CpG-ODN的免疫刺激作用

1、CPG概念為非甲基化的胞嘧啶鳥嘌呤二核苷酸重復(fù)序列，即CpG CpG 基序。一種免疫佐劑作用靶點TLR9TLR9細胞免疫，體液免疫Th1免疫應(yīng)答 慢性乙型肝炎患者細胞免疫低下 HBVHBV免疫耐受，持續(xù)感染 腫瘤微小殘留病的清除CPG提高PBMC中Th1細胞Th1Th1占淋巴細胞百分比CPG提高PBMC中Th1 、Tc1細胞百分率*：與對照組比較，P0.05 CPG刺激BPMC分泌細胞因子*：與對照組比較，P0.05 CPG誘導(dǎo)PBMC殺傷靶細胞1. 收集CPG活化的PBMC2. 細胞毒性實驗：效應(yīng)細胞為CPG活化的PBMC；靶細胞為CFSE預(yù)染的K562細胞。對照組效應(yīng)細胞為未經(jīng)CPG活化的

2、PBMC。3. 效：靶20：1，混合培養(yǎng)2h。流式細胞術(shù)檢測靶細胞死亡率。CPG誘導(dǎo)PBMC殺傷靶細胞CFSE染色靶細胞1.濃度為5mol/ L 的CFSE （2羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯）工作液2.取對數(shù)生長期的靶細胞濃度108/ L3.細胞懸液與等體積CFSE 工作液混合4.37 孵育10 min。5.離心洗滌兩次后6.懸浮細胞備用CFSE染色靶細胞實驗結(jié)果 CpG活化PBMCPBMC對K562細胞的殺傷作用(N=5)(N=5)CPG活化PBMC 16.855.14 %對照組8.622.83 %*：與對照組比較，P0.05 CIK細胞殺傷靶細胞CIK細胞殺傷靶細胞研究背景 通過主動免疫

3、、過繼特異性免疫、過繼非特異性免疫等方式，清除慢性乙肝患者體內(nèi)殘存的HBV，達到治療效果。研究背景 B B淋巴細胞具有抗原遞呈細胞的性質(zhì)，同時具有CpG-ODNCpG-ODN受體：TLR-9TLR-9。本研究探討CpG-ODNCpG-ODN誘導(dǎo)B淋巴細胞成為高效APC，使之具有類似于樹突狀細胞功能的可行性。TOLL受體TOLL受體在血細胞中的表達活化B細胞負載核心抗原1.磁珠分選B淋巴細胞2.CPG活化B淋巴細胞3.核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC4.流式細胞儀、熒光顯微鏡檢測抗原負載狀況磁珠分選B細胞分選前B B細胞 7.89%7.89% 分選后B B細胞 89.6%89.6% 活

4、化B細胞負載抗原肽Marker% GatedAll100.00M141.34M1活化B細胞負載核心抗原熒光顯微鏡觀察B細胞負載HBcAg18-27肽 APC與T細胞作用機制CPG對B細胞抗原遞呈相關(guān)分子的作用研究1.CpG2006、2216由上海生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成，全硫代化修飾2.對照組為含10%FCS的RPMI1640外周血PBMC，細胞量107/孔，37、5%CO2、48小時3.實驗組加入CpG2006或CpG2216，終濃度均為1umol/mL，余同上CpG提高淋巴細胞CD69表達 T T淋巴細胞 B B淋巴細胞 CD69表達率（%）*：與對照組比較，P0.05 B細胞CD80

5、、CD86表達對照組加CPG-ODN組加CPG-ODN組CpG提高B細胞表面CD80、CD86的表達 CD80 CD80 CD86CD86CD80、CD86表達率（%）*：與對照組比較，P0.05 B細胞MHC-、MHC-表達對照組加CPG-ODN組CpG提高B細胞表面MHC-、MHC-的表達 MHC-MHC-MHC表達量（MFI）*：與對照組比較，P0.05 活化B細胞誘導(dǎo)CTL1. 負載了抗原的活化B細胞與淋巴細胞混合培養(yǎng)(含IL-2的RPMI1640培養(yǎng)液).2. 收集細胞,以五聚體技術(shù)檢測HBV特異性CTL.3. 實驗組特異性CTL為0.500.19%，對照組為0.200.10%。 特

6、異性CTL誘導(dǎo)Pro5TM MHC Pentamers檢測對照組和實驗組HBcAg18-27抗原特異性CTL（Q2-1區(qū)）。前者為對照組（未加APC），后者為實驗組（加APC）。結(jié)論1.CpG能夠活化B細胞，對T細胞無明顯的作用2.CpG能夠提高B細胞表面抗原遞呈相關(guān)分子的表達3.CPG誘導(dǎo)PBMC產(chǎn)生高水平的IFN-4.CPG誘導(dǎo)淋巴細胞向Th1、Tc1分化5.CPG增強PBMC對K562細胞的殺傷作用6.通過B細胞介導(dǎo), CPG可誘導(dǎo)特異性CTLCFSE染色靶細胞1.濃度為5mol/ L 的CFSE （2羧基熒光素二醋酸鹽琥珀酰亞胺酯）工作液2.取對數(shù)生長期的靶細胞濃度108/ L3.細胞懸液與等體積CFSE 工作液混合4.37 孵育10 min。5.離心洗滌兩次后6.懸浮細胞備用CIK細胞殺傷靶細胞研究背景 B B淋巴細胞具有抗原遞呈細胞的性質(zhì)，同時具有CpG-ODNCpG-ODN受體：TLR-9TLR-9。本研究探討CpG-ODNCpG-ODN誘導(dǎo)B淋巴細胞成為高效APC，使之具有類似于樹突狀細胞功能的可行性。TOLL受體CpG提高B細胞表面MHC-、MHC-的表達 MHC-MHC-MHC表達量（MFI）*：與對照組比較，P0.05 活化B細胞誘導(dǎo)CT