儀器分析試驗(yàn)報(bào)告

1、海醫(yī)科大專儀器分析實(shí)驗(yàn)報(bào)告姓名：黃源銘學(xué)號(hào):3170530144組別：15灌建醫(yī)科大學(xué)專業(yè)：2017級(jí)檢驗(yàn)技術(shù)（2018-2019學(xué)年 第二學(xué)期）年級(jí)、專業(yè)： 2017 級(jí)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 組別：15 學(xué)號(hào)：3170530144姓名： 黃源銘合作者：黃秋汝 實(shí)驗(yàn)日期： 2019.5. 6實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目：一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模ㄒ唬┱莆諢晒夤舛确y(cè)定核黃素的原理和方法。（二）熟悉熒光光度計(jì)使用濾光片的選擇方法。（三）掌握熒光光度計(jì)的使用二、實(shí)驗(yàn)原理堆生京民工砥核黃苣知橙色緒晶性粉其結(jié)構(gòu)式如下: H*C-(CH(JH);CHJ)H- N N J)白 $=376,38由干其母棧上，和間具有共能雙跡.增加了整個(gè)分子的共筑

2、程度，因 此.維生素R水溶液在紫外或可見(jiàn)光照射下能產(chǎn)生熒光，在第酸溶液中.其熒 光將峭強(qiáng).在pH = 6f 7的稀溶液,12。*mL)中，熒光強(qiáng)度與維生素 %的濃度成正比,即：F 2 (piltubc 當(dāng)實(shí)驗(yàn)條件一定時(shí).則F = Ke水溶液中維生蓑&的激發(fā)光波長(zhǎng)九，為37()和7 口m,發(fā)射熒光)波 長(zhǎng)久e為525 nm.利用熒光光度計(jì)測(cè)最熒光強(qiáng)度苜要的間題是選好濾光片, 最好是事先用熒光分光光度計(jì)對(duì)熒光物質(zhì)的溶液進(jìn)行掃描,根據(jù)記錄的激發(fā) 光譜和熒光光譜來(lái)選擇適當(dāng)波長(zhǎng)的甯一曲第二濾光片f如圖2T所示，在一。 500 nm區(qū)間范圍內(nèi)掃描熒光激發(fā)光譜.從山得的熒把激發(fā)光譜中,確定最 大激發(fā)波長(zhǎng) =

3、 465 nm)0在沒(méi)有熒光分光光度計(jì)的情況下,選擇原則是通 過(guò)第一濾光片的激發(fā)光應(yīng)是濾掉了而需要的光線后的單色光.通過(guò)第二濾光 片的熒光應(yīng)是除去了由溶劑,容器和雜質(zhì)等引起的雜散光后的單色光.總之, 以獲得最強(qiáng)的熒光和最(K的空白值為佳.三、實(shí)驗(yàn)步驟1 .標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作（1）維生素R系列標(biāo)準(zhǔn)液的配制準(zhǔn)確稱取0. 0500 g核黃 0. 00, L 00.2. 00.3, 00,4. 00.5.00 mL于6個(gè)50 mL容晶瓶中，用0.2 mol/L HAc溶液定容,搖勻， 以。3依次編號(hào).此系列標(biāo)準(zhǔn)液中維生素艮濃度依次為0C（）、O.2，UO 0, 60 A 30 和 L 00 g/ mL.（

4、2）漉光片的選擇選擇原則：以獲得最強(qiáng)的艮和最低的背景已為佳，洗癌一片法.工以系列標(biāo)準(zhǔn)液中0號(hào)管溶液為空白,用濃度量大的標(biāo)準(zhǔn)溶液來(lái)選擇濾 光片.任選一塊第一濾光片（藍(lán)色帶通型）放進(jìn)激發(fā)光路中，任選一塊第二流 光片（紅字,截止型）放進(jìn)熒光光路中.麗人5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)溶液，選擇靈敏度10.記 錄熒光強(qiáng)度入；換空白溶液讀取熒光強(qiáng)度F-以下各步測(cè)量時(shí),靈敏度保持不變，固定第二濾光片,更換第一波光 片.分別測(cè)量出Fs及居,直至所有的第一濾光片測(cè)盤完畢：*。選出具有垃大的羯一E值（并兼有較小的E值）的第一濾光片作為正 式測(cè)盤用.逐次更換第二潼光片,同法測(cè)定各組濾光片的Fs和E，選出合適 的第二濾光片作為正式測(cè)量用.

5、（3）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制啟動(dòng)儀器之前.將選出的一套流光片插入儀器中.以系列標(biāo)準(zhǔn)液中濃度最 火的5號(hào)溶液調(diào)節(jié)適當(dāng)雙敏度.依次讀出系列林準(zhǔn)溶液中各號(hào)溶液的熒光強(qiáng) 度F舁物F-以維生素氏溶液濃度（幽/mL）為橫坐標(biāo).以為縱坐標(biāo). 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.2.樣品含量的測(cè)定門）樣品溶液的制備L在分析天平上禰取約35 mg維生席莊片劑（已研成粉末）尸15 niL 燒杯中，加入30 mL d 2 moi L HAc容液并加熱溶解，切勿潴揖）,冷卻后過(guò) 濾人250 容顯粗中，用少 0.3 I HAc溶液洗滌23次,然后用 0. 2 mol/L HAc溶液定容。確吸取5.00 mL上述樣品液于50.00 mL容卻瓶中，加A

6、 5 mL 0. 2 mol * L HAc和1滴4% KMM%溶液，放置2分鐘.仔細(xì)滴加3% H J為至 紅色恰好避去,用力振搖以除去溶液中的（ 用門L H.1溶液定容 至標(biāo)線.測(cè)量在與標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的條件下，測(cè)定樣品溶液的熒光強(qiáng)度F以 吃一F,值從標(biāo)準(zhǔn)曲愛(ài)上找出其相應(yīng)的維生素&濃度,進(jìn)一步求算出樣品中 維生素區(qū)的含SL四、實(shí)驗(yàn)記錄和數(shù)據(jù)處理、發(fā)射波長(zhǎng)的選擇A em480490500510512514516518520522524(nm )Fs4.612.322.732.433.434.134.434.333.933.232.3Fo00000000000Fs-F04.612.322.732.4

7、33.434.134.434.333.933.232.3A em526528530540550560570580(nm )Fs31.129.728.221.515.611.27.64.8F000000000Fs-F031.129.728.221.515.611.27.64.8核黃素的靈光發(fā)射光諳480 490 500 51D 520 S3。54D 550 560 570 580作為正式測(cè)量用的發(fā)射波長(zhǎng) 入em (nnj)為：516nm、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制以及樣品含量的測(cè)定012345Cb2( ug/ml )00.20.40.60.810.506F06.714.121.327.835.017.7F-

8、F006.513.720.727.034.017.7樣品中維生素B2濃度為5.06 ug/ml.五、結(jié)果與討論選取維生素B2系列標(biāo)準(zhǔn)液中維生素B2濃度最高的一瓶以及最高和最低 的一瓶，利用熒光光度計(jì)分別測(cè)定其在不同發(fā)射波長(zhǎng)的熒光強(qiáng)度Fs與F0。由實(shí)驗(yàn)原始記錄數(shù)據(jù)得到，其作為正式測(cè)量用的發(fā)射波長(zhǎng)入em (nm )為516nm。選取此入em將其設(shè)為測(cè)定樣品含量的發(fā)射波長(zhǎng)，再次利用熒光光度計(jì)測(cè) 定五瓶溶液的熒光強(qiáng)度。之后設(shè)立維生素B2濃度為橫坐標(biāo)，F(xiàn)s-F0為縱坐標(biāo)繪制測(cè)定維生素B2濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。由標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算可得，CB2=5.06 ug/ml。實(shí)驗(yàn)過(guò)程較為順利。吸取了上次定容時(shí)加入試劑過(guò)快，導(dǎo)致

9、容量瓶中出 現(xiàn)較多氣泡，導(dǎo)致定容不準(zhǔn)的失誤，較好地完成了配制溶液的任務(wù)。希望在之后的實(shí)驗(yàn)中能夠糾正自己更多實(shí)驗(yàn)操作上的不足，提高自己的實(shí)驗(yàn)操作能 力。六、思考題1 .熒光光度計(jì)和紫外可見(jiàn)光度計(jì)在儀器結(jié)構(gòu)上有哪些不同之處？光源：熒光光度計(jì)一般采用笳燈作光源紫外可見(jiàn)光度計(jì)在紫外區(qū)采用氫燈和笳燈，在可見(jiàn)區(qū)采用鴇燈和鹵鴇燈單色器：熒光光度計(jì)有兩個(gè)單色器，一個(gè)為激發(fā)單色器，一個(gè)為發(fā)射單色器紫外可見(jiàn)光度計(jì)只有一個(gè)單色器光源和檢測(cè)器的分布：熒光光度計(jì)的光源和檢測(cè)器呈直角分布紫外可見(jiàn)光度計(jì)的則呈一條直線分布。2 .熒光光度計(jì)的第一和第二濾光片的作用各是什么？選擇濾光片的原則是什 么？第一濾光片的作用：得到濾掉了不需要的光線后的單色光。第二濾光片的作用：得到了除去了由溶劑、容器和雜質(zhì)等引起的雜散光后的 單色光。選擇濾光片的原則：在成像端盡可能讓熒光/發(fā)射光透過(guò)，同時(shí)完全阻擋激發(fā)光，獲得最高的 信噪比。尤其是對(duì)于多光子激發(fā)和全內(nèi)反射顯微鏡的應(yīng)用，微弱的噪聲也會(huì) 對(duì)成像效果造成很大的干擾，因此對(duì)信噪比的要求更高。通常我們看濾光片的參數(shù)一般會(huì)看透射率光譜，但往往熒光