第三節(jié)高速逆流色譜分離技術(shù)

1、目錄概述概述工作原理工作原理溶劑系統(tǒng)的選擇溶劑系統(tǒng)的選擇應(yīng)用應(yīng)用一、概述高速逆流色譜（High-Speed CountercurrentHigh-Speed Countercurrent Chromatography,HSCCCChromatography,HSCCC）是一種連續(xù)高效的）是一種連續(xù)高效的液液- -液液分配色譜分離技術(shù)分配色譜分離技術(shù)。該技術(shù)不需要。該技術(shù)不需要固體支撐體固體支撐體，主，主要依據(jù)物質(zhì)要依據(jù)物質(zhì)在兩相中分配系數(shù)的不同對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分在兩相中分配系數(shù)的不同對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離離，相對(duì)其他常用色譜（如柱色譜、高效液相色譜，相對(duì)其他常用色譜（如柱色譜、高效液相色譜等）來(lái)說，具有無(wú)不

2、可逆吸收和回收率高的特點(diǎn)，等）來(lái)說，具有無(wú)不可逆吸收和回收率高的特點(diǎn)，特別適合于天然活性成分的分離。特別適合于天然活性成分的分離。二、HSCCC色譜的工作原理及其特點(diǎn)1、工作原理 HSCCC色譜包括儲(chǔ)液罐、泵、螺旋管分離柱、檢測(cè)器、色譜工作站或數(shù)據(jù)采集軟件或記錄儀以及餾分收集器等部分。 選擇溶劑體系選擇溶劑體系 平衡平衡 選擇固定選擇固定相相 充滿螺旋管柱充滿螺旋管柱 高速旋轉(zhuǎn)螺旋管高速旋轉(zhuǎn)螺旋管泵入流動(dòng)相泵入流動(dòng)相 流動(dòng)相流出，注入帶流動(dòng)相流出，注入帶分分離的樣品離的樣品 收集餾分收集餾分 2、HSCCC色譜的特點(diǎn) 應(yīng)用范圍廣，適應(yīng)性好 操作簡(jiǎn)便，容易掌握 重現(xiàn)性好，回收率高 分離效率高，分

3、離量較大 產(chǎn)品純度高三、溶劑系統(tǒng)的選擇1、溶劑系統(tǒng)的種類： 弱極性溶劑體系 中等極性溶劑體系 強(qiáng)極性溶劑體系2 2、溶劑體系選擇的步驟溶劑體系選擇的步驟（1 1）預(yù)測(cè)要分離物質(zhì)的極性，粗選一個(gè)溶劑體系）預(yù)測(cè)要分離物質(zhì)的極性，粗選一個(gè)溶劑體系；（2 2）取少量樣品于上下相各）取少量樣品于上下相各2 2毫升的溶劑體系中，用毫升的溶劑體系中，用TLCTLC進(jìn)進(jìn)行檢測(cè)，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)溶劑體系的行檢測(cè)，可加入甲醇、乙醇、醋酸乙酯等來(lái)調(diào)節(jié)溶劑體系的極性，直到樣品在上下相中的分配比極性，直到樣品在上下相中的分配比K K為為0.50.52 2為止；為止；（3 3）用）用HPLCHPLC測(cè)定

4、測(cè)定K K值；值；（4)4)用分析型用分析型HSCCCHSCCC進(jìn)行預(yù)分離，再用制備進(jìn)行預(yù)分離，再用制備型高速逆流色譜型高速逆流色譜進(jìn)行分離。進(jìn)行分離。3、選擇溶劑時(shí)應(yīng)注意（1）溶劑不造成樣品的分解或變性；（2）樣品在溶劑中有足夠高的溶解度；（3）樣品在溶劑系統(tǒng)中有合適的分配系數(shù)值（固定固定相為管柱總體積的相為管柱總體積的50%50%以上，分配系以上，分配系數(shù)為數(shù)為0.50.52）；）；（4）固定相能實(shí)現(xiàn)足夠高的保留。四、應(yīng)用高速逆流色譜在分離純化木蝴蝶中的黃酮苷類化合物的應(yīng)用1、分配系數(shù)的測(cè)定 利用HPLC測(cè)定樣品在不同溶劑體系的分配系數(shù)。 2、溶劑系統(tǒng)的確定根據(jù)文獻(xiàn)及被分離物的性質(zhì)選擇溶劑體系。包括：氯仿-甲醇-水；乙酸乙酯-正丁