GE中低壓層析柱-柱效測(cè)定方法-詳解

1、精品文檔 1歡迎下載 GE中低壓層析柱柱效測(cè)定方法 柱效測(cè)定是一項(xiàng)經(jīng)常使用的操作，對(duì)于定量表征層析柱的工作狀態(tài)是否良好， 工藝的驗(yàn)證具有重要的意義。但是實(shí)際工作中很多朋友都遇到不會(huì)測(cè)柱效或者 測(cè)出來注銷過低的狀況，不知道如何解決。所以今天我就給大家詳細(xì)介紹一下 柱效的正確測(cè)定方法，以及經(jīng)常遇到的問題如何解決。 本方法適用于所有GE公司中低壓液相色譜的預(yù)裝柱及自己填裝的層析柱。 介紹分為5個(gè)部分，測(cè)前準(zhǔn)備、試劑選擇、測(cè)柱效操作、測(cè)試結(jié)果積分、經(jīng)常 發(fā)生的問題。 1.測(cè)前準(zhǔn)備： ？KTA層析設(shè)備。要求設(shè)備的型號(hào)與層析柱大小匹配，從上樣閥門到紫外和電 導(dǎo)檢測(cè)器之間的體積要做到最小 （管路內(nèi)徑盡量細(xì)，

2、管路盡量短），這對(duì)于準(zhǔn) 確測(cè)量實(shí)驗(yàn)室小層析柱的柱效非常重要。 測(cè)試平衡溶液及樣品。這個(gè)部分在試劑選擇中單獨(dú)細(xì)說。 裝填好的層析柱。使用平衡緩沖液在測(cè)柱效的流速下至少平衡 1.5 CV （柱體 積），平衡方向與測(cè)柱效方向必須 一致 樣品環(huán)。容積大于1%拄體積。 2試劑選擇 測(cè)柱效主要有兩種測(cè)試系統(tǒng)：1 NaCI測(cè)試系統(tǒng)；2丙酮測(cè)試系統(tǒng)。只要操作正 確，兩個(gè)系統(tǒng)測(cè)出來的結(jié)果是 基本一致的。但是要注意：各試劑的濃度不能隨 意改變，否則影響測(cè)試結(jié)果。 NaCI測(cè)試系統(tǒng) 對(duì)于所有種類的柱子和填料，都可以使用氯化鈉系統(tǒng)測(cè)柱效 平衡液：0.4 M NaCI水溶液 樣 品：0.8 M NaCI水溶液 3. 測(cè)

3、柱效操作 測(cè)柱效全程使用30 cm/h線性流速。平衡層析柱至少1.5 CV，將1% CV勺樣品 （NaCl或丙酮）注射進(jìn)入層析 柱，使用平衡液沖洗直至電導(dǎo)或紫外 280nm出 現(xiàn)響應(yīng)峰。 4. 測(cè)試結(jié)果積分 以UNICORN版本為例演示給大家看如何操作 （各 UNICOR版本操作基本一致） 以NaCI系統(tǒng)測(cè)柱效的所 有操作針對(duì)電導(dǎo)曲線，以丙酮系統(tǒng)測(cè)柱效的所有操作 針對(duì)UV 280曲線（手頭沒有測(cè)柱效結(jié)果，所以隨便找 了一個(gè)圖，里面有兩個(gè) 峰。大家測(cè)柱效的結(jié)果只有一個(gè)峰） 1） 在Evaluation窗口中打開測(cè)柱效結(jié)果文件，在 Curve窗格中點(diǎn)擊右鍵，選 擇 Customize 2） 勾選復(fù)

4、選框去掉不需要顯示的曲線 3） 在工具欄中點(diǎn)擊峰積分按鈕，進(jìn)行積分處理或者在 In tegrate下拉菜單中點(diǎn) 擊Peak In tergrate 進(jìn)行積分處理 精品文檔 2歡迎下載 4） 選擇需要積分的曲線以及積分表存儲(chǔ)位置，基線類型默認(rèn)為 Calculatebaseli ne 5） 在積分窗口中點(diǎn)擊Peak Window,出現(xiàn)以下窗口，通過拖動(dòng)左右兩條直線可 以選擇需要進(jìn)行積分的范圍，點(diǎn)擊OK確認(rèn) 6） 在積分窗口點(diǎn)擊Reject Peaks對(duì)需要分析的色譜峰可進(jìn)行高級(jí)定義，包括 最小峰高、峰寬、峰面積、 峰個(gè)數(shù)等，在這里最常用的是在 Peakarea is less than輸入需要顯示

5、的最大峰的個(gè)數(shù)，點(diǎn)擊 OK確定 7） 在Column height （bed height） 一欄中輸入柱床高度，在柱效測(cè)定中此項(xiàng) 必須填寫 8） 點(diǎn)擊積分窗口中Save and Edit Peak Table 按鈕，可以對(duì)峰進(jìn)行高級(jí)操作 9） 點(diǎn)擊積分窗口中的OK查看積分結(jié)果 10） 在 Peak data 區(qū)域點(diǎn)擊右鍵，選擇 Customize 在 Select peak table columns對(duì)話框中找到需要顯示的數(shù)據(jù)， plate height （ HETP、Asymmetry 等，點(diǎn)擊OK執(zhí)行。Peakdata區(qū)域中將會(huì)顯示增選的分析結(jié)果 判斷層析柱柱效是否合格的標(biāo)準(zhǔn)是 Plat

6、es per meter 和Asymmetry。Plates per meter要求大于說明書上要求的最低限（如 3000或20000），或 者1000000/平均粒徑/3 （計(jì)算出來就是說明書上的值）。Asymmetry要求處于 0.81.8之間。滿足這兩點(diǎn)，說明柱子裝填沒問題。 5. 經(jīng)常發(fā)生的問題 如果不幸你測(cè)出來的柱效不合格，請(qǐng)檢查以下原因: 影響柱效的可能 原因 對(duì)策 柱子裝填不均勻 重新裝柱 管道中液流不穩(wěn) 疋 NaOH青洗系統(tǒng)；平衡柱子1.5CV以上 柱子中有氣泡 溶液脫氣；反壓閥在線，沖洗足夠長(zhǎng)時(shí)間 凝膠有結(jié)塊現(xiàn)象 拆掉層析柱，NaOH青洗凝膠后重新裝柱；換 新的凝膠 柱子液流分配不 好 換分配器或?qū)游鲋?系統(tǒng)死體積大 換細(xì)管路；短接柱位閥 樣