ICHQB分析方法驗(yàn)證

1、Q2B分析方法驗(yàn)證：方法學(xué)簡(jiǎn)介ICH指南“關(guān)于分析方法驗(yàn)證的術(shù)語(yǔ)闡述了分析方法驗(yàn)證中應(yīng)考慮的工程,本文件是對(duì)Q2A的補(bǔ)充,其目的是對(duì)每一種分析方法的各種驗(yàn)證工程提供指導(dǎo)和建議.在某些情況 下如專(zhuān)屬性,為了保證原料藥和制劑的質(zhì)量,應(yīng)對(duì)一些綜合起來(lái)的分析方法的總體水平 進(jìn)行研究.另外,文件對(duì)在新藥申請(qǐng)中必須要遞交的資料作了指導(dǎo).所有驗(yàn)證中收集的相關(guān)數(shù)據(jù)和驗(yàn)證工程的計(jì)算公式都應(yīng)遞交并進(jìn)行適當(dāng)?shù)挠懻?本指南未提到的方法,也可應(yīng)用和采納.申報(bào)者的責(zé)任應(yīng)是選擇最適合他們產(chǎn)品的驗(yàn)證方法和方案.但要切記,分析方法驗(yàn)證的主要目的是證實(shí)其適合于預(yù)期目的.對(duì)于生物技術(shù)產(chǎn)品和生物制品,由于它們的復(fù)雜特性,在某些情況下

2、,其分析方法的驗(yàn)證可能與本文中 提到的方法不同.在整個(gè)方法學(xué)驗(yàn)證研究過(guò)程中,必須使用已完全鑒定并標(biāo)示純度的參考物質(zhì),其純度 要求取決于預(yù)期用途.與Q2A 一樣,為清楚起見(jiàn),本文在各獨(dú)立的章節(jié)中考慮了不同的驗(yàn)證工程,這些章節(jié) 的排列反映了建立和評(píng)估一種分析方法的過(guò)程.事實(shí)上在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí),一些適當(dāng)?shù)尿?yàn)證工程通常可以同時(shí)考慮,以對(duì)分析方法的 水平提供合理、全面的了解,如專(zhuān)屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確度和精密度.1.專(zhuān)屬性在鑒別檢查、雜質(zhì)和含量測(cè)定的方法學(xué)驗(yàn)證中應(yīng)進(jìn)行專(zhuān)屬性研究,證實(shí)專(zhuān)屬性的方法取決于分析方法的預(yù)期目的.一般一種分析方法不太可能對(duì)某一特定的被分析物具有專(zhuān)屬性完全鑒定,在此情況下,建議采用

3、兩種或兩種以上的分析方法以到達(dá)能鑒定的水平.1 . 1鑒別適宜的鑒別試驗(yàn)應(yīng)能區(qū)別出可能存在結(jié)構(gòu)相似的化合物.可以通過(guò)與參考物質(zhì)比 較,從含有被分析物的樣品中得到的正結(jié)果和不含被分析物的樣品中得到的負(fù)結(jié)果來(lái)確定. 此外,鑒別試驗(yàn)也可以取與被測(cè)物結(jié)構(gòu)相似或相關(guān)的物質(zhì)來(lái)試驗(yàn)而得不到正反響來(lái)證實(shí).在考慮可能會(huì)造成干擾的前提下,應(yīng)根據(jù)合理科學(xué)的判斷來(lái)選擇可能存在的干擾物.2 . 2含量和雜質(zhì)測(cè)定在色譜方法中,應(yīng)用典型的色譜圖來(lái)證實(shí)專(zhuān)屬性,并在圖上恰當(dāng)?shù)貥?biāo)出每一種成分, 其他別離技術(shù)也應(yīng)如此.在色譜方法中,應(yīng)在一定程度上考察關(guān)鍵性的別離.對(duì)關(guān)鍵性別離,可用兩個(gè)洗脫程 度最接近的化合物的別離度來(lái)證實(shí)具有專(zhuān)屬

4、性.當(dāng)用非專(zhuān)屬性方法測(cè)定含量,可用其他輔助性的分析方法來(lái)證實(shí)整個(gè)方法的專(zhuān)屬性,例如：用滴定法來(lái)測(cè)定放行原料藥的含量,可結(jié)合用適宜的雜質(zhì)檢查方法.下述方法均適用于含量和雜質(zhì)測(cè)定：3 . 2. 1可以得到雜質(zhì)的情況對(duì)含量測(cè)定來(lái)說(shuō),專(zhuān)屬性應(yīng)包括提供被分析物在雜質(zhì)和或輔料存在時(shí)能被區(qū)分的 證實(shí),實(shí)際操作中可以在純物質(zhì) 原料或制劑中參加一定量的雜質(zhì)或輔料,與未加雜質(zhì)或 輔料的樣品測(cè)定結(jié)果比擬,以證實(shí)其含量測(cè)定結(jié)果不受這些物質(zhì)的影響.對(duì)雜質(zhì)檢查來(lái)說(shuō),通過(guò)參加含有一定量雜質(zhì)的原料藥或制劑,證實(shí)各雜質(zhì)之間能別離, 并也能與樣品矩陣中其他組分別離.如果雜質(zhì)或降解物的對(duì)照品不能得到,專(zhuān)屬性可以通過(guò)將含一定量的雜質(zhì)

5、或降解物的樣品測(cè)定結(jié)果與另一種成熟的方法測(cè)定結(jié)果比擬,如藥典方法或經(jīng)驗(yàn)證的其他方法獨(dú)立的方法進(jìn)行比擬來(lái)證實(shí).必要時(shí),應(yīng)包括放置在強(qiáng)制降解試驗(yàn)條件下,即光、熱、濕、酸堿 水解及氧化條件下的樣品的測(cè)定.- 對(duì)于含量測(cè)定,需要比擬兩種方法的結(jié)果.- 對(duì)于雜質(zhì)檢查,要比擬雜質(zhì)檔案.峰純度檢驗(yàn)是很有用的,它顯示被測(cè)物色譜峰是單個(gè)還是多個(gè)成分如二極管陣列、 質(zhì)譜.4 .線性線性是在分析方法的范圍內(nèi)見(jiàn)章節(jié)3對(duì)方法進(jìn)行評(píng)價(jià).可用所建議的分析方法,直接對(duì)原料藥用標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)藏溶液稀釋和或?qū)Ψ謩e稱(chēng)取制劑組分的混合物進(jìn)行測(cè)定,以研 究其線性.后者應(yīng)在方法的范圍內(nèi)進(jìn)行研究.線性關(guān)系應(yīng)以信號(hào)對(duì)被分析物的濃度或含量做圖,根據(jù)圖

6、形是否呈線性進(jìn)行評(píng)價(jià).如果有線性關(guān)系,可用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)方法評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果,如通過(guò)最小二乘法進(jìn)行線性回歸計(jì)算.在某些情況下為使分析含量和樣品濃度呈線性關(guān)系,在回歸分析前應(yīng)對(duì)測(cè)試數(shù)據(jù)進(jìn)行數(shù)學(xué)轉(zhuǎn) 換.由線性回歸評(píng)估所測(cè)得的數(shù)據(jù)本身又有助于精確地評(píng)價(jià)線性的程度.遞交資料中應(yīng)含相關(guān)系數(shù)、y軸上的截距、回歸曲線的斜率、剩余方差,還應(yīng)包括數(shù)據(jù)圖表.另外,分析實(shí)際數(shù)據(jù)點(diǎn)與回歸曲線的偏差也有助于對(duì)線性作評(píng)價(jià).一些分析方法,如免疫測(cè)定法,在任何轉(zhuǎn)換后,均不能證實(shí)呈線性,在這種情況下,分 析的響應(yīng)值應(yīng)用樣品中被分析物的濃度數(shù)量的適當(dāng)函數(shù)來(lái)表示.為建立線性,建議至少用 5個(gè)濃度.假設(shè)用其他方法那么應(yīng)證實(shí)其合理性.5 .范

7、圍特定的范圍一般是從線性研究中得到的, 它依賴于分析方法的應(yīng)用目的. 確定范圍的方 法是：樣品中含有被分析物的量在分析方法規(guī)定的范圍內(nèi)或在范圍末端,該分析方法均能獲得良好的線性、精密度和準(zhǔn)確度.以下是應(yīng)考慮的最小規(guī)定范圍：- 對(duì)原料藥或成品藥制劑的含量測(cè)定；一般應(yīng)在測(cè)試濃度的80%120%;- 對(duì)含量均勻度檢查：應(yīng)至少在測(cè)試濃度的70%130%之內(nèi),超出此范圍,應(yīng)有正當(dāng)理由,主要是根據(jù)劑型的特點(diǎn)如定量吸入劑；- 對(duì)于溶出度試驗(yàn),應(yīng)為規(guī)定范圍的土20%,例如：如果是控釋制劑,規(guī)定 1小時(shí)后到達(dá)20%, 24小時(shí)到達(dá)90%,它的驗(yàn)證范圍應(yīng)為標(biāo)示量的 0! 110%;- 對(duì)于雜質(zhì)測(cè)定,應(yīng)為雜質(zhì)的報(bào)告

8、水平至標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的120%.對(duì)有異常成效的、有毒的或有意外藥理作用的雜質(zhì),其檢測(cè)限度和定量限度應(yīng)與該雜質(zhì)必須被限制的水平相當(dāng).注意：在研制階段進(jìn)行雜質(zhì)檢查方法驗(yàn)證時(shí),有必要根據(jù)建議可能 的限度來(lái)考慮范圍；- 如果用一個(gè)試驗(yàn)同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定和純度檢查,且僅使用100%的標(biāo)準(zhǔn)品,線性范圍應(yīng)覆蓋雜質(zhì)的報(bào)告水平 見(jiàn)相應(yīng)ICH指南"新原料藥中的雜質(zhì) 和“新制劑中的 雜質(zhì)中“批雜質(zhì)含量的報(bào)告章節(jié)至含量指標(biāo)的120%.6 .準(zhǔn)確度應(yīng)在分析方法規(guī)定的范圍內(nèi)建立準(zhǔn)確度.4. 1含量4.1.1 原料藥以下幾種方法可用于測(cè)定準(zhǔn)確度：a用該分析方法去測(cè)定純度的被分析物如參照物質(zhì)；b將建議采用的分析方法的結(jié)果與

9、另一種已完全驗(yàn)證的分析方法的結(jié)果比擬,后者的準(zhǔn)確度是規(guī)定的和或是已定義的獨(dú)立的方法,見(jiàn)節(jié) ；c準(zhǔn)確度可以在精密度、線性和專(zhuān)屬性建立后推論而得.4.1.2 制劑以下幾種方法可用于測(cè)定準(zhǔn)確度：a） 用該分析方法去測(cè)定按處方量制成的混合物,其中已參加了量的待測(cè)定的原料藥；b） 在不能獲得制劑所有組分的情況下,可以接受的方法是可以將量的被分析物參加到制劑中,或者將測(cè)得結(jié)果與另一種已完全驗(yàn)證的分析方法的結(jié)果比擬,后者的準(zhǔn)確度是的獨(dú)立的方法,見(jiàn)節(jié) ；c） 準(zhǔn)確度可以在精密度、線性和專(zhuān)屬性建立后推論而得.4. 2雜質(zhì)定量準(zhǔn)確度應(yīng)使用在樣品中原料藥 /制齊J參加量雜質(zhì)的方式來(lái)評(píng)價(jià).在不能獲得含有某些雜質(zhì)和或降

10、解產(chǎn)物的樣品的情況下,可以考慮與其它獨(dú)立的方法見(jiàn)節(jié)測(cè)得的結(jié)果比擬.可以使用原料藥的響應(yīng)因子.應(yīng)明確如何測(cè)定單個(gè)或總的雜質(zhì),如：相對(duì)于主要被分析物所占的重量百分比或面積百分比.5. 3數(shù)據(jù)要求準(zhǔn)確度的評(píng)價(jià)需要對(duì)至少能涵蓋所規(guī)定的線性范圍的3種濃度,至少測(cè)定 9次如按完整分析步驟對(duì) 3種濃度分別測(cè)定3次.準(zhǔn)確度可通過(guò)在樣品中參加量的被分析物測(cè)得的百分回收率或平均值與真實(shí)值的 差異及其置信區(qū)間來(lái)報(bào)告.5.精密度含量測(cè)定和雜質(zhì)定量測(cè)定的驗(yàn)證均包括對(duì)精密度的研究.5. 1重復(fù)性重復(fù)性應(yīng)使用以下方法之一評(píng)定：a在方法規(guī)定的線性范圍內(nèi)至少測(cè)定9次如3種濃度/每種濃度重復(fù)測(cè)定 3次；b在100%的測(cè)試濃度,至

11、少測(cè)定 6次.5. 2中間精密度中間精密度的考察程度應(yīng)根據(jù)方法使用的環(huán)境而定,申請(qǐng)者應(yīng)確定隨機(jī)事件對(duì)分析方法精密度的影響.需研究的典型變化包括：日期、分析人員、儀器等,沒(méi)有必要逐個(gè)考察每個(gè)因素.鼓勵(lì)使用試驗(yàn)設(shè)計(jì)矩陣法.5. 3重現(xiàn)性重現(xiàn)性通過(guò)試驗(yàn)室之間的試驗(yàn)來(lái)評(píng)價(jià),如果方法需要標(biāo)準(zhǔn)化,如收載到藥典中的方法,那么應(yīng)考慮重現(xiàn)性.這些資料不是上市申請(qǐng)文檔的一局部.6. 4數(shù)據(jù)要求在每一種精密度研究中都必須報(bào)告標(biāo)準(zhǔn)偏差、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差變異系數(shù)和置信區(qū)間.7. 檢測(cè)限根據(jù)分析方法是否采用非儀器分析還是儀器分析,可用幾種方法來(lái)確定檢測(cè)限,除了下面所列的方法外其他的方法也可能被接受.6. 1根據(jù)信噪比直觀評(píng)價(jià)

12、可以用于非儀器分析方法,也可用于儀器分析方法.檢測(cè)限的測(cè)定是通過(guò)對(duì)一系列濃度分析物的樣品進(jìn)行分析,并以能準(zhǔn)確測(cè)得被分 析物的最小水平來(lái)建立.7. 2根據(jù)信噪比該方法僅適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法.當(dāng)信噪比在3: 1或2: 1時(shí)的檢測(cè)限通常是可接受的.3.3-s-信噪比的測(cè)定是通過(guò)比擬含低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測(cè)試信號(hào),確定 被分析物可被可靠地檢測(cè)的最小濃度, 6. 3根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)差和斜率檢測(cè)PMDL表示為：DL式中：T：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差S:校正曲線的斜率斜率S可從被分析物的校正曲線來(lái)估算,T的值可由多種途徑估算.如：8. 3. 1根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差通過(guò)幾份空白樣品的分析,并計(jì)算其響

13、應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差,以測(cè)定出分析背景響應(yīng)值的 大小.9. 3. 2根據(jù)校正曲線通過(guò)對(duì)含有DL范圍內(nèi)被分析物樣品的分析來(lái)研究其標(biāo)準(zhǔn)曲線,回歸線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或回歸線的y軸截距標(biāo)準(zhǔn)差都可作為標(biāo)準(zhǔn)差.10. 4數(shù)據(jù)要求必須同時(shí)提供檢測(cè)限和測(cè)定檢測(cè)限的方法.如果DL是根據(jù)直觀評(píng)估或信噪比得來(lái)的,提供相關(guān)證實(shí)的色譜圖是可接受的.如通過(guò)計(jì)算或外推法得到檢測(cè)限的估算值,可對(duì)一系列接近或等于檢測(cè)限樣品的逐個(gè)分析來(lái)驗(yàn)證這一估算值.7.定量限根據(jù)檢測(cè)方法是用非儀器分析還是儀器分析,可用幾種方法來(lái)測(cè)定定量限,除了下面列出的方法外,其他方法也是可接受的.7. 1根據(jù)直觀評(píng)價(jià)直觀評(píng)價(jià)既可用于非儀器的分析方法,也可用于儀器分

14、析方法.定量限的測(cè)定一般通過(guò)對(duì)一系列含有濃度被分析物的樣品進(jìn)行分析,確定的能被 定量測(cè)定的最小量,其測(cè)定結(jié)果應(yīng)有可接受的準(zhǔn)確度和精密度.7. 2根據(jù)信噪比該方法僅適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法.信噪比的測(cè)定是通過(guò)比擬含有低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測(cè)定信號(hào),來(lái) 確定被測(cè)物能夠準(zhǔn)確定量的最小濃度.典型信噪比為10: 1.7. 3根據(jù)響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差和斜率定量限度 QL表示為：QL103S式中：T：響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差S：校正曲線的斜率斜率S可從被分析物的校正曲線來(lái)估算,T值的估算可由多種途徑得到.如：7. 3. 1根據(jù)空白的標(biāo)準(zhǔn)偏差通過(guò)幾份空白樣品的分析,并計(jì)算其響應(yīng)值的標(biāo)準(zhǔn)偏差,以測(cè)定出分析背景

15、響應(yīng)值的 大小.校正曲線的研究應(yīng)通過(guò)對(duì)幾份含有QL水平被分析物的樣品的測(cè)試來(lái)進(jìn)行.回歸線的剩余標(biāo)準(zhǔn)偏差或回收線的 y軸截距標(biāo)準(zhǔn)偏差都可作為標(biāo)準(zhǔn)偏差.11. 4數(shù)據(jù)要求應(yīng)提供定量限及其測(cè)定方法.可通過(guò)分析一系列接近或等于定量限的樣品來(lái)驗(yàn)證這一限度.12. 用性在方法的開(kāi)發(fā)階段應(yīng)對(duì)耐用性進(jìn)行評(píng)估,它取決于所研究的分析方法的類(lèi)型,說(shuō)明在方法參數(shù)范圍內(nèi)成心的變化下分析方法的可靠性.如果測(cè)量結(jié)果說(shuō)明對(duì)分析條件的變化是敏感的,那么該分析條件就應(yīng)適當(dāng)限制或在方法中預(yù)先聲明.耐用性評(píng)估的結(jié)果建立了一系列的系統(tǒng)適用性參數(shù)如別離度試驗(yàn),以保證在任何時(shí)候使用該分析方法都是有效的.典型變化的例子：- 分析溶液的穩(wěn)定性,- 提取時(shí)間.在液相色譜條件下的