SDS-PAGE凝膠配制試劑盒

1、北京雷根生物技術有限公司SDS-PAGE凝膠配制試劑盒產品簡介：聚丙烯酰胺凝膠電泳（Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，簡稱SDS-PAGE），其作用原理在于聚丙烯酰胺凝膠為網狀結構，具有分子篩效應。它有兩種形式：非變性聚丙烯酰胺凝膠及SDS-聚丙烯酰胺凝膠（SDS-PAGE）；非變性聚丙烯酰胺凝膠，在電泳的過程中，蛋白質能夠保持完整狀態(tài)，并依據蛋白質的分子量大小、蛋白質的形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分開,主要用于分離蛋白質和寡核苷酸。Leagene SDS-PAGE凝膠配制試劑盒不僅可用于配制SDS-PAG

2、E凝膠，也可用于配制非變性(native)PAGE凝膠，30T試劑盒一般可以配制3040塊，60T試劑盒一般可以配制6080塊，具體配制的量應根據器具大小決定。產品組成：主要成分：主要由30% Acr-Bis(29:1)、1.5M Tris-HCl(pH8.8)、10% SDS、AP、TEMED、1M Tris-HCl(pH6.8)組成。自備材料：1、 制膠器具 2、 蒸餾水 3、 微量移液器操作步驟（僅供參考）：1、 根據目的蛋白的分子量大小選擇合適的凝膠濃度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE北京雷根生物技術有限公司的分離膠(下層膠)：不同濃度的SDS-PAGE分離膠的最佳分離范圍：SD

3、S-PAGE分離膠濃度6%膠 8%膠 10%膠 12%膠 15%膠成分6%膠 蒸餾水30%Acr-Bis(29:1) 1.5M Tris,pH8.8 10%SDS 10%過硫酸銨 TEMED5 2.6 1.0 1.3 0.05 0.05最佳分離范圍 50-150kD 30-90kD 20-80kD 12-60kD 10-40kD配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積（ml）10 5.3 2.0 2.5 0.1 0.115 7.9 3.0 3.8 0.15 0.1520 10.6 4.0 5.0 0.2 0.2 0.01625 13.2 5.0 6.3 0.25 0.25 0.023

4、0 15.9 6.0 7.5 0.3 0.3 0.02440 21.2 8 10 0.4 0.4 0.03250 26.5 10.0 12.5 0.5 0.5 0.040.004 0.008 0.012成分8%膠 蒸餾水30%Acr-Bis(29:1) 1.5M Tris,pH8.8 10%SDS 10%過硫酸銨 TEMED5 2.3 1.3 1.3 0.05 0.05配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積（ml）10 4.6 2.7 2.5 0.1 0.115 6.9 4.0 3.8 0.15 0.1520 9.3 5.3 5.0 0.2 0.2 0.01225 11.5 6.7

5、 6.3 0.25 0.25 0.01530 13.9 8.0 7.5 0.3 0.3 0.01840 18.5 10.7 10 0.4 0.4 0.02450 23.2 13.3 12.5 0.5 0.5 0.030.003 0.006 0.009成分10%膠 蒸餾水30%Acr-Bis(29:1) 1.5M Tris,pH8.8 10%SDS 10%過硫酸銨 TEMED5 1.9 1.7 1.3 0.05 0.05配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積（ml）10 4.0 3.3 2.5 0.1 0.115 5.9 5.0 3.8 0.15 0.1520 7.9 6.7 5.0

6、 0.2 0.2 0.00825 9.9 8.3 6.3 0.25 0.25 0.0130 11.9 10 7.5 0.3 0.3 0.01240 15.9 13.3 10 0.4 0.4 0.01650 19.8 16.7 12.5 0.5 0.5 0.020.002 0.004 0.006成分15%膠 蒸餾水30%Acr-Bis(29:1) 1.5M Tris,pH8.8 10%SDS 10%過硫酸銨 TEMED5 1.1 2.5 1.3 0.05 0.05配制不同體積SDS-PAGE分離膠所需各成分的體積（ml）10 2.3 5 2.5 0.1 0.115 3.4 7.5 3.8 0.1

7、5 0.1520 4.6 10 5.0 0.2 0.2 0.00825 5.7 12.5 6.3 0.25 0.25 0.0130 6.9 15.0 7.5 0.3 0.3 0.01240 9.2 20.0 10 0.4 0.4 0.01650 11.5 25.0 12.5 0.5 0.5 0.020.002 0.004 0.006注：如果配制非變性膠，參考上述配方，不加10%SDS即可配制成非變性PAGE膠。2、 按照如下表格配制SDS-PAGE的濃縮膠(也稱堆積膠、積層膠或上層膠)成分5%膠 蒸餾水 1M Tris,pH8.8 10%SDS 10%過硫酸銨 TEMED1 0.68 0.13

8、 0.01 0.01 0.001配制不同體積SDS-PAGE濃縮膠所需各成分的體積（ml）2 1.4 0.33 0.25 0.02 0.02 0.0023 2.1 0.5 0.38 0.03 0.03 0.0034 2.7 0.67 0.5 0.04 0.04 0.0046 4.1 1.0 0.75 0.06 0.06 0.0068 5.5 1.3 1.0 0.08 0.08 0.00810 6.8 1.7 1.25 0.1 0.1 0.0130%Acr-Bis(29:1) 0.17注意事項：1、 過硫酸銨配制成10%溶液后，應當-20保存。同時應盡量減少室溫存放時間，以防失效。有效避免失效的方法是分成呈小份，-20保存，用23次，剩余的棄用。 2、 TEMED易揮發(fā)，使用后請蓋緊瓶蓋。另外凝膠凝聚的速度和溫度及光照關系密切，可通過適當調節(jié)TEMED的用量，控制在不同的室內環(huán)境下凝膠凝聚的速度。 3、 配制聚丙烯凝膠的過程中，如果室溫較低，可以置于37放置，加速凝固。 4、 30%Acr-Bis(29:1