實(shí)驗(yàn)一 還原糖和總糖含量的測定

1、 實(shí)驗(yàn)一 還原糖和總糖含量的測定（3,5-二硝基水楊酸比色法）一目的1.掌握還原糖定量測定的基本原理；2.學(xué)習(xí)比色定糖法的基本操作；3.熟悉分光光度計的使用方法。二原理 在堿性的條件下，還原糖與3,5-二硝基水楊酸共熱，3,5-二硝基水楊酸被還原為3-氨基-5-硝基水楊酸（棕紅色物質(zhì)）,還原糖的量與棕紅色物質(zhì)顏色深淺的程度成一定的比例關(guān)系，在540nm波長下測定棕紅色物質(zhì)的消光值，查對標(biāo)準(zhǔn)曲線并計算，便可分別樣品中還原糖和總糖的含量。三儀器.試劑和材料1.儀器：（1）25ml刻度試管 （2）玻璃漏斗 （3）三角瓶 （4）100ml容量瓶3個 （5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml） （6）恒溫

2、水浴 （7）沸水浴 （8）電子天平 （9）分光光度計2.試劑；（1）1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 （2）3,5-二硝基水楊酸試劑 （3）碘碘化鉀溶液 （4）酚酞指示劑 （5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH3.材料：食用面粉四操作步驟1.制作葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線：取7支25ml刻度試管，編號，按如下操作。操作項目 管 號0 1 2 3 4 5 6葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液（ml）0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 1.2蒸餾水（ml）2 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 3,5-二硝基水楊酸（ml）1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5 1.5吸光度（A540）0.000 0.

3、081 0.217 0.331 0.467 0.575 0.648 將各管搖勻，在沸水中加熱5min，取出后立即放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫，再以蒸餾水定容至25min，用試管塞塞住試管口，顛倒混勻。在540nm波長下，用0號試管調(diào)零，分別讀取16號管的吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄樣毫克數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.樣品中還原糖和總糖含量的測定（1）樣品中還原糖的提?。簻?zhǔn)確稱取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸餾水調(diào)成糊狀，然后加50ml蒸餾水，攪勻，置于50恒溫水中保溫20min，使還原糖浸出。過濾，用20ml蒸餾水定容至刻度，混勻，作為還原糖待測液。（2）樣品中總糖的水解

4、和提?。簻?zhǔn)確稱取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸餾水，置于水浴中加熱水解30min。待三角瓶中水解液冷卻后，加入1滴酚酞指示劑。以6mol/LNaOH中和至微紅色，過濾，再用少量蒸餾水沖洗三角瓶及濾紙，將濾紙全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻。精確吸取10ml定容過的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀釋定容，混勻，作為總糖待測液。（3）顯色和比色，取4支25ml刻度試管，編號，按下表的量操作。操作項目還原糖測定管號總糖測定管號還原糖待測液（ml）1100總糖待測液（ml）0011蒸餾水（ml）00113,5-

5、二硝基水楊酸（ml）1.51.51.51.5吸光度（A540）0.3030.2980.4100.414吸光度（A540）平均值0.301 0.421五、注意事項：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作與樣品含糖量測定應(yīng)同時進(jìn)行，一起顯色和比色。六、結(jié)果處理（1）由管、吸光度平均值在葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)為：0.167mg由管、吸光度平均值在葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)為：0.235mg（2）計算樣品中還原糖和總糖的百分含量如下： 還原糖=0.557 總糖=0.235七、問題討論 1.面粉中主要含有何種糖？ 答：淀粉 2.糖含量定量測定的方法還有哪些？ 答：高效液相色譜法（HPLC） 苯酚-硫酸法

6、蒽酮法 雙折射現(xiàn)象幻想 著 可修改 歡迎下載 精品 Word親愛的用戶：煙雨江南，畫屏如展。在那桃花盛開的地方，在這醉人芬芳的季節(jié)，愿你生活像春天一樣陽光，心情像桃花一樣美麗，感謝你的閱讀。1、最困難的事就是認(rèn)識自己。22.2.132.13.202200:1100:11:472月-2200:112、自知之明是最難得的知識。二二二二二二年二月十三日2022年2月13日星期日3、越是無能的人，越喜歡挑剔別人。00:112.13.202200:112.13.202200:1100:11:472.13.202200:112.13.20224、與肝膽人共事，無字句處讀書。2.13.20222.13.202200:1100:1100:11:4700:11:475、三軍可奪帥也。星期日, 二月 13, 2022二月 22星期日, 二月 13, 20222/13/20226、最大的驕傲于最大的自卑都表示心靈的最軟弱無力。12時11分12時11分13-2月-222.13.20227、人生就是學(xué)校。2