血型鑒定和交叉配血中常見問題分析和處理包括：

1、血型鑒定和交叉配血中常見問題分析和處理一、血型相容性檢測二、ABO血型正反定型型不一致的原因分析及處理三、交叉配血中常見問題分析及處理四、意外抗體篩選的意義和檢測方法五、弱D檢測的的意義和檢測方法一、血型相容性檢測1、受血者和供血者AB0血型是否相容。2、受血者和供血者RhD血型是否相容。3、主次側(cè)交叉配血是否相容。4、受血者血清中是否有臨床有意義的意外抗體。二、ABO正反定型不符的原因分析和處理（一）原因1實驗者操作技術(shù)的錯誤：導(dǎo)致假陰性的有：未加入抗體或血清。未識別溶血。血清與紅細胞比例不當離心速度或時間不夠。使用失效或錯誤試劑。實驗結(jié)果記錄或解釋錯誤導(dǎo)致假陽性的有：離心速度過大或時間過長

2、、使用了受到細菌污染的試劑、試驗器皿不干凈、實驗結(jié)果記錄或解釋錯誤2、紅細胞標本問題：患者近期接受了大量ABO血型相容但不同型的紅細胞，如骨髓移植患者，或非O型人接受O型紅細胞 某些ABO基因變異的個體或ABO亞型紅細胞，一些白血病或其他惡性疾病患者的紅細胞ABO抗原太弱，應(yīng)用抗A、抗B試劑未能出現(xiàn)預(yù)期的凝集反應(yīng)     紅細胞獲得性或遺傳性的異常，如獲得性B抗原紅細胞或Tn/T多凝集紅細胞，人血清抗A、抗B試劑可能與這些異常的紅細胞反應(yīng)使用未洗滌的紅細胞標本，其表面黏附的血漿或血清中含針對抗A、抗B試劑中染色劑或其他成分的抗體，出現(xiàn)假陽性反應(yīng)

3、患者血清中高活性、高濃度冷自身抗體嚴重致敏（包被）自身紅細胞，以至自發(fā)地發(fā)生凝集，而不是抗體試劑的特異性免疫反應(yīng)所致紅細胞表面包被IgG類抗體3、血清標本的問題：小的纖維蛋白凝集的紅細胞凝塊被誤認為是血液凝集，如使用血漿標本或未完全去除纖維蛋白的血清標本時。             免疫抑制疾病患者血清中ABO抗體減少或消失。老年人ABO抗體減弱4-6月齡內(nèi)嬰兒血清中ABO抗體陰性或很弱，一般只測正定型血清中不正常濃度和比例的蛋白質(zhì)成分或高分子蛋白增多可引起非特異凝集，如緡錢

4、狀紅細胞的非特異凝集血清中含抗A、抗B以外的其他紅細胞抗體，如抗M、抗I等?；颊呓邮芰薃BO血型不同的骨髓移植患者血清中含有針對紅細胞保護劑的抗體大量C 1分子由于異常高效價的補體結(jié)合抗體抗A、抗B作用，結(jié)合到紅細胞膜上，遮蔽了A、B抗原位點，不發(fā)生凝集（二）、分析和處理基本程序：1.重新采集標本，以避免采集、標記、污染等錯誤2.查詢患者既往病史、輸血史、用藥史、骨髓移植史3.徹底洗滌標本或試劑紅細胞4.應(yīng)用抗AB、抗A1、或抗H檢測紅細胞5.分析抗篩結(jié)果，確定結(jié)果是否受同種異型或自身冷抗體干擾6.室溫孵育30min后，離心觀察結(jié)果，以檢測弱的抗原抗體反應(yīng)7. 做自身紅細胞做對照，以確定自身抗

5、體的干擾ABO正反定型型不符的分類：1.抗原表達減弱所致的ABO正反定型型不符2.抗-A、抗-B血清的意外反應(yīng)所致的ABO正反定型型不符3.意外的血清學(xué)反應(yīng)所致的ABO正反定型型不符1.抗原表達減弱所致的ABO正反定型型不符:血型抗原表達減弱的常見原因:ABO亞型紅細胞白血病或其他惡性疾病患者的紅細胞ABO抗原太弱，應(yīng)用抗A、抗B試劑未能出現(xiàn)預(yù)期的凝集反應(yīng)新生兒抗原表達減弱所致ABO正反定型型不符的處理:將抗A、抗B和抗A，B試劑與洗滌過的紅細胞在室溫或4孵育30min，以增強抗原、抗體的結(jié)合用木瓜酶、無花果酶和菠蘿蛋白酶處理紅細胞，以增強抗原、抗體的結(jié)合應(yīng)用抗AB、抗A1、或抗H檢測紅細胞用

6、人血清抗A、抗B進行吸收放散試驗，檢測弱A、B抗原，但不是所有單克隆抗體試劑都適宜做吸收放散試驗，單克隆抗A、抗B必須經(jīng)過系統(tǒng)驗證，且同時要做O型血吸收放散試驗作對照檢測唾液中A、B和H血型抗原物質(zhì)2.抗-A、抗-B血清的意外反應(yīng)所致的ABO正反定型型不符引起抗-A、抗-B血清意外反應(yīng)的因素：獲得性B紅細胞:獲得性B紅細胞(特征)常出現(xiàn)在有腸道細菌進入血循環(huán)的疾病，也可發(fā)生在正常人通常只有A 型人能出現(xiàn)獲得性B抗原常伴有T和T n多凝集紅細胞出現(xiàn)(細菌感染時)自身抗B不與自身獲得性B抗原反應(yīng)(無自凝現(xiàn)象)獲得性B紅細胞(鑒定)調(diào)整人血清抗B試劑pH至6.0時，即不與獲得性B細胞反應(yīng)分泌型者唾液

7、中無B血型物質(zhì)乙酸酐處理能明顯減弱其反應(yīng)，但正常B細胞不受影響 獲得性類A抗原 造血干細胞的體細胞突變可造成部分紅細胞持續(xù)性Tn抗原激活，類同A抗原 Tn和T一樣屬隱蔽行院抗原,激活暴露后與所有血型的血清和人血清血型抗體出現(xiàn)凝集反應(yīng)(全凝后多凝)蛋白酶能降解Tn分子，消除與抗A凝集反應(yīng)性，而正常A抗原不受影響,也可通過AB血清證實  混合視野凝集非O型人近期輸用O型血骨髓移植后A3細胞與抗A呈典型的混合視野凝集現(xiàn)象單合子的鑲嵌紅細胞后雙合子的交移體紅細胞抗體包被紅細胞患HDN嬰兒，存在自身免疫或同種異體免疫的成人，其紅細胞嚴重包被IgG抗體分子與含一定蛋白質(zhì)濃度的

8、試劑（抗D、抗A、抗B）產(chǎn)生凝集45 放散后，抗體解離，即可準確定型3.意外的血清學(xué)反應(yīng)所致的ABO正反定型型不符引起意外血清學(xué)反應(yīng)的因素抗體太弱或消失非正常高濃度的抗A、抗B可引起前帶現(xiàn)象A2、A2B或其他ABO亞型人血清中可能有抗A1患者血漿蛋白濃度過高或靜脈輸用了大量大分子藥物等原因，可發(fā)生類似凝集現(xiàn)象，如緡錢狀凝集冷自身抗體，如抗I、抗IH、抗IA等自身免疫性溫型抗體同種抗體/意外抗體意外的血清學(xué)反應(yīng)所致的ABO正反定型型不符及其處理抗體太弱或消失，如新生兒、老年人、免疫抑制患者，應(yīng)注意患者的年齡和診斷非正常高濃度的抗A、抗B可引起前帶現(xiàn)象，導(dǎo)致假陰性,將血清稀釋或用EDTA（2.5）

9、處理可消除A2、A2B或其他ABO亞型人血清中可能有抗A1, 抗A1只凝集A1型紅細胞而不凝集A2、O型紅細胞患者血漿蛋白濃度過高或靜脈輸用了大量大分子藥物等原因，可發(fā)生類似凝集現(xiàn)象，如緡錢狀凝集，將血清用生理鹽水稀釋3倍或用鹽水替換技術(shù)可消除冷自身抗體，如抗I、抗IH、抗IA等(自凝)，a.所有試劑及細胞37孵育， 37下判讀結(jié)果b.將冷自身抗體吸收c.將血清用0.01mol/L DTT處理和再定型自身免疫性溫型抗體自身免疫性溶血性貧血病人血清中可有溫型自身抗體37反應(yīng)比室溫強血清能凝集自身和其他各型紅細胞若紅細胞上吸附有這種自身抗體，在自身或他人血清中均可出現(xiàn)凝集自身免疫性溫型抗體正定型被

10、誤認為AB型，反定型被誤認為O型：用遞增溫度（22，37，45）洗滌紅細胞后再做血型鑒定同種抗體/意外抗體：室溫下抗-P、抗-M、抗E等，可能出現(xiàn)意外反應(yīng)，干擾ABO血型鑒定，抗體特異性抗體鑒定，選擇抗原陰性的紅細胞做反定型應(yīng)用舉例多發(fā)性骨髓瘤致ABO血型鑒定困難1例多發(fā)性骨髓瘤（MM）：一種惡性漿細胞疾病，大量分泌異常的單克隆免疫球蛋白(M 蛋白) ,影響紅細胞表面負電荷狀態(tài),血清蛋白濃度和比例異常, A/G比例失調(diào),紅細胞呈緡錢狀非特異性聚集,給血型鑒定帶來一定的困難。病情簡介：患者，女，38歲，因骨痛、貧血 2個月入院；Hb 65 g/L ,WBC 6.4 ×109/L,PLT

11、 90×109 /L, 尿本周蛋白陽性,BUN、Cr 均異常；骨髓象示:漿細胞37% 。診斷：多發(fā)性骨髓瘤。有既往輸血史。血型血清學(xué)檢查：正定型： A型，RhD（），反定型： O型，  直抗：（），  抗篩：（）處理：1.吸收試驗：6次洗滌后的患者RBC等量的抗-A、抗-血清（1：128）， 4孵育1h    離心，取上清，測吸收液的抗A、抗B效價    抗A降低明顯，抗B 1：1282.放散試驗：吸收后的患者RBC用NS洗滌6次（徹底洗滌）等量的NS56孵育1015min    放散液與5標準 A、B型

12、RBC反應(yīng)    Ac:+， Bc: -   吸收放散試驗證明：患者RBC上有A抗原，無B抗原，為A型3.將患者血清用O型標準RBC吸收：等份血清等份O細胞 ，室溫 振蕩1530min    離心，取上清，轉(zhuǎn)移到另一等份O細胞中    吸收后的血清與標準A、B紅細胞反應(yīng)    Ac: -，Bc: +（患者血清中有抗-B，無抗-A）患者血型最終確定為A型 RhD（），輸注2U 經(jīng)過篩選的A型懸浮RBC后，未見任何不良反應(yīng)三、交叉配血試驗中常見問題分析和處理交叉配血原則：R 除非極為緊急情況，輸血前

13、患者與獻血者必須進行交叉配血R 受血者血清中無即刻或遲發(fā)性地凝集和(或)溶解所輸入的紅細胞的抗體R 獻血者血清中無即刻或遲發(fā)性地凝集和(或)溶解受血者紅細胞的抗體交叉配血方法：A:鹽水介質(zhì)交叉配血：只能檢出IgM類抗體（主為ABO血型系統(tǒng)抗體），無法檢出IgG，具有很大的危險性，只能在受血者血清中不含臨床有意義抗體的情況下進行。 B:檢測不完全抗體的交叉配血：臨床最常見的遲發(fā)型輸血反應(yīng)ABO系統(tǒng)以外的其他血型(如Rh）的IgG類抗體導(dǎo)致的血型不相容有輸血史、妊娠史或血清中有意外抗體的患者必須進行不完全抗體的交叉配血試驗包括抗人球蛋白法、蛋白酶法、促凝劑法等C:抗人球蛋白法: 鑒定不完

14、全抗體最可靠的方法，傳統(tǒng)的抗人球法不能成為臨床輸血的常規(guī)檢驗。1986年, Lapierre發(fā)明的微柱凝膠抗球蛋白試驗準確、可靠、不需洗滌，可方便的應(yīng)用于抗體篩檢和交叉配血試驗交叉配血不相容的原因及解決辦法A:血型鑒定錯誤：出現(xiàn)問題最多的是受血者、獻血者紅細胞ABO血型不相容，其次才是技術(shù)錯誤。復(fù)查血型              （責任錯誤）B:患者存在冷反應(yīng)自身抗體：采用自身對照和37 水浴以及遞增鹽水溫度洗滌患者紅細胞等方法排除非特異性凝集的干擾C:患者存在溫反

15、應(yīng)自身抗體：采用吸收放散試驗后取患者的紅細胞與血清和同型的洗滌紅細胞進行交叉配血。D:血清蛋白紊亂及白球蛋白比例倒置引起的假凝集：如多發(fā)性骨髓瘤、肺癌、肝癌患者等。多表現(xiàn)為主側(cè)凝集E:ABO 以外的其它血型系統(tǒng)引起的交叉配血不合：常發(fā)生于有輸血史、妊娠史的患者，產(chǎn)生主側(cè)凝集。如抗D、抗E 、抗C 、抗c、抗I、抗e和抗Fyb等 ，用經(jīng)篩選的不含相應(yīng)抗原的血液進行交叉配血即可消除。F:獻血者紅細胞DAT陽性：大約萬分之一健康人包被了IgG或補體的紅細胞，不應(yīng)輸用此類細胞。G: 獻血者紅細胞是多凝集紅細胞：正常人血清中可含有非紅細胞刺激而產(chǎn)生的自然發(fā)生的抗體，如抗T、抗Tn等。應(yīng)篩選低水平抗T、抗

16、Tn的血液四、意外抗體篩選的意義和方法意外抗體:是指除ABO血型系統(tǒng)抗體以外的其他抗體，如抗D、抗E等。主要經(jīng)輸血或妊娠等免疫刺激產(chǎn)生，人群檢出率為0.32.0，是引起遲發(fā)性免疫反應(yīng)的主要原因。臨床有意義抗體：引起新生兒溶血病、溶血性輸血反應(yīng)，或者使輸入的紅細胞存活期減少的、在37反應(yīng)的同種異型抗體。（IAT陽性?。┡R床無意義抗體： 室溫或低溫反應(yīng)的抗體，但抗-Vel,抗-P等，在體內(nèi)引起明顯的紅細胞破壞。篩選方法要求:1.選擇敏感的技術(shù)檢測出受血者血清中非常低水平的臨床有意義抗體。高度注意！即使受血者血清中抗體對輸入的不相容紅細胞抗原呈弱反應(yīng)，但也能夠發(fā)生快速的強的回憶反應(yīng)，增加抗體產(chǎn)生，破

17、壞紅細胞2. 每一試劑瓶中只能有一人份的試劑紅細胞，不可將多人份紅細胞混合，以避免紅細胞混合后對弱抗原紅細胞的稀釋。FDA對試劑紅細胞抗原表達的要求：D,C,E,c,e,M,N,S,s,PI,Le, Lea, Leb,K,k,Fya,Fyb,Jka, Jkb.篩選方法實驗方法:1.鹽水直接凝集試驗： 是最簡單的血型血清學(xué)方法，緊急情況下可在室溫下立即離心?？蓹z出室溫或低于室溫反應(yīng)的臨床意義不大的抗體如抗M、抗N、抗P、抗Lea等2.球蛋白試驗： 可檢出絕大部分臨床有意義的不完全抗體，抗球蛋白試劑要有多特異性抗球蛋白抗體，其中含有抗IgG和抗C3d。含抗補體的球蛋白也能夠檢出結(jié)合補體的無臨床意義

18、的冷抗體，如抗I、抗HI等3.其他試驗:蛋白酶試驗、聚乙二醇試驗、LISS和微柱凝膠試驗等各種試驗都有其本身的特點，適用不同范圍，實驗室應(yīng)根據(jù)自己的條件，建立實驗室常規(guī)試驗程序和規(guī)程抗體特異性鑒定:血清標本，EDTA抗凝（避免補體體外致敏紅細胞）血漿標本病史：輸血、妊娠、用藥試劑：譜細胞、增強介質(zhì)，抗人球蛋白試劑自身對照對譜細胞的要求A:不少于8人份的O型紅細胞B:血型系統(tǒng)包括： Rh,Kell,Duffy,Kidd,P,Lewis,MNS自身對照的意義:陰性：血清只與試劑紅細胞反應(yīng)，只有同種抗體存在陽性：有自身抗體存在，或與同種抗體并存自身吸收后鑒定同種抗體！ 抗體篩選的意義A:發(fā)

19、現(xiàn)臨床有意義的抗體B:減少溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生C:有利于免疫溶血性疾病的診斷D:有利于提前選擇和準備相合的血液E:確保臨床輸血安全、及時、有效1抗體篩選陰性，鹽水介質(zhì)交叉配血不相容A:供受血者ABO血型不相容B:受血者A2或A2B亞型，血清中抗A1與供血者A1或AB型紅細胞凝集C:存在室溫反應(yīng)的同種抗體，如抗-M等D:獻血者是多凝紅細胞，隱蔽抗原T、Tn等暴露2抗體篩選陰性，檢測不完全抗體的交叉配血不相容獻血者是紅細胞DAT陽性 萬分之一健康人紅細胞表面包被IgG或補體，不應(yīng)該輸此類紅細胞抗體與低頻抗原反應(yīng) 人群1%血清中含有針對低頻抗原的抗體篩選細胞一般缺少低頻抗原3抗體篩選陽性，交叉配血相

20、容A:自身抗-H， O型紅細胞含有大量H抗原，而A1、A1B含量很低。室溫反應(yīng)，37無反應(yīng)，無臨床意義B:獻血者紅細胞正好不含對應(yīng)的抗原C:抗-Lebh 只與O型Le(a-b+）反應(yīng)，不與A1、A1B Le(a-b+）反應(yīng)，室溫反應(yīng)，37無反應(yīng)，臨床意義不大4抗體篩選陽性，交叉配血不相容、同種抗體存在，自身對照陰性 選擇對應(yīng)抗原陰性的血做交叉。如抗體是抗-M、抗N、抗-P1、抗-Lea等就無須確認對應(yīng)抗原缺失，但需37交叉配合、同種抗體存在，自身對照陽性近期（2-3月）接受過輸血的患者體內(nèi)的同種抗體可引起自身對照陽性循環(huán)中的自身抗體可引起自身對照陽性區(qū)別兩者很重要（很難），因選擇紅細胞程序不同可用對應(yīng)抗原陽性的細胞做吸收放散實驗來證實同種抗體存在患者血清中的同種抗體可與輸入的紅細胞起反應(yīng)如是有意義的抗體，應(yīng)選擇抗原陰性紅細胞輸血37度抗人球交叉配血相合是必須的、冷反應(yīng)自身抗體強反應(yīng)冷抗體（疾?。┮鹧丸b定和交叉配血困難，臨床意義