全血膽堿酯酶活性的測定

1、全血膽堿酯酶活性的測定羥胺三氯化鐵法實驗目的1. 掌握三氯化鐵比色法的實驗原理、分析步驟及酶測定的臨床意義。2. 了解常見全血膽堿酯酶活性測定方法的優(yōu)缺點、注意事項。3. 學會末梢血的采集。實驗原理血液膽堿酯酶使乙酰膽堿分解為膽堿和乙酸。未被膽堿酯酶水解而剩余的乙酰膽堿和堿性羥胺反應，形成紅色羌酸鐵絡合物。顏色深度與剩余乙酰膽堿的量成正比。在波長520nm比色定量，由水解的乙酰膽堿的量計算膽堿酯酶活性。試劑和材料蒸餾水鹽酸溶液 (1 2)堿性羥胺溶液磷酸鹽緩沖液(PH= 7.20)三氯化鐵溶液氯化乙酰膽堿標準液分光光度計10mL比色管漏斗恒溫水浴箱，控溫± 0.5 采血針頭血色素吸管

2、采樣、運輸和保存用血色素吸管，取指血20仙L,注入比色管中（事先加入0.98mL磷酸鹽緩沖液），立即進行測定。實驗步驟A樣品管+0.98mL磷酸鹽緩沖液+0.02mL全血37C水浴5min>+1.0mL乙酰膽堿應用液一37>C水浴30minB對照管0.98mL磷酸鹽緩沖液+0.02mL全血37C水浴5min>+1.0mL水37C水浴30minC標準管1.0mL磷酸鹽緩沖液37C水浴5min+f1.0mL乙酰膽堿應用液37C水浴30minD空白管1.0mL磷酸鹽緩沖液37C水浴5min+1.0mL水37，C水浴30min水浴之后對A、B、GD四個試管分別進行以下操作:1 .加入

3、4.0mL堿性羥胺溶液，充分振搖2min;2 .加入2.0mL鹽酸溶液，充分振搖2min;3 .加入2.0mL三氯化鐵溶液，充分振搖；4 .濾紙過濾，520nm比色。實驗結(jié)果表1-1520nm波長下樣品的吸光度樣品編號ABCD吸光度0.2990.0030.5380.000結(jié)果計算計算酶活性的絕對值帶入得:Xs=0.538黑30.2997=34"Xs：水解乙酰膽堿的濃度，科mol(0.02mL37C30min);A:試劑空白為參比的在波長以B:以試劑空白為參比的在波長C:以試劑空白為參比的在波長計算酶活性的相對值520nm處樣品管的吸光度值;520nm處對照管的吸光度值;520nm處標

4、準管的吸光度值。Y=3.149100=1971.60Y酶活性的相對值，%Xs一被測血樣中酶活T的絕對值，科mol(0.02mL-37C-30min);Xc 一正常人血中酶活性絕對值科mol(0.02mL-37C-30min)。Xc=1.60科mol(0.02mL37C30min)討論1. 由于未在網(wǎng)上查到北京市居民膽堿酯酶活性的參考標準，遂以課件上浙江地區(qū)健康人膽堿酯酶活性絕對值作為參考。即：女：3.19土0.398科mol;因3.149科mol在3.19土0.398科mol的區(qū)間內(nèi)，故該樣本的膽堿酯酶活性屬正常范圍。2. 各組所測數(shù)值偏差較大，可能與操作差異如采血時間、振搖是否充分、加熱時間等導致膽堿酯酶活性變化有關。3. 采血要迅速，防止凝固及氧化；振搖要充分，同時防止液體濺出；比色時有以D管調(diào)零。注意事項1. 采血前應準備好試管，提前加入磷酸鹽緩沖液；2. 采血時嚴格消毒，用過的采血針放