實(shí)驗(yàn)六 線粒體的活體染色和觀察PPT課件

1、實(shí)驗(yàn)七、線粒體的活體染色和觀察一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?了解線粒體在細(xì)胞中的分布及形態(tài)、掌握研究方法。二、實(shí)驗(yàn)原理： 健納綠B（Janus Green B）對(duì)線粒體具有專一性染色、毒性最小的堿性染料，由于線粒體中細(xì)胞色素酶系的作用，使它始終保持氧化狀態(tài)，并呈現(xiàn)藍(lán)綠色，在線粒體周圍的細(xì)胞質(zhì)中的染料被還原為無色的色基。第1頁/共6頁 三、實(shí)驗(yàn)材料：常規(guī)解剖器、大白鼠肝細(xì)胞 四、步驟及方法 1、鼠肝邊沿較薄組織小塊，放入盛有Ringer氏液的培養(yǎng)皿內(nèi)，洗去血液。 2、將1/5000Janus Green B 染液倒入另一培養(yǎng)皿中，將肝組織移入其內(nèi)，但不可將組織塊完全淹沒，要讓組織上面部分半裸露在染液外面，這樣

2、，細(xì)胞內(nèi)的線粒體的酶系可充分得到氧化，線粒體才易染色，一般染30-40分鐘（組織塊邊緣染成藍(lán)綠色即可）。第2頁/共6頁 3、染色后，用兩根解剖針，同時(shí)用左右兩手，用一手的針壓住組織塊，然后用另一手的針稍稍用力拉肝組織塊邊緣，就會(huì)有一些細(xì)胞或細(xì)胞群和組織塊分離。 4、用吸管將分離的細(xì)胞吸起，放在載玻片中央的Ringer氏液中。墊兩根頭發(fā)，蓋上蓋玻片，液體不要太多。 5、油鏡觀察：觀察時(shí)，不斷地上下微調(diào)節(jié)螺旋，使蓋玻片上下稍稍移動(dòng)，這樣所觀察到的材料總得到充足的氧氣，線粒體的染色才顯示得非常清楚。第3頁/共6頁 6、結(jié)果：油鏡下，可見肝細(xì)胞質(zhì)中線粒體被染成藍(lán)綠色，呈顆粒狀或線條狀，在細(xì)胞核周圍分布得特別多。 1、Ringer氏溶液的配方： NaCl 8.5/6.5克 CaCl2 0.12克 重碳酸鈉 0.2克 氯化鉀 0.14克 磷酸氫二鈉 0.01克 葡萄糖 2.0克 水 1000ml第4頁/共6頁 2、1% 1/5000濃度的健那綠B染液 稱取0.5克Janus Green B溶于50mlRinger氏溶液中，微熱（30-40）使之很快溶解。用濾紙過濾后即為1%原液。取1%原液1ml加入49mlRinger氏液中