抗環(huán)瓜氨酸抗體（抗CCP）類風(fēng)濕因子（類風(fēng)濕因子（RFRF）u抗人IgG分子F

6、c片段上抗原決定簇的特異性抗體,分為IgM、G、A、E型uRF在RA中的陽性率為70%，是診斷RA的重要標(biāo)準(zhǔn)之一uRF含量與病情的活動性和嚴(yán)重性成正比，持續(xù)高滴度的RF常提示RA病情活動，骨侵蝕發(fā)生率高，?？砂橛衅は陆Y(jié)節(jié)或血管炎等關(guān)節(jié)外表現(xiàn)，提示預(yù)后不良類風(fēng)濕因子（RF）uRF并非RA獨(dú)有的特異性抗體，對RA的診斷不具特異性 SLE 30% SS 70%90% SSc 20%30% MCTD 50%60% 非風(fēng)濕性疾病 5%以下的正常人uRF陽性不等于一定就是RAuRF陰性也不等于一定就不是RARF常用檢測方法uRF 1：40陽性 乳膠凝集法（測IgM-RF）uRF 256 Iu/ml 雙抗夾

7、心ElISA法(測總RF）uRF-IgG 110IU/ml-IgA 18IU/ml ELISA法 -IgM 200IU/mlRARA早期診斷的系列指標(biāo)早期診斷的系列指標(biāo) 敏感性 特異性抗RA33/36抗體 35.8% 99.6%APF 40%-80% 70%-90%AKA 40%-55% 85%-95%抗Sa抗體 40%-60% 98.6% 抗CCP 46%-70% 96%抗環(huán)瓜氨酸肽抗體（抗CCP）u瓜氨酸是RA血清抗聚角蛋白微絲蛋白相關(guān) 抗體的主要抗原決定簇u對RA診斷具有高度特異性（98%）u可在RA早期出現(xiàn)u預(yù)測早期關(guān)節(jié)炎發(fā)展為RAuRA關(guān)節(jié)侵蝕破壞的早期識別及預(yù)測(二)系統(tǒng)性紅斑狼瘡

8、（SLE）u是一種臨床表現(xiàn)有多系統(tǒng)損害癥狀的慢性系統(tǒng)性自身免疫性疾病，其血清有以抗核抗體為主的大量不同的自身抗體u自身抗體（1）抗核抗體譜ANA、抗ds-DNA、抗ENA抗體（2）抗磷脂抗體（3）抗組織細(xì)胞抗體抗RBC抗體 抗血小板相關(guān)抗體 抗神經(jīng)元抗體（4）其它RF、p-ANCA抗核抗體（抗核抗體（ANA）u定義以細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)為抗原的抗體u臨床意義SLE的篩查抗體: 95%陽性，但滴度與SLE活動性無相關(guān) 陰性基本可排除SLE陽性并非SLE特異 陽性并非風(fēng)濕病特異: 風(fēng)濕?。⊿LE、SSc、SS、RA) 非風(fēng)濕性疾病（感染、慢肝、肺纖維化、腫瘤） 服用某些藥物（INH、苯妥英鈉、肼苯達(dá)嗪、普

9、魯卡因酰胺） 抗核抗體（抗核抗體（ANAANA）u方法間接免疫熒光法u結(jié)果判斷: 滴度1：100為陽性 常見核型5種 不同核型的臨床意義不同 核膜型核膜型 與抗與抗ds-DNA有關(guān)，有關(guān)， 多見于多見于SLE，特別是有腎炎者，特別是有腎炎者 均質(zhì)型均質(zhì)型與與AHAAHA（抗組蛋白抗體（抗組蛋白抗體）、抗、抗DNADNA有關(guān)，有關(guān)，引起引起LELE形成主要見于形成主要見于SLESLE、藥物性狼瘡、藥物性狼瘡 斑點(diǎn)型斑點(diǎn)型 與抗與抗ENA有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步查特異性抗體有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步查特異性抗體核仁型核仁型多見于硬皮病多見于硬皮病 著絲點(diǎn)型著絲點(diǎn)型多見于多見于CREST綜合征綜合征ANA常見五種核型及臨

10、床意義u核膜型與抗ds-DNA有關(guān)， 多見于SLE，特別是有腎炎者u均質(zhì)型與AHA、抗DNA有關(guān)，引起LE形成 主要見于SLE、藥物性狼瘡u斑點(diǎn)型與抗ENA有關(guān)，應(yīng)進(jìn)一步查特異性抗體u核仁型多見于硬皮病u著絲點(diǎn)型多見于CREST綜合征ANA檢測方法u間接免疫熒光法u印跡法uELISA法 抗核抗體譜（ANAs） 定義：以細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)為抗原的抗體定義：以細(xì)胞核內(nèi)物質(zhì)為抗原的抗體u 抗抗DNADNA抗體抗體抗抗ssss-DNA-DNA 抗抗dsds-DNA-DNAu 抗組蛋白抗體抗組蛋白抗體HH1 1，HH2A2A，HH2B2B，H H3 3，H H4 4u 抗非組蛋白抗體抗非組蛋白抗體抗抗ENAE

11、NA抗體抗體 抗著絲點(diǎn)抗體抗著絲點(diǎn)抗體u 抗核仁抗體抗核仁抗體 u 其它其它線粒體、溶酶體、高爾基體等線粒體、溶酶體、高爾基體等 抗抗ds-DNA抗體抗體u臨床意義臨床意義 對對SLESLE的診斷有較高特異性的診斷有較高特異性 滴度與滴度與SLESLE活動相關(guān)，可作為病情監(jiān)測及療效觀察指標(biāo)活動相關(guān)，可作為病情監(jiān)測及療效觀察指標(biāo) 與與SLESLE腎損害有關(guān)腎損害有關(guān)u檢測方法檢測方法 放免法（放免法（Farr)Farr)敏感，有利于早期預(yù)測敏感，有利于早期預(yù)測 檢測高親合力的抗檢測高親合力的抗dsds-DNA-DNA 間接免疫熒光法間接免疫熒光法(IF)(IF)特異特異 ELISAELISA可檢

12、測低親合力的抗可檢測低親合力的抗dsds-DNA-DNA 有助于中樞狼瘡的病情監(jiān)測有助于中樞狼瘡的病情監(jiān)測 金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法金標(biāo)免疫斑點(diǎn)法抗抗ENAENA抗體抗體u 抗RNP MCTD100%陽性，且滴度高雙手腫脹，雷諾現(xiàn)象，肌炎，指（趾）端硬化腎臟保護(hù)性抗體？u 抗Sm SLE的標(biāo)記性抗體，陽性率30%有助于早期、不典型及治療緩解后SLE的回顧性診斷抗Sm陽性一定伴抗RNP陽性，但抗RNP陽性可單獨(dú)存在u 抗SSA 原發(fā)性SS：60-75% SLE: 40-50%與皮損、光過敏、白細(xì)胞減少、淋巴結(jié)腫大、 血管炎、紫癜相關(guān) 可造成新生兒狼瘡、嬰兒心臟傳導(dǎo)阻滯u 抗SSB原發(fā)性SS：40%，較抗S

13、SA更特異其它CTD伴抗SSB者常伴繼發(fā)性SS抗抗ENAENA抗體抗體u抗Scl-70 硬皮病標(biāo)記性抗體u抗Jo-1 多肌炎/皮肌炎標(biāo)記性抗體u抗Rib胞漿抗原核糖體位于胞漿內(nèi) 抗Rib陽性+其它自身抗體陰性= ANA陰性 臨床意義 是SLE的又一特異性抗體，陽性率10-20% 多見于SLE活動期 與抗ds-DNA抗體的消長相平行 但不會隨病情緩解立即消失 可持續(xù)1-2年后才轉(zhuǎn)陰抗核小體抗體（AnuA）u核小體是細(xì)胞染色質(zhì)中的一種成分，它是由DNA和組蛋白以特殊的方式相連而組成，在SLE的誘導(dǎo)和致病中起重要作用u對SLE的早期診斷有重要意義比抗ds-DNA、抗組蛋白抗體更早出現(xiàn)陽性率：50%9

14、0%特異性98%(三)皮肌炎/多發(fā)性肌炎（PM/DM）u免疫學(xué)檢查免疫學(xué)檢查 ANA ENA抗抗Jo-1陽性陽性u其它檢查其它檢查肌酶譜肌酶譜 肌酸磷酸激酶（肌酸磷酸激酶（CPK）: MM-心肌和骨骼肌心肌和骨骼肌 MB-心肌心肌 BB-平滑肌和腦內(nèi)平滑肌和腦內(nèi) 乳酸脫氫酶（乳酸脫氫酶（LDH） 谷草轉(zhuǎn)氨酶（谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST） 谷丙轉(zhuǎn)氨酶（谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT） 堿性磷酸酶（堿性磷酸酶（ALP）(四)干燥綜合征（SS）uANA陽性率40%70%uENA抗SSA抗體陽性率70%96% 抗SSB抗體陽性率50%87%u抗-Fordrin對于對于pSS或或sSS的診斷有一的診斷有一 定意義，但特異性

15、和敏感性并不理想。定意義，但特異性和敏感性并不理想。uRF陽性率75%100%u高球蛋白血癥uWBC下降(五)系統(tǒng)性硬化?。╬SS）uANA陽性率陽性率50%55%uENA抗抗Scl-70陽性率陽性率15%40%u抗著絲點(diǎn)抗體抗著絲點(diǎn)抗體(ACA)陽性陽性(六)混合性結(jié)締組織?。∕CTD）uANA陽性uENA抗RNP高滴度陽性（七）血管炎（七）血管炎 抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（抗中性粒細(xì)胞胞漿抗體（ANCA）熒光圖譜分型熒光圖譜分型主要抗原成分主要抗原成分胞漿型胞漿型cANCA核周型核周型pANCA蛋白酶蛋白酶3（PR3）髓過氧化物酶（髓過氧化物酶（MPO）非典型型（非典型型（cANCA）不清不清

16、ANCA的臨床意義uc-ANCA和PR3-ANCA 對韋格納肉芽腫有高度特異性（95%），敏感性80% 與病情活動性相關(guān) 常作為判斷藥物療效和病情復(fù)發(fā)的指標(biāo)up-ANCA和MPO-ANCA 不如c-ANCA具有診斷特異性 陽性者血管炎程度較高，其滴度也與病情活動相關(guān) 主要與顯微鏡下多血管炎 壞死性新月體腎小球腎炎 變應(yīng)性肉芽腫性血管炎 相關(guān)（八）抗磷脂抗體綜合征（APS）u是一種非炎癥性自身免疫病，臨床上以動/靜脈血栓形成、習(xí)慣性流產(chǎn)和血小板減少等癥狀為表現(xiàn)，血清中存在抗磷脂抗體u血清學(xué)檢查 抗心磷脂抗體（ ACA ）IgG、IgM、IgA（ELISA） 抗2糖蛋白1抗體（抗2-GP1) 狼瘡

17、抗凝物（LA）凝血酶原時間（PT） 激活的部分凝血活酶時間（APTT） 白陶土凝集時間（KCT） 蛇毒試驗(yàn)（RVVT） 抗磷脂抗體u抗2-GP1抗體比LA和ACA在APS患者中更具有特異性，是導(dǎo)致APS的主要抗體u抗2GP1抗體只出現(xiàn)于自身免疫性疾病, 而ACA也可出現(xiàn)于一些感染性疾病, 如梅毒、AIDS、肝炎、結(jié)核等 （九）自身免疫性肝病我科開展的自身免疫肝炎系列抗體包括：我科開展的自身免疫肝炎系列抗體包括：抗核抗體（ANA）抗肝細(xì)胞膜抗體(抗LMA)抗平滑肌抗體（ASMA）抗肝腎微粒體抗體（抗LKM抗體）抗肝-胰抗體(抗LPLP抗體)抗可溶性肝細(xì)胞抗體（抗SLA）抗線粒體抗體（AMA）u自

18、身免疫性肝炎（AIH） ANA 抗平滑肌抗體（SMA） 抗肝腎微粒體抗體u原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC） 抗線粒體抗體（AMA）M2u原發(fā)性硬化性膽管炎 ANCA陽性自身免疫性肝病自身免疫性肝病風(fēng)濕病的實(shí)驗(yàn)室診斷u自身抗體特異性u非特異的免疫相關(guān)指標(biāo)u一般的實(shí)驗(yàn)室檢查項(xiàng)目 血常規(guī) 尿常規(guī) 肝功能 腎功能等注意事項(xiàng)u選擇做哪些檢查項(xiàng)目時要重點(diǎn)突出 避免“大撒網(wǎng)”u解釋實(shí)驗(yàn)結(jié)果時應(yīng)考慮以下幾個問題實(shí)驗(yàn)方法本身的敏感性、特異性、 可靠性及實(shí)驗(yàn)室之間的差異性u結(jié)合臨床應(yīng)把與之相關(guān)的一組實(shí)驗(yàn)結(jié)果放在一起考慮全國自身抗體檢測質(zhì)量控制總結(jié)全國自身抗體檢測質(zhì)量控制總結(jié) u由中華醫(yī)學(xué)會風(fēng)濕病分會計劃 u參與質(zhì)控的醫(yī)院和檢測的項(xiàng)目逐年增多，多為三甲醫(yī)院 自身抗體的檢測對于自身抗體的檢測對于風(fēng)濕性疾病的診斷風(fēng)濕性疾病的診斷、病情評估病情評估、治療和預(yù)后治療和預(yù)后都及其重要。但影響其檢測的因素很多