常見蛋白酶抑制劑

1、當(dāng)前位置：生物幫 > 實驗技巧 > 生物化學(xué)技術(shù) > 正文蛋白酶及蛋白酶抑制劑大全日期：2021-06-13 來源：互聯(lián)網(wǎng)標(biāo)簽：相關(guān)專題：解析蛋白酶活性測定聚焦蛋白酶研究新進展摘要：破碎細胞提取蛋白質(zhì)的同時可釋放出蛋白酶,這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解.在蛋白質(zhì)提取過程中,需要參加蛋白酶抑制劑以預(yù)防蛋白水解.以以下舉了 5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點,由于各種蛋白酶對不同蛋白質(zhì)的敏感 性各不相同,因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度恩必美生物新一輪2-5折生物試劑大促銷！Ibidi細胞灌流培養(yǎng)系統(tǒng)-模擬血管血液流動狀態(tài)下的細胞培養(yǎng)系統(tǒng)廣州賽誠生物基因表達調(diào)

2、控專題蛋白酶抑制劑破碎細胞提取蛋白質(zhì)的同時可釋放出蛋白酶,這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解.在蛋白質(zhì)提取過程中,需要參加蛋白酶 抑制劑以預(yù)防蛋白水解.以以下舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點,由于各種蛋白酶對不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同,因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度. 由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低,尤其應(yīng)注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時應(yīng)充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀.在寶靈曼公司的目錄上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制劑表.常用抑制劑PMSF1抑制絲氨酸蛋白酶如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶、凝血酶和疏基蛋白酶如木瓜蛋白酶；210mg/ml溶于異丙醇中；3在室溫下可

3、保存一年；4工作濃度:17174ug/ml0.11.0mmol/L;5在水液體溶液中不穩(wěn)定,必須在每一別離和純化步驟中參加新鮮的PMSF.EDTA1抑制金屬蛋白水解酶;2)0.5mol/L 水溶液,pH89;3) 溶液在4 C穩(wěn)定六個月以上；4) 工作濃度：0.51.5mmol/L. (0.20.5mg/ml);5) 參加NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值,否那么EDTA不溶解.胃蛋白酶抑制劑(pepst anti n)1) 抑制酸性 蛋白酶如胃蛋白酶,血管緊張肽原酶,組織蛋白酶D和凝乳酶;2) 1mg/ml溶于甲醇中；3儲存液在4C 一周內(nèi)穩(wěn)定,-20 C穩(wěn)定6個月；4) 1 作濃度:0.7ug/ml

4、(1umol/L)5) 在水中不溶解.亮抑蛋白酶肽(leupeptin)1) 抑制絲氨酸和疏基蛋白酶,如木瓜蛋白酶,血漿酶和組織蛋白酶B;2) lOmg/ml 溶于水;3) 儲存液4 C穩(wěn)定一周,-20 C穩(wěn)定6個月；4) 工作濃度0.5mg/ml.胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)1) 抑制絲氨酸蛋白酶,如血漿酶,血管舒緩素,胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶 ;2) lOmg/ml 溶于水,pH783儲存液4 C穩(wěn)定一周,-20 C穩(wěn)定6個月；4) 工作濃度:0.062.0ug/ml(0.010.3umol/L);5) 預(yù)防反復(fù)凍融：6) 在pH>12.8時失活.蛋白酶抑制劑混合使用35ug/

5、ml PMSF 絲氨酸蛋白酶抑制劑金屬蛋白酶抑制劑0.3mg/ml EDTA酸性蛋白酶抑制劑廣譜蛋白酶抑制劑0.7ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)0.5ug/ml 亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)常用蛋白酶抑制劑表抑制劑靶蛋白酶有效濃度儲藏溶液注解Antipain木瓜酶和胰酶50 卬 g/ml1mg/ml水溶液對胰凝蛋白酶,胃液 素,纖溶酶無影響APMSF胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶10-40 g/ml 或10- 20叩100mmol/L水溶液毒性比PMSFf氐,不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰膽堿酯酶抑肽酶絲氨酸蛋白酶0.06- 2卬 g/ml10mg/mlPBS 溶液預(yù)防反復(fù)動凍融抑氨肽

6、酶B氨基肽酶40 卬 g/ml溶于甲醇不能抑制短肽酶Calpain 抑制劑I、 nCalpain (鈣依賴性半胱氨酸蛋白酶)1:17 卬 g/ml n :7 卬 g/ml溶于乙醇可滲透薄膜抑糜骯酶素胰凝乳蛋白酶6- 60 1 g/ml溶于DMSOB.M.綜合酶片絲氨酸,半胱氨酸和 金屬蛋白酶每10-50ml細胞提取液內(nèi)加一片不含EDTAEDTA金屬蛋白酶0.2-0.5mg/ml 或0.5- 1.3 1 mol/L500mmol/L水溶液 pH=8.0抑蛋白酶醛肽絲氨酸蛋白酶,疏基 蛋白酶0.5- 2訴 g/ml10mg/ml水溶液a2-巨球蛋白廣譜1U /ml100U /ml PBS 溶液預(yù)防

7、接觸復(fù)原劑Pefabloc SC(boe- hringer Mannheim)絲氨酸蛋白酶0.1-1.0mg/ml 或0.4-4mmol/L100mMzK 溶液無毒,在中性 pH下較PMSF穩(wěn)定胃蛋白酶抑制劑酸性蛋白酶0.7 卬 g/ml1mg/ml甲醇溶液PMSF絲氨酸蛋白酶17- 170 卬 g/ml10mg/ml異丙醇溶液每一操作步驟時新鮮參加TLCK胰蛋白酶37- 50 卬 g/ml1mg/ml溶于50mMmol/L醋酸鹽溶 液,pH=5.0對胰凝蛋白酶無影 響TPCK胰凝乳蛋白酶70- 100 卬 g/ml3mg/ml乙醇溶液對胰蛋白酶無影響 青嵐點擊：次來源于-生物秀知道首頁實驗實

8、驗中央常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度2021-06-09 23:01:02 來源：瀏覽次數(shù)：119網(wǎng)友評論0條常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度 在與蛋白相關(guān) 的檢測中,首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取.蛋白質(zhì)的提取過程中,我們要經(jīng)常加和蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)以預(yù)防蛋白質(zhì)的降解.另外在磷酸化蛋白的研究過程中,磷 酸酶抑制劑也是必不可少的,本文總結(jié)了常用的蛋白酶抑制劑(

9、protease inhibitor)PMSF ,Leupeptin亮肽素,Aprotinin抑肽酶,Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(proteas 蛋白酶抑制劑分 子量溶解性磷酸酶抑制劑 工作濃度貯存液胰蛋白酶絲氨酸在與蛋白相關(guān)的檢測中,首先最關(guān)鍵的一步便是蛋白質(zhì)的提取.蛋白質(zhì)的提取過程中,我們要經(jīng)常加和 蛋白酶抑制齊ij (protease inhibitor)以預(yù)防蛋白質(zhì)的降解.另外在磷酸化蛋白的研究過程中, 磷酸酶抑制劑也是必不可少的,本文總結(jié)了常用的蛋白酶抑制劑(proteaseinhibitor)PMSF , Leupeptin 亮肽素,Aprotinin 抑肽酶,Pepstat

10、in 胃蛋白酶抑制劑(pr otease inhibitor) , EDTA-Na2等以及磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉,Na3VO4原磯酸鈉,B ETA-glycerophosphate甘油磷酸鈉,Na2P2O4焦磷酸鈉等.對這些蛋白酶抑制劑 (protease inhibitor)的溶解配制,貯存液與工作液濃度,保存都做了詳細的說明.蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)PMSF :特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(protease inhibitor),如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶和凝血酶,也 抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶(可逆的地面處理).溶解性：溶于異丙醇,乙醇,甲醇和丙二醇果>

11、10mg/ml.在水溶液中不穩(wěn)定.在 100%異丙醇,+25 C時穩(wěn)定至少9個月分子量：174.2使用：貯存濃度：200mM ,工作濃度：1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,纖溶酶,和組織蛋白酶B溶解性：高度溶于水(1mg/ml ).4 C 一周穩(wěn)定,分成小份冷凍在-20 C至少6個月分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4:475.6C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O:493.6使用：貯存濃度：1mg/ml ,工作濃度 0.5 ug/ml (1mM)Aprotinin 抑肽酶特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(pro

12、tease inhibitor),抑制纖維蛋白溶酶,激肽釋放酶,胰蛋白 酶,糜蛋白酶的高活性.不抑制凝血酶或因子X.溶解性：易溶于水(10mg/ml )或緩沖液(例如,tris , 0.1M , pH8.0 ).pH約7-8的溶液在4 C可保存1周,分裝保存在-20 C可至少保存6個月.預(yù)防反復(fù)凍融,pH>12.8的堿性環(huán)境 可使其滅活.分子量：6,512使用：貯存濃度：1mg/ml,工作濃度：0.06 -2.0 ug/ml(0.01 -0.3 uM)Pepstatin 胃蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)特性：抑制大冬氨酸(酸)蛋白酶如胃蛋白酶,腎素,組織蛋白酶D,凝

13、乳酶,許多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇約1mg/ml ;可溶于乙醇,過夜溶解可到達1 mg/ml ;在6當(dāng)量乙酸中溶解度為300ug/ml.4 C穩(wěn)定一周,分裝儲存于-20 C時可保存1個月分子量：685.9使用：貯存濃度：1mg/ml,使用濃度：0.7 g/ml(1 M)EDTA -Na2特性：金屬蛋白酶抑制劑 (protease inhibitor)溶解性：溶于水至0.5M,在pH8-9的條件下,4 C穩(wěn)定至少6個月分子量：372.24使用：工作濃度：0.2 -0.5 mg/ml(0.5 -1.3 mM),不需現(xiàn)用現(xiàn)配,在溶液 pH值調(diào)至8-9時 再參加.磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉溶解性

14、：溶于水分子量：41.99使用： 貯存液：5M工作濃度：10-20mMNa3VO4原磯酸鈉分子量：183.91溶解性：溶于水,我們購置過來的是原磯酸鈉.原磯酸鈉需要經(jīng)過處理以后才能成為激活的磯酸鈉,激活的磯酸鈉才具有抑制去磷酸化的作用.原磯酸鈉變成激活的磯酸鈉的過程是：100mM原磯酸鈉激活儲存液配制(1) .取0.183克的原磯酸鈉溶解于 10ml的雙蒸水中,加酸調(diào)節(jié)PH至10(顏色變黃)(2) .煮至無色(3) .室溫冷卻(4) .重調(diào)PH至10(5) 重復(fù)(1) (2) (3) (4)直至溶液保持無色,并且PH穩(wěn)定于10,分裝100ul/管,每10ml裂解液加一管.(終濃度為1mM),-20度保存.使用