實驗動物學部分

1、實驗動物學課程實驗內(nèi)容：1.的基本實驗操作2.皮膚移植試驗、（或）摘除術3.大鼠實驗的基本操作4.大鼠性周期觀察1一、實驗目的:通過實際操作，掌握的一般操作，的抓取和固定、鑒定、編號、去毛、給藥、采血、麻醉、處死，尤其是染色法編號、灌胃、眼球摘除法采血、腹腔注射、脊椎脫臼法處死。二、實驗動物：4 只（2 雌 2 雄）三、實驗步驟1、 抓取和固定2、鑒定3、 編號（染色法）4、 去毛（脫毛劑法）5、 給藥：消化道、腹腔注射、尾靜脈注射6、 采血：眼眶后靜脈叢、尾靜脈、眼球摘除法、斷頭法7、 麻醉：腹腔麻醉8、 處死：脊椎脫臼法、過量麻醉9、 解剖：9.1 生殖系統(tǒng)：9.1.1 雄性：、鼠蹊腺（在

2、下方，膠質(zhì)狀，透明）9.1.2 雌性：雙角、9.2 腎上腺、胰腺、膽囊、甲狀腺四、實驗結果1、抓取和固定：抓?。鹤サ奈哺抗潭ǎ鹤プ〉奈哺?，讓在粗糙平面上爬行，后拉尾跟部，右手的拇指和食指抓住兩耳及其間的頸部皮膚，小指和無名指將尾巴固定在手掌面。2、鑒定：觀察與間的距離和二者之間的毛發(fā)。雄性：距離長，毛發(fā)密（和其2實驗一的基本實驗操作他部位一樣）；雌性：距離短，毛發(fā)稀疏。3、 編號：3.1 染色法：3.1.1 用（黃色）在背面染色3.1.2 逆毛發(fā)生長方向染色，自毛根開始3.1.3 可編 1-10 號（10 號為不編號）3.2 去毛：脫毛劑：8% Na2S，自毛發(fā)根部涂抹3.3 給藥：3.3

3、.1 灌胃法：左手抓取固定后，右手持特制灌胃針，沿一側(cè)口角進針，緊貼咽后壁，頭后仰以便伸直消化道，進針 2/3 后灌生理鹽水 0.5ml3.3.2 注射給藥：3.3.2.1 腹腔注射：3.3.2.1.1 從下腹部的兩側(cè)進針3.3.2.1.2 進針時針與腹部成 45°。進針后稍微晃動針，如無粘滯感則可注射3.3.2.2 尾靜脈注射：一人固定，另一人用左手中指和拇指將尾拉直，食指托住尾部，后右手持帶 4 號針頭的注射器在圖示 A（背面，實為動脈）位置進針注射 0.5ml 生理鹽水。注射完畢拔出針頭，用無菌棉球止血。尾動脈細小，且貼近皮膚，未注射。尾靜脈切面圖33.4 采血3.4.1 ：從

4、眼角內(nèi)側(cè) 0.5cm 處進針。（右圖）3.4.2 眼球摘除法：左手抓取用固定，右手持彎頭鑷在眼球根部將眼球摘除，頭朝下，眼眶內(nèi)血迅速流出。3.5 麻醉：0.5%腹腔麻醉：本重 25g，按 100mg/kg 的藥量給藥，8 分鐘麻醉成功3.6 處死：3.6.1 脊椎脫臼法：按住頭部，將尾根部向后上方以短促的拉即可致死3.6.2 過量麻醉：追加 0.5%過量（5ml）腹腔麻醉3.7 解剖：3.7.1 生殖系統(tǒng)：3.7.1.1 雄性：尋找到、鼠蹊腺3.7.1.2 雌性：雙角、3.7.2 腎上腺：米粒大小3.7.3 胰腺：位于胃下方，類似于脂肪組織，渾濁狀3.7.4 膽囊：芝麻大小，淺綠色，半透明3.

5、7.5 甲狀腺：緊貼環(huán)狀軟骨4五、實驗討論1、抓取的感受：性情較溫順，一般咬人，比較容易抓取固定。通常用右手提起尾巴將其放在鼠籠蓋或其它粗糙表面上，在向前掙扎爬行時，用左手拇指和食指捏住其雙耳及頸部皮膚，將置于左手掌心、無名指和小指夾其背部皮膚和尾部，即可將完全固定。在一些特殊的實驗中，如進行尾靜脈注射時，可使用特殊的固定裝置進行固定，如尾靜脈注射架或粗的試管。如要進行手術或心臟采血應先行麻醉再操作，如進行解剖實驗則必須先行無痛處死后再進行。2、尾靜脈注射感受：首先，注射前尾巴用稍熱的水浸泡幾分鐘，有利于注射；其次，先遠后盡，不要一開始就從尾根部，那樣失敗了不好辦； 再次，進后注意保持，針尖很

6、容易刺穿的。尾靜脈就在尾巴的正左右兩邊，先用用力擦，可以去掉部分角質(zhì)，然后按住近心端讓充血，就很容易看到了。進針大概 12 厘米是最合適的。尾靜脈注射時，可用 4550 度的溫水浸潤半分鐘或用擦拭，可使擴張，同時也可軟化表質(zhì)。以左手拇指和食指鼠尾，使靜脈充盈，中指幫助無名指和小指捏住鼠尾末梢，右手持注射器（連 5 號細針頭），針頭與靜脈夾角一般小于 30 度，從距尾尖 2 - 3厘米處進針，此處皮薄易進入，先抽回血，見到血后再緩慢注入少量藥液，如無阻力，表示針頭已進入靜脈，可繼續(xù)注入。一般推注速度為 0.05 - 0.10ml/秒，一次注入量為 0.05 -0.25ml/10g 體重。如反復注

7、入，應盡可能從尾末端開始，以后根部方向移動注射。5一、實驗目的1. 掌握近交系常用的皮膚移植試驗（尾背植皮法，尾尾植皮法）。2. 掌握摘除術和大鼠摘除術二、實驗步驟1、近交系常用的皮膚移植試驗1.1 尾背植皮法1.2 尾尾植皮法2、摘除術2.1 固定、麻醉2.2摘除三、實驗結果1、近交系常用的皮膚移植試驗1.1 尾背植皮法：1.1.1 將近交系（受體）固定后（已麻醉）背部剪毛，（約 1.5cm×1.5cm 大小），75%常規(guī)。用眼科剪在此部位剪開一個 0.3cm×0.3cm 大小的方形洞備用。1.1.2 將近交系（供體）固定后（已麻醉），75%常規(guī)鼠尾。用眼科剪沿尾靜脈剪開

8、一條縫，用止血鉗將皮膚剝下，剪成 0.5cm×0.5cm 大小，刮掉皮片上的結締組織。1.1.3 將供體皮片（0.5cm×0.5cm 大?。└采w在受體背部的方形洞（0.3cm×0.3cm大?。﹥?nèi)，鋪平，用棉球吸去滲出的血液，使植皮緊貼受體的創(chuàng)面，并與宿主的邊緣密切吻合。1.1.4 無菌紗布覆蓋植皮區(qū)，膠布包扎（此步驟本實驗中省略）。1.1.5 13觀察結果6實驗二皮膚移植試驗、（或）摘除術1.2 尾尾植皮法（本實驗中為自體尾尾移植）：1.2.1 將近交系固定后（已麻醉），75%常規(guī)尾部皮膚。1.2.2 固定鼠尾的根部，用 4 號手術刀在鼠尾背部切開一 0.5cm&

9、#215;0.5cm 大小的皮片，盡量不損傷局部，用止血鉗將皮膚剝下。1.2.3 將皮片旋轉(zhuǎn) 180°，鑲嵌在創(chuàng)面上，棉球吸去局部滲出的血液和組織液，使其盡可能緊貼，可以不包扎。1.2.4 13觀察結果（100 天）2、摘除術2.1 固定、麻醉：選雌性，取左側(cè)臥位，以左腹外側(cè)區(qū)（左肋弓下緣）為手術區(qū)，局部剪毛，75%兩遍后，用 0.5%以 100mg/kg 的劑量（本實驗：0.5ml）進行腹腔麻醉，5 分鐘后靜臥于手術臺上，呼吸深大而有節(jié)律，頻率略快，四肢肌肉松弛，麻醉成功。2.2摘除：用手術刀在左肋緣下，取腹正中線平行方向切開皮膚 1cm，腹腔內(nèi)容物。撥開腸管，找到右腎。在右腎下方

10、找到右側(cè)和右側(cè)角。游離右側(cè)并摘除。局部，縫合腹膜、腹壁肌肉和皮膚。按上述摘除左側(cè)（另一位同學操作）。四、實驗討論1、近交系常用的皮膚移植試驗1.1 皮膚移植實驗是用于鑒定近交系動物組織相容性是否一致的簡單而可靠的方法。1.2 尾背植皮法：將尾部皮膚移植到同品系的異體的背部，通過觀察移植皮片和背部其他區(qū)域的毛發(fā)稀疏和皮膚光澤異同來鑒定二者的組織相容性。如果組織相容性好，植皮色澤與周圍一致，沒有充血或炎癥，移植皮片光澤。若組織相容性基因不純合，尾后 13被排斥，植皮脫落，背部留下一塊。另外，供體皮片應略大于受體創(chuàng)面以充分吻合，以免因皮片邊緣缺血壞死而導致愈合后創(chuàng)面周邊皮膚不連續(xù)。1.3 自體尾尾植

11、皮法：可以鑒定植皮的脫落是否是手術失敗而造成。移植將皮片旋轉(zhuǎn) 180°，以利于術后通過毛發(fā)生長的方向觀察植皮是否存活。72、摘除術、大鼠摘除術2.1摘除術：進入腹腔后，可以先找到腎臟。然后在腎臟下方查找并摘除。2.2 行或摘除術將兩側(cè)的或均摘除。8實驗三 大鼠實驗的基本操作一、實驗目的通過實際操作，掌握大鼠的一般操作去毛、給藥、采血、麻醉、處死。二、實驗步驟1、 抓取和固定，大鼠的抓取和固定、鑒定、編號、2、鑒定3、 編號（染色法）4、 去毛（剪毛）5、 給藥：消化道、腹腔注射、尾靜脈注射6、 采血：眼眶后靜脈叢、尾靜脈、眼球摘除法、斷頭法7、 麻醉：腹腔麻醉8、 處死：脊椎脫臼法、

12、過量麻醉9、 解剖：9.1 生殖系統(tǒng)：9.1.1 雄性：9.1.2 雌性：雙角、鼠蹊腺（在下方，膠質(zhì)狀，透明）9.2 腎上腺、胰腺、膽囊、甲狀腺三、實驗結果1、抓取和固定：左手抓住大鼠的尾根部，右手的食指和無名指卡住大鼠頭部兩側(cè)，右手的拇指和食指同時捏住大鼠的左上肢?；蛞话炎プ☆^部兩側(cè)及雙上肢根部間的距離和二者之間的毛發(fā)：2、鑒定（同）：觀察與2.1 雄性：距離長，毛發(fā)密（和其他部位一樣）2.2 雌性：距離短，毛發(fā)稀疏3、編號：3.1 染色法（最常用）：3.1.1 用3.1.2 逆毛發(fā)生長方向染色，自毛根開始3.1.3 因為大鼠體形大，一般一籠內(nèi)養(yǎng) 15 只，15 號編號同3.2 同時結合籠子

13、的編號加以區(qū)別4、 去毛：4.1 剃毛：可用電動剃須刀剔除大鼠毛發(fā)4.2 剪毛：剪毛之前先用濕潤5、給藥：（實驗一所示），采用灌胃法：左手抓取固定后，雙下肢及尾部另請一人協(xié)助。右手持特制灌胃針，沿一側(cè)口角進針，緊貼咽后壁，頭后仰以便伸直消化道，順利進針后灌生理鹽水 0.5ml 6、注射：6.1 腹腔注射：6.1.1 妥善固定大鼠后，從下腹部的兩側(cè)進針6.1.2 進針時針與腹部成 45°，進針后稍微晃動針并回抽，如無粘滯感且沒有回血則可注射6.2 肌肉注射：大鼠下肢肌肉發(fā)達，可在大腿外側(cè)進行肌肉注射6.3 尾靜脈注射：一人固定大鼠，另一人用左手中指和拇指將尾拉直，食指托住尾部，11后右

14、手持帶 4 號針頭的注射器在圖示 A（背面，實為動脈）位置進針注射 0.5ml 生理鹽水。注射完畢拔出針頭，用無菌棉球度較大。止血。尾動脈細小，且貼近皮膚，注射難大鼠尾靜脈切面圖7、 采血：7.1 眼眶后靜脈叢：從眼角外下方或前下方進針，然后立即拔針，用7.2 眼球摘除法：未嘗試毛細管取血。7.3 尾靜脈采血：大鼠尾部使靜脈充盈，用注射針頭刺破后，擠壓尾部取血，血量較少，僅8、麻醉：到一滴。0.5%9、處死：腹腔麻醉：本雌性大鼠重 350g，按 100mg/kg 的藥量給藥，10 分鐘麻醉9.1 脊椎脫臼法：按住頭部，將尾根部向后上方以短促的較大的拉即可致死9.2 過量麻醉：追加 0.5% 1

15、0、解剖：10.1 顱部：過量（2ml）腹腔麻醉10.1.1 視交叉：將大鼠過量麻醉致死后，剪開顱頂部皮膚，顱骨，用鑷子咬除顱頂部骨，充分大腦半球。用鑷子從額部將腦組織翻至枕后，可見位于顱底的視交叉、視神經(jīng)和視束（白色10.1.2 垂體：夾斷視神經(jīng)，充分粒大小。10.2 頸部：）顱底，可見位于垂體窩中的垂體，色白，米甲狀腺：緊貼環(huán)狀軟骨，較10.3 腹部：10.3.1 腎上腺：米粒大小明顯。10.3.2 胰腺：位于胃下方，類似于脂肪組織，渾濁狀10.3.3 膽囊：缺如10.3.410.3.5：大鼠：體積較大為雙角型，雙側(cè)被大量脂肪組織所包裹1211、稱重：胃肝臟脾臟腎臟心臟肺雙角臟器雙腎重量(

16、g)左：1.8 右：1.6 左：1.7 右：1.7 1.816.4臟器肺臟重量(g)左：0.9 右：0.7 1.74.21.3心臟胃(含內(nèi)容物)脾臟肝臟四、實驗討論1、 抓取和固定：（1） 大鼠牙齒和爪子銳利，個頭大，抓取時要（2） 初學者為確保安全，可佩戴棉紗手套。，不要被其抓傷或咬傷。（3） 提尾部靠近尾根部提取，以防大鼠身體搖晃，或扭頭過來咬人。（4）2、不容易固定時，可另請另一人協(xié)助操作。鑒定：同。另外健康雄性大鼠的體重明顯超過同齡雌性大鼠4、編號：（1）常用染色法，也可用專門打孔器進行耳部打孔編號。（2）大鼠體形大，籠養(yǎng)數(shù)量有限，可結合染色和籠子編號以區(qū)別，方便實驗。5、給藥：采用灌

17、胃法：（1）為最常用的給藥。（2）待固定穩(wěn)當后再進針。（2）如進針不順，須暫停操作，以免激若大鼠，妨礙實驗順利進行。6、注射：6.1 腹腔注射：注意妥善固定，最好一人固定頭部和上肢，另請一人固定雙下肢和尾部， 以免進針時大鼠掙扎妨礙操作6.2 肌肉注射：要選擇肌肉豐滿耳無大通過的大腿外側(cè)進針6.3 尾靜脈注射：尾靜脈鱗片厚，雖然肉眼可見，但率低，一般少用。137、采血尾靜脈采血：對動物損傷小，采血后率低，適用于大鼠的血糖監(jiān)測。8、 麻醉：對于不同，由于對的耐受性不同，在麻醉過程中應隨時檢查動物的呼吸和外周血液循環(huán)、心跳等反應，劑量不夠時可適當加量9、 處死選擇原則：（1）盡量避免因處死不當而造

18、成病理損害，影響實驗結果（2）盡量使動物快速、安靜、無痛苦10、解剖：（1）顱部：大鼠視神經(jīng)發(fā)達，很容易找到視交叉。（2）膽囊：缺如，這是與的不同之處。14實驗四 大鼠性周期觀察和大鼠急性肺水腫模型建立實驗動物：SD 大鼠 1 只（雌）【實驗目的】1 通過實際操作掌握大鼠涂片的制作和性周期觀察。2 通過實驗掌握大鼠急性肺水腫模型的建立，了解誘發(fā)型動物模型的制作。【實驗步驟】一、大鼠性周期觀察1、 固定大鼠：左手抓取大鼠，食指和中指卡緊大鼠頸部，拇指和無名指握住胸部，小指固定腹部，右手拉住尾部和雙下肢，稍用力后拉，充分雌鼠的。2、液、涂片：另一人用滴管吸生理鹽水 2 滴，大鼠深部，沖洗 3 次，

19、吸出沖洗液，分別滴 1 滴在兩個載玻片上，用第 3 塊玻片推片，自然晾干（10 分鐘）。3、 染色和鏡檢：用染液染色 30 分鐘，細流水沖洗，然后在顯微鏡下觀察。二、 大鼠急性肺水腫模型的建立1、 氯化銨腹腔注射：按上述固定大鼠后，抽取 6%氯化銨 3.5ml（本大鼠重量 360g，按1ml/100g 藥量），從左側(cè)下腹部進針，無粘滯感后注射氯化銨。8 分鐘后僅見大鼠活動減少無其他異常改變，又追加 6%氯化銨 0.5ml2、 尸體解剖：大鼠出現(xiàn)興奮、肌肉震顫，繼而后立即尸體解剖，直接打開胸腔，結扎交叉稍上方，自結扎處上方剪斷，游離周圍組織和心臟，取出肺臟，觀察形態(tài)學改變，并在臺式稱上稱重。3、

20、 計算肺重量系數(shù)=肺臟重量（g）/ 大鼠體重（g）×100%?！緦嶒灲Y果】一、 大鼠性周期觀察脫落細胞涂片、染色、鏡檢：顯微鏡下看到大鼠間期的部分改變：有核細胞和少量上皮細胞，也看到少量胞。右圖所示為 20×顯微鏡下觀察到的情況。15二、 大鼠急性肺水腫模型的建立1. 腹腔注射 6%氯化銨 3.5ml 后大鼠的活動明顯減少，呼吸急促，出現(xiàn)肌無力，靜俯于桌上。20 分鐘后首先出現(xiàn)張口呼吸，點頭樣呼吸，口唇，鼻翼，約 15 秒鐘后出現(xiàn)肌肉震顫，持續(xù)約 30s，然后發(fā)生、，最后死于呼吸衰竭。如下圖所示。2. 尸體解剖：肺腫脹，包膜緊張，大部分肺表面出現(xiàn)暗紅色斑塊，切開有少量紅色樣

21、液體流出;胸腔內(nèi)有液體積聚，如下圖。3. 將結扎后，稱取全肺質(zhì)量，為 4.3g，實驗前稱取大鼠質(zhì)量為 385g則本實驗中，16肺重量系數(shù)=肺臟重量（g）/ 大鼠體重（g）×100%=4.3g/385g×100%=1.11%1%【實驗討論】1 大鼠性周期觀察a) 大鼠性周期為 45 天，由于大鼠有晝伏夜行的習性，一般在下午不能看到大鼠的期。本大鼠處于間期b) 大鼠的一般在 24 小時后脫落。所以觀察期間籠具必須保持整潔，不能放置刨木花。看到說明交配，受孕率為 7080%。c) 大鼠春秋兩季的受孕率較兩季高。d) 大鼠性周期脫落細胞變化情況如下表所示表 1 大鼠性周期脫落細胞變化情況后期階段前期期間期第一階段第二階段胞，有大量圓形有大量角化上少量角化無角化上皮細核、無核上皮脫落細核上皮細胞，皮細胞（無