人丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶ALT試劑盒使用方法

1、人丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶( (ALT)試劑盒使用方法檢測范圍：96T2 U/L -60U/L使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)水平。用純化的人丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入丙氨 酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)，再與 HRP 標(biāo)記的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)抗體結(jié)合，形成抗體-抗原- 酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物 TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙氨酸氨基

2、轉(zhuǎn)移酶(ALT)呈正相關(guān)。 用酶標(biāo)儀在 450nm 波長下測定吸光度(0D 值)， 通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人丙氨酸氨 基轉(zhuǎn)移酶(ALT)濃度。試劑盒組成130 倍濃縮洗滌液20mlX1 瓶7終止液6mlX1 瓶2酶標(biāo)試劑6mlX1 瓶8標(biāo)準(zhǔn)品(120U/L )0.5mlX1 瓶3酶標(biāo)包被板12 孔X8 條9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1.5mlX1 瓶4樣品稀釋液6mlX1 瓶10說明書1 份5顯色劑 A 液6mlX1 瓶11圭寸板膜2 張6顯色劑 B 液6mlX1/瓶12密封袋1 個標(biāo)本要求1 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能 馬上進(jìn)行試驗，可將標(biāo)本放于 -20C保存

3、，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。60U/L5 號標(biāo)準(zhǔn)品150d的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液30U/L4 號標(biāo)準(zhǔn)品150d的 5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液15U/L3 號標(biāo)準(zhǔn)品150d的 4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液7.5U/L2 號標(biāo)準(zhǔn)品150d的 3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3.75U/L1 號標(biāo)準(zhǔn)品150d的 2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150d標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及

4、酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50 山,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 山,然后再加待測樣品 10d(樣品最終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育：用封板膜封板后置 37C溫育 30 分鐘。4.配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑 504，空白孔除外。7.溫育：操作同 3。8.洗滌：操作同 5。9.顯色：每孔先加入顯色劑A504，再加入顯色劑 B50

5、4，輕輕震蕩混勻，37C避光顯色15 分鐘.10.終止：每孔加終止液 504,1終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（ OD 值）。測定應(yīng)在加終止 液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品計算以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD 值計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方

6、可使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5 分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4 請每次測定的同時做標(biāo)準(zhǔn)曲線，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（ n 倍）后再測定，計 算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）O5 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).&所