微生物限度驗證范例(中檢所)

1、復方磷酸可待因(歐博士止咳露)溶液微生物限度檢查法驗證實驗1. 樣品復方磷酸可待因(歐博士止咳露) ，批號 309315 、402021 ，生產(chǎn)廠家為香港歐化 藥業(yè)有限公司。2. 驗證用菌種 枯草桿菌 CMCC (B) 63501、金黃色葡萄球菌 CMCC ( B) 26003、大腸 埃希菌 CMCC(B) 44102、白色念珠菌 CMCC (F) 98001、 黑曲霉 CMCC(F)98003 。3. 方法 中國藥典有關微生物限度檢查法方法驗證試驗。4. 具體操作方法4.1 菌液制備：(1) 取經(jīng)37C培養(yǎng)1824h,金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、枯草桿菌的肉湯培養(yǎng)物1ml+9ml 鹽水， 1

2、0 倍稀釋至 10-5 10-7，細菌數(shù)約為 50100cfu/ml ，做活菌計數(shù)備用。(2) 經(jīng)25 C培養(yǎng)1824小時的白色念珠菌霉菌液體培養(yǎng)物1ml+9 ml鹽水10倍稀釋至10-5 10-7，細菌數(shù)約為 50100cfu/ml ，做活菌計數(shù)備用。(3) 取經(jīng)25 C培養(yǎng)1周的黑曲霉斜面培養(yǎng)物，加35ml鹽水洗下霉菌孢子，吸取出菌液，用標準比濁管比濁，然后取 1 ml +9 ml 鹽水，逐管 10倍稀釋為 10-4，細菌數(shù)約為 50100cfu/ml ，做活菌計數(shù)備用。4.2 供試液制備 吸取樣品 10 ml ，加 0.1%蛋白胨水氯化鈉稀釋液 90ml 濃度均為 1：10 供試液，分別

3、人工污染上述 5 種代表試驗菌株。4.3 培養(yǎng)基稀釋法： 采用加 0.5 ml、 0.2 ml、 0.1 ml /皿供試液，再加 1520 ml 瓊脂培 養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng) 2448 小時觀察結(jié)果細菌計數(shù)，測定回收率。結(jié)果見表：4.4 回收率測定：(1) 試驗組: 分別取不同品種的 1：10供試液 1 ml、 50100 個/ ml 試驗菌株同時加入平皿中，立即傾注瓊脂培養(yǎng)基，待凝固后，置規(guī)定溫度培養(yǎng)2472 小時觀察結(jié)果。薄膜過濾法以最后一次的沖洗液加入試驗菌 .(2) 活菌組 測定每一菌株的試驗菌數(shù)(3) 供試液對照 測定供試品本底菌數(shù)(4) 稀釋劑對照組5 結(jié)果 菌落計數(shù)結(jié)果

4、、常規(guī)法和培養(yǎng)基稀釋法在復方磷酸可待因微生物限度檢查法的驗證結(jié)果 見表 1 、 2 和表 3。表1菌落計數(shù)（cfu/ml）實驗次數(shù)金葡菌10-5枯草桿菌10-5白色念珠菌10-5黑曲霉10-4大腸埃希菌10-7194、90130、 8073、72110、9014、15280、7445、23128、108110、12054、343153、15078、7773、74110、10030、27從表2結(jié)果可以看出：（1）采用常規(guī)方法檢驗復方磷酸可待因溶液供試品，人工污染5株代表菌株，該供試品對大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉的回收率試驗均高于70%，可采用常規(guī)方法檢驗。（2）復方磷酸可待因?qū)瘘S色葡萄球菌

5、、枯草桿菌有不同程度的抗菌活性， 供試品回收率為 0.0229.2%，均低于70%。表2復方磷酸可待因微生物限度檢查方法驗證（常規(guī)法）實驗次數(shù)人工染菌回收率%金葡菌枯草桿菌白色念珠菌黑曲霉大腸埃希菌10.0271.481.1100.0100.0229.229.4100.0100.0100.03抑菌抑菌100.0100.0100.0表3培養(yǎng)基稀釋法（1ml加2個平皿）復方磷酸可待因微生物限度檢查驗證實驗次數(shù)人工染菌回收率%金葡菌枯草桿菌180.7100.0291.4100.0表3中的結(jié)果證明，采用培養(yǎng)基稀釋法可消除供試品對人工污染金黃色葡萄球菌和枯草桿菌的抑菌作用?；厥章蔬_到70%以上。因此，培養(yǎng)基稀釋法（0.5ml/皿）可用于復方磷酸可待因（歐博士止咳露）的微生物限度檢查。6結(jié)論根據(jù)驗證試驗結(jié)果，確定復方磷可待因（歐博士止咳露）溶液微生物限度檢查法為細菌數(shù)測定可采用培養(yǎng)基稀釋法（0.5ml/皿）測定，霉菌數(shù)可采用常規(guī)法測定。注：常規(guī)法為1ml供試液加1