第4章 高效液相色譜

1、概述概述主要類型及選擇主要類型及選擇良好的工作習(xí)慣良好的工作習(xí)慣常見問題分析常見問題分析儀器基本結(jié)構(gòu)儀器基本結(jié)構(gòu)制備色譜制備色譜概述概述1. 與經(jīng)典液相色譜法比較與經(jīng)典液相色譜法比較 2. 與與GC法比較法比較 分離對象分離對象流動相作用流動相作用分離溫度分離溫度HPLC法的局限性法的局限性儀器基本結(jié)構(gòu)LoadInject 色譜柱，包括柱管與固定相兩部分。柱色譜柱，包括柱管與固定相兩部分。柱管材料主要是不銹鋼。管材料主要是不銹鋼。 一般分析型柱長一般分析型柱長530cm，內(nèi)徑為，內(nèi)徑為45mm，凝膠色譜柱內(nèi)徑，凝膠色譜柱內(nèi)徑312mm，制備柱，制備柱內(nèi)徑較大，可達(dá)內(nèi)徑較大，可達(dá)25mm 以上。

2、以上。 液相色譜檢測器的種類也很多。根據(jù)檢液相色譜檢測器的種類也很多。根據(jù)檢測原理的不同，可將其分為測原理的不同，可將其分為溶質(zhì)型溶質(zhì)型檢測檢測器和器和總體型總體型檢測器兩種：檢測器兩種： （l）溶質(zhì)型）溶質(zhì)型 僅對被分離組分的物理或僅對被分離組分的物理或化學(xué)特性有響應(yīng)化學(xué)特性有響應(yīng) （2）總體型）總體型 對試樣和洗脫液總的物理對試樣和洗脫液總的物理或化學(xué)性質(zhì)有響應(yīng)或化學(xué)性質(zhì)有響應(yīng)示差折光檢測器（示差折光檢測器（RID）蒸發(fā)激光散射檢測器（蒸發(fā)激光散射檢測器（ELSD）電導(dǎo)檢測器（電導(dǎo)檢測器（ECD）紫外紫外-可見檢測器（可見檢測器（UV-Vis D）二極管陣列檢測器（二極管陣列檢測器（PDA

3、D）熒光檢測器（熒光檢測器（FD）原理：根據(jù)物質(zhì)具有紫外原理：根據(jù)物質(zhì)具有紫外-可見吸收的特性可見吸收的特性1. UV-Vis D和和PDAD優(yōu)點：靈敏度很高，比UVD高約10 103倍；選擇性更好主要缺點：不能檢測沒有熒光的物質(zhì)；線性范圍窄2. FD原理：某些物質(zhì)在一定波長紫外原理：某些物質(zhì)在一定波長紫外-可見光照射下可見光照射下會發(fā)射出特定波長的熒光會發(fā)射出特定波長的熒光3. RID原理：幾乎所有物質(zhì)都有各自不同的折射率，檢原理：幾乎所有物質(zhì)都有各自不同的折射率，檢測樣品組分與流動相光折射指數(shù)的差別測樣品組分與流動相光折射指數(shù)的差別優(yōu)點：通用性檢測器；幾乎對所有物質(zhì)都有響應(yīng) 主要缺點：靈敏

4、度較低；受溫度影響大；不能用于梯度洗脫4. ELSD原理：樣品組分和流動相被霧化，其中高原理：樣品組分和流動相被霧化，其中高沸點的物質(zhì)分子會對檢測器的光產(chǎn)生散射沸點的物質(zhì)分子會對檢測器的光產(chǎn)生散射作用，從而引起光強(qiáng)度的改變產(chǎn)生信號作用，從而引起光強(qiáng)度的改變產(chǎn)生信號優(yōu)點：通用性檢測器；可用于揮發(fā)性低于流動相的任何樣品組分的測定，且各組分的響應(yīng)幾乎相等；可用于梯度洗脫 主要缺點：靈敏度較紫外低；價格昂貴5. ECD原理：根據(jù)離子型組分會改變流動相的電導(dǎo)情況原理：根據(jù)離子型組分會改變流動相的電導(dǎo)情況優(yōu)點：靈敏度高；線性范圍寬；是離子型色譜中使用最廣泛的檢測器主要缺點：受溫度影響大；流動相pH 7時不

5、夠靈敏HPLC的主要類型及選擇固定相固定相按承受高壓能力大小可分為：剛性固體和硬膠兩類按孔隙深度可分為：表面多孔型和全多孔型兩類流動相流動相對于紫外吸收檢測器，應(yīng)注意選用的波長比溶劑的紫外截止波長要長對于折光率檢測器，要求選擇與組分折光率有較大差別的溶劑作流動相，以達(dá)最高靈敏度常用的低粘度溶劑有丙酮、乙醇、乙腈等；而戊烷、乙醚的粘度過低溶劑的紫外截止波長指當(dāng)小于截止波長的輻射通過溶劑時，溶劑對此輻射產(chǎn)生強(qiáng)烈吸收，此時溶劑被看作是光學(xué)不透明的，它嚴(yán)重干擾組分的吸收測量。分離原理分離原理固定相固定相流動相流動相鍵合固定相類型鍵合固定相類型鍵合固定相的優(yōu)點與缺點鍵合固定相的優(yōu)點與缺點 分離原理分離原理固定相固定相流動相流動相分離原理分離原理 rrABABABK/固定相固定相流動相