方法學選擇和評價

1、方法學選擇和評價第三章第三章 方法學選擇與評價方法學選擇與評價第一節(jié)第一節(jié) 實驗方法的評價與選擇實驗方法的評價與選擇第二節(jié)第二節(jié) 量值溯源、誤差及不確定度量值溯源、誤差及不確定度第三節(jié)第三節(jié) 方法學的評價方法學的評價第一節(jié)第一節(jié) 實驗方法的評價與選擇實驗方法的評價與選擇方法學評價方法學評價(evaluation of methodology) 是通過實驗途徑測定分析方法的技術(shù)性能是通過實驗途徑測定分析方法的技術(shù)性能, ,并評價其是否可接受，其目的在于明確該并評價其是否可接受，其目的在于明確該方法是否具有足夠的方法性能來說明檢測方法是否具有足夠的方法性能來說明檢測系統(tǒng)的可靠性及可以滿足臨床需求。

2、系統(tǒng)的可靠性及可以滿足臨床需求。方法學評價具體內(nèi)容方法學評價具體內(nèi)容第一節(jié)第一節(jié) 實驗方法的評價與選擇實驗方法的評價與選擇一、實驗方法的分級一、實驗方法的分級二、參考物的分級二、參考物的分級三、方法選擇的原則三、方法選擇的原則四、方法選擇與評價基本步驟四、方法選擇與評價基本步驟五、定量實驗的方法學評價五、定量實驗的方法學評價六、定性實驗的方法學評價六、定性實驗的方法學評價實驗方法的分級實驗方法的分級1.1.決定性方法決定性方法(definitive method) 定義：是準確度最高、系統(tǒng)誤差最小、經(jīng)定義：是準確度最高、系統(tǒng)誤差最小、經(jīng)過研究證明尚未發(fā)現(xiàn)其不準確度或不精密過研究證明尚未發(fā)現(xiàn)其不

3、準確度或不精密度的方法，其測定結(jié)果與度的方法，其測定結(jié)果與“真值真值”最為接最為接近。近。 用途：主要用于評價參考方法和對一級用途：主要用于評價參考方法和對一級參考物定值，而不直接用于鑒定常規(guī)方參考物定值，而不直接用于鑒定常規(guī)方法。法。2.2.參考方法參考方法(reference method) 定義：是準確度與精密度已經(jīng)充分證實，定義：是準確度與精密度已經(jīng)充分證實，干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的隨機干擾因素少，系統(tǒng)誤差與重復(fù)測定的隨機誤差相比可以忽略不計，有適當?shù)撵`敏度、誤差相比可以忽略不計，有適當?shù)撵`敏度、特異度及較寬的分析范圍。特異度及較寬的分析范圍。 用途：主要用于鑒定常規(guī)方法。用途

4、：主要用于鑒定常規(guī)方法。 3.3.常規(guī)方法常規(guī)方法(routine method) 定義：指性能指標符合臨床需要，有足夠定義：指性能指標符合臨床需要，有足夠的精密度、準確度、特異性和適當?shù)姆治龅木芏取蚀_度、特異性和適當?shù)姆治龇秶?jīng)濟實用的臨床常規(guī)檢驗方法。范圍，經(jīng)濟實用的臨床常規(guī)檢驗方法。 用途：這類方法經(jīng)有關(guān)學術(shù)組織認可后可作用途：這類方法經(jīng)有關(guān)學術(shù)組織認可后可作為推薦方法。為推薦方法。準確度增加準確度增加應(yīng)用范圍增加應(yīng)用范圍增加 不同方法的關(guān)系不同方法的關(guān)系決定性方法一級參考物參考方法二級參考物校準物常規(guī)方法控制物各級實驗方法和參考物的相互關(guān)系各級實驗方法和參考物的相互關(guān)系 返節(jié)目錄

5、返節(jié)目錄 二、參考物分級二、參考物分級 參考物也稱標準品或標準物質(zhì)參考物也稱標準品或標準物質(zhì) 國際標準化委員會定義：它的一種或幾種物理或化學國際標準化委員會定義：它的一種或幾種物理或化學成分已經(jīng)充分確定，可用于校準儀器、評價測定方法成分已經(jīng)充分確定，可用于校準儀器、評價測定方法或給其他物質(zhì)定值的物質(zhì)或給其他物質(zhì)定值的物質(zhì) “參考物證書參考物證書”的參考物稱為有證參考物（的參考物稱為有證參考物（certified reference material, CRMcertified reference material, CRM） 其定值由建立了溯源性的測量程序確定其定值由建立了溯源性的測量程序確定

6、 每個參考物都附有其置信水平的不確定度每個參考物都附有其置信水平的不確定度: : 標準值標準值總不確定度總不確定度二、參考物分級二、參考物分級 1.1.一級參考物一級參考物(primary reference material) 特點：特點： 含量確定，穩(wěn)定均一，數(shù)值由決定性方法含量確定，穩(wěn)定均一，數(shù)值由決定性方法或由高度準確的若干方法確定或由高度準確的若干方法確定 用途：可用于校正決定性方法，評價及校正參考方用途：可用于校正決定性方法，評價及校正參考方法以及為法以及為“二級參考物二級參考物”定值，一級參考物均有證書定值，一級參考物均有證書二、參考物分級二、參考物分級 2.2.二級參考物二級參

7、考物 特點：純?nèi)芤海ㄋ蛴袡C溶劑）或某特特點：純?nèi)芤海ㄋ蛴袡C溶劑）或某特殊基質(zhì)的純?nèi)芤骸？捎蓪嶒炇易约号渲剖饣|(zhì)的純?nèi)芤骸？捎蓪嶒炇易约号渲苹驗樯唐罚湮镔|(zhì)的量由參考方法定值或為商品，其物質(zhì)的量由參考方法定值或用一級參考物比較而確定?；蛴靡患墔⒖嘉锉容^而確定。 用途：主要用于用途：主要用于 常規(guī)方法的標化常規(guī)方法的標化 為控制物定值為控制物定值。二、參考物分級二、參考物分級 3.3.校準物校準物 特點：凍干品或溶液，可以用一級或二級特點：凍干品或溶液，可以用一級或二級參考物以參考方法定值。參考物以參考方法定值。 用途：用于對常規(guī)方法和儀器的校準。用途：用于對常規(guī)方法和儀器的校準。二、參考物分

8、級二、參考物分級 4.4.控制物控制物(control material) 即質(zhì)控品質(zhì)控品 特點：與檢測過程相適應(yīng)，成分及基質(zhì)與檢測的樣特點：與檢測過程相適應(yīng)，成分及基質(zhì)與檢測的樣本相同或相似，且均勻、穩(wěn)定。本相同或相似，且均勻、穩(wěn)定。 用途：控制物用于常規(guī)質(zhì)量控制，采用控制物和用途：控制物用于常規(guī)質(zhì)量控制，采用控制物和樣品同步進行測量，將測試結(jié)果與控制物保證值樣品同步進行測量，將測試結(jié)果與控制物保證值相比較，以評價其準確度和檢查實驗室內(nèi)是否存相比較，以評價其準確度和檢查實驗室內(nèi)是否存在系統(tǒng)誤差。在系統(tǒng)誤差。 返節(jié)目錄返節(jié)目錄 三、方法選擇的原則三、方法選擇的原則 實用性：備樣本用量少、分析速

9、度快、同時進行多實用性：備樣本用量少、分析速度快、同時進行多項目和多樣本的分析；方法操作簡便、試劑種類少、項目和多樣本的分析；方法操作簡便、試劑種類少、易于實現(xiàn)自動化，安全可靠易于實現(xiàn)自動化，安全可靠 ，價格低廉，價格低廉 。 可靠性：較高的精密度和準確度，較寬的檢測可靠性：較高的精密度和準確度，較寬的檢測范圍。范圍。 三、方法選擇的原則三、方法選擇的原則可靠性：可靠性： 精密度：變異系數(shù)（精密度：變異系數(shù)（CV%CV%）一般應(yīng)小于）一般應(yīng)小于5%5% 準確度是指測定值與準確度是指測定值與“真值真值”的符合程度，一般偏差的符合程度，一般偏差系數(shù)（系數(shù)（CBCB）應(yīng)小于）應(yīng)小于5%5% 特異性是

10、指只與待測物質(zhì)起化學反應(yīng)，不與其他結(jié)構(gòu)特異性是指只與待測物質(zhì)起化學反應(yīng)，不與其他結(jié)構(gòu)類似的化合物發(fā)生反應(yīng)類似的化合物發(fā)生反應(yīng) 檢測能力用檢測限度或檢測能力用檢測限度或“檢出限檢出限”衡量衡量 檢出限通常是指能與適當?shù)臋z出限通常是指能與適當?shù)摹翱瞻卓瞻住弊x數(shù)相區(qū)別的，檢讀數(shù)相區(qū)別的，檢測系統(tǒng)可以檢出的待測物的最小量測系統(tǒng)可以檢出的待測物的最小量 返節(jié)目錄返節(jié)目錄 四、方法選擇與評價的基本步驟四、方法選擇與評價的基本步驟 提出要求提出要求收集資料收集資料確定候選方法確定候選方法初步評價初步評價原理資料儀器試劑原理資料儀器試劑試劑成分保存穩(wěn)定性試劑成分保存穩(wěn)定性生物安全生物安全樣本要求樣本要求準準

11、精精 特異特異 靈敏靈敏標準化操作規(guī)程標準化操作規(guī)程設(shè)備設(shè)施設(shè)備設(shè)施服務(wù)技術(shù)支持服務(wù)技術(shù)支持 返節(jié)目錄返節(jié)目錄 五、定量實驗的方法學評價五、定量實驗的方法學評價 定量實驗檢測系統(tǒng)可以給出具體數(shù)值的實驗定量實驗檢測系統(tǒng)可以給出具體數(shù)值的實驗結(jié)果結(jié)果 定量實驗的方法學評價包括定量實驗的方法學評價包括: : 線性范圍、準確度、精密度、靈敏度、特異線性范圍、準確度、精密度、靈敏度、特異度和參考區(qū)間等性能指標度和參考區(qū)間等性能指標 六、定性實驗的方法學評價六、定性實驗的方法學評價 定性實驗結(jié)果：出陽性或陰性定性實驗結(jié)果：出陽性或陰性 是或非是或非 定性檢測性能評價：重復(fù)性研究定性檢測性能評價：重復(fù)性研究

12、 方法學比較方法學比較（一）評價前的準備（一）評價前的準備 實驗室工作人員的培訓實驗室工作人員的培訓 熟悉待評價的試劑或系統(tǒng)熟悉待評價的試劑或系統(tǒng) 掌握樣本和試劑的處理和存儲過程掌握樣本和試劑的處理和存儲過程 按廠商的要求進行，注意基質(zhì)效應(yīng)按廠商的要求進行，注意基質(zhì)效應(yīng) 定性實驗需進行陰性和陽性質(zhì)控物測定定性實驗需進行陰性和陽性質(zhì)控物測定（二）定性實驗重復(fù)性研究（二）定性實驗重復(fù)性研究 確立方法的臨界值：確立方法的臨界值： 同樣一份樣本，在多次重復(fù)實驗中各有同樣一份樣本，在多次重復(fù)實驗中各有50%50%的幾率獲得陽性或陰性結(jié)果時該分析物的濃的幾率獲得陽性或陰性結(jié)果時該分析物的濃度；度；在臨界值

13、基礎(chǔ)上準備出在臨界值基礎(chǔ)上準備出20%20%的濃度的樣的濃度的樣本；本；樣本分別測定樣本分別測定2020次，記錄陰性及陽性結(jié)次，記錄陰性及陽性結(jié)果數(shù)；果數(shù)； 結(jié)果分析：結(jié)果分析：?“臨界值臨界值”樣本的陰性結(jié)果和陽性結(jié)樣本的陰性結(jié)果和陽性結(jié)果不是各占果不是各占50%50%?+20%+20%濃度的樣本產(chǎn)生陽性結(jié)果數(shù)濃度的樣本產(chǎn)生陽性結(jié)果數(shù)95%95%，同時，同時，-20%-20%濃度的樣本產(chǎn)生陰性結(jié)果濃度的樣本產(chǎn)生陰性結(jié)果數(shù)數(shù)95%95%?陽性和陽性和/ /或陰性結(jié)果數(shù)或陰性結(jié)果數(shù)95% 95% 對于被測物濃度在臨界值20%濃度范圍以外的樣本，實驗方法將給出穩(wěn)定的結(jié)果。 臨界值濃度不準確、結(jié)果數(shù)

14、據(jù)不充足、方法學劑量反應(yīng)曲線在臨界值處是非線性的 應(yīng)另外準備不同濃度的實驗樣本，重新進行評價 （三）定性實驗方法學比較（三）定性實驗方法學比較 對比的方法：另一種定性方法、對比的方法：另一種定性方法、“金標準金標準”方方法、定量方法或臨床診斷。法、定量方法或臨床診斷。 樣本種類和數(shù)量樣本種類和數(shù)量 ：最好使用常規(guī)患者的新鮮標：最好使用常規(guī)患者的新鮮標本本 ，陰性陽性標本分別，陰性陽性標本分別5050例以上。例以上。 實驗過程實驗過程 ：10102020天內(nèi)完成天內(nèi)完成 性能指標性能指標 ：敏感度、特異性、陽性預(yù)測值和：敏感度、特異性、陽性預(yù)測值和陰性預(yù)測值陰性預(yù)測值 表表3-2 3-2 已知樣

15、本臨床診斷結(jié)果判斷定性實驗性能指標已知樣本臨床診斷結(jié)果判斷定性實驗性能指標實驗方法比對方法（明確診斷）陽性陰性總數(shù)陽性ABA+B陰性CDC+D總數(shù)A+CB+DN（A+B+C+D）已知樣本臨床診斷結(jié)果判斷定性實驗性能指標已知樣本臨床診斷結(jié)果判斷定性實驗性能指標 靈敏度靈敏度A/(AA/(AC)C)100%100%特異性特異性D/(BD/(BD)D)100%100%陽性預(yù)測值陽性預(yù)測值A(chǔ)/(AA/(AB)B)100%100%陰性預(yù)測值陰性預(yù)測值D/(CD/(CD)D)100%100%實驗方法比對方法陽性陰性總數(shù)陽性57259陰性43943總數(shù)6141102實驗方法與比對方法間比較的結(jié)果計算實驗方法

16、與比對方法間比較的結(jié)果計算陽性符合率陽性符合率A/(AC)100%93.4%陰性符合率陰性符合率D/(BD)100%95.1%總符合率總符合率(AD)/N100%94.1%返回章目錄返回章目錄第二節(jié)第二節(jié) 量值溯源誤差及不確定度量值溯源誤差及不確定度一、量值溯源的概念和意義一、量值溯源的概念和意義 二、參考物的量值溯源二、參考物的量值溯源 三、誤差的分類和表示三、誤差的分類和表示 四、測量不確定度四、測量不確定度 一、量值溯源的概念和意義一、量值溯源的概念和意義溯源性：通過一條具有規(guī)定溯源性：通過一條具有規(guī)定不確定度的不間斷的傳遞鏈，不確定度的不間斷的傳遞鏈，使測定結(jié)果或標準值能夠與使測定結(jié)果

17、或標準值能夠與規(guī)定的參考標準，聯(lián)系起來，規(guī)定的參考標準，聯(lián)系起來，使測定結(jié)果的準確性得到技使測定結(jié)果的準確性得到技術(shù)保證和驗證。術(shù)保證和驗證。 溯源性參考物檢測系統(tǒng)標準化儀器試劑操作程序 標準品（標準品（reference materialreference material）：）： 充分均勻并具有一個或多個良好確定的特性值充分均勻并具有一個或多個良好確定的特性值的材料或物質(zhì)，用來校準儀器設(shè)備、評估測定的材料或物質(zhì)，用來校準儀器設(shè)備、評估測定方法或給其他物質(zhì)賦值。方法或給其他物質(zhì)賦值。標準品分級標準品分級一級標準品：穩(wěn)定、均一，由高度準確的若一級標準品：穩(wěn)定、均一，由高度準確的若干方法定值，可

18、用于校準決定性方法及為二干方法定值，可用于校準決定性方法及為二級標準品定值。級標準品定值。 二級標準品：用一級標準品校準，參考二級標準品：用一級標準品校準，參考方法定值。方法定值。 校準品：用二級標準品校準，擬被用于校準品：用二級標準品校準，擬被用于校準的常規(guī)方法定值。用于對常規(guī)方法校準的常規(guī)方法定值。用于對常規(guī)方法和儀器的校準。和儀器的校準。標準品分級標準品分級 返回節(jié)目錄返回節(jié)目錄 二、參考物的量值溯源二、參考物的量值溯源溯源鏈：溯源鏈： 用一個測量程序為某種物質(zhì)定值，該物質(zhì)用做用一個測量程序為某種物質(zhì)定值，該物質(zhì)用做下一級測量程序的校準物下一級測量程序的校準物 依此類推，形成一條不間斷的

19、比較鏈依此類推，形成一條不間斷的比較鏈（一）參考物的量值溯源程序（一）參考物的量值溯源程序1.1.溯源鏈和校準層次溯源鏈和校準層次 SISI單位溯源鏈：計量可追溯性鏈的理想終點是國際單單位溯源鏈：計量可追溯性鏈的理想終點是國際單位制位制(SI) (SI) 其他參考物的溯源：對沒有其他參考物的溯源：對沒有SISI單位的分析物，可溯單位的分析物，可溯源到源到“國際慣例國際慣例”表示的參考物質(zhì)和參考測定方法。表示的參考物質(zhì)和參考測定方法。 （一）參考物的量值溯源程序（一）參考物的量值溯源程序2.2.參考物量值的傳遞方案參考物量值的傳遞方案 3.3.校準溯源的驗證三要素校準溯源的驗證三要素 由體外診斷

20、試劑生產(chǎn)廠家測定的值應(yīng)與由體外診斷試劑生產(chǎn)廠家測定的值應(yīng)與用參考方法測定的數(shù)值相同。用參考方法測定的數(shù)值相同。 由體外診斷試劑生產(chǎn)廠家用參考方法測定由體外診斷試劑生產(chǎn)廠家用參考方法測定結(jié)果在數(shù)學上相等的評估，即線性回歸方結(jié)果在數(shù)學上相等的評估，即線性回歸方程斜率為程斜率為1 1、截距為、截距為0 0。 要求廠家參考物測定結(jié)果有互通性。要求廠家參考物測定結(jié)果有互通性。 （一）參考物的量值溯源程序（一）參考物的量值溯源程序4.4.校準品在溯源中的作用校準品在溯源中的作用 校準品在溯源中的作用校準品在溯源中的作用 實現(xiàn)溯源的實現(xiàn)溯源的“橋梁橋梁”是最可取而可靠的辦是最可取而可靠的辦法法 實現(xiàn)溯源性的

21、目的實現(xiàn)溯源性的目的 結(jié)果的可靠結(jié)果的可靠 實現(xiàn)溯源性的評估實現(xiàn)溯源性的評估 室間質(zhì)量評價是最易實現(xiàn)的量值溯源的長室間質(zhì)量評價是最易實現(xiàn)的量值溯源的長期評估方法期評估方法 （一）參考物的量值溯源程序（一）參考物的量值溯源程序5 5.實現(xiàn)溯源性的目和評估實現(xiàn)溯源性的目和評估 實現(xiàn)溯源性的目的：結(jié)果的可靠實現(xiàn)溯源性的目的：結(jié)果的可靠 體外診斷試劑廠家按照體外診斷試劑廠家按照ISO 17511ISO 17511的要求，對校準品的要求，對校準品的定值實現(xiàn)計量溯源，為用戶提供常規(guī)測定方法的的定值實現(xiàn)計量溯源，為用戶提供常規(guī)測定方法的溯源文件溯源文件 實現(xiàn)溯源性的評估實現(xiàn)溯源性的評估 室間質(zhì)量評價是最易實

22、現(xiàn)量值溯源長期評估方法室間質(zhì)量評價是最易實現(xiàn)量值溯源長期評估方法 （二）參考物量值溯源的意義（二）參考物量值溯源的意義 通過溯源的參考物校準常規(guī)方法通過溯源的參考物校準常規(guī)方法 測定患者樣本結(jié)果的準確性源溯參考方法測定患者樣本結(jié)果的準確性源溯參考方法 參考物是處理過的樣本與新鮮患者樣本的基質(zhì)有差異參考物是處理過的樣本與新鮮患者樣本的基質(zhì)有差異 參考方法的準確度不能完全通過參考物傳遞給患者參考方法的準確度不能完全通過參考物傳遞給患者樣本樣本 對參考物的量值有一定的調(diào)整對參考物的量值有一定的調(diào)整 返回節(jié)目錄返回節(jié)目錄 三、誤差的分類與表示三、誤差的分類與表示誤差誤差系統(tǒng)誤差系統(tǒng)誤差來源來源隨機誤差

23、隨機誤差來源來源 方法誤差方法誤差 儀器誤差儀器誤差 實驗條件實驗條件 操作習慣操作習慣 試劑誤差試劑誤差 操作誤差操作誤差 固定原因固定原因 可以校正可以校正無法控制無法控制無法校正無法校正 誤差是指測量結(jié)果與被測量的真值之差誤差是指測量結(jié)果與被測量的真值之差（一）系統(tǒng)誤差（一）系統(tǒng)誤差（systematic error，SE）1.1.定義定義 是指在對同一被測量的多次測試中，它保持不變或按某是指在對同一被測量的多次測試中，它保持不變或按某種規(guī)律而變化。又稱方法誤差、固定誤差。種規(guī)律而變化。又稱方法誤差、固定誤差。 由恒定因素引起，多次重復(fù)出現(xiàn)，可被認識并校正由恒定因素引起，多次重復(fù)出現(xiàn)，可

24、被認識并校正2.2.來源來源方法誤差：由檢測方法固有的缺陷所致方法誤差：由檢測方法固有的缺陷所致儀器誤差：未經(jīng)校準的儀器所產(chǎn)生的誤差儀器誤差：未經(jīng)校準的儀器所產(chǎn)生的誤差儀器波長漂移、量器不準、溫度或儀器波長漂移、量器不準、溫度或pHpH不準等引起不準等引起試劑誤差：試劑質(zhì)量差、實驗水不合格、參考物不純試劑誤差：試劑質(zhì)量差、實驗水不合格、參考物不純操作誤差：操作不規(guī)范，保溫時間不足、加樣不準操作誤差：操作不規(guī)范，保溫時間不足、加樣不準（二）隨機誤差（二）隨機誤差（random error，RE）1.1.定義定義 隨機誤差是指在對同一被測量的多次測試中，它隨機誤差是指在對同一被測量的多次測試中，它

25、受偶然因素影響而以不可預(yù)知的方式變化，又稱偶然誤受偶然因素影響而以不可預(yù)知的方式變化，又稱偶然誤差。差。 隨機誤差影響不定，無大小和方向，呈正態(tài)分布。這種誤隨機誤差影響不定，無大小和方向，呈正態(tài)分布。這種誤差無法控制，是無法校正的。差無法控制，是無法校正的。2.2.來源來源 隨機誤差反映分析方法的不精密度隨機誤差反映分析方法的不精密度 不可避免難以預(yù)測的測定儀器、試劑、環(huán)境、人不可避免難以預(yù)測的測定儀器、試劑、環(huán)境、人 嚴格按照標準化的操作規(guī)程可減少隨機誤差。嚴格按照標準化的操作規(guī)程可減少隨機誤差。（三）誤差的表示方法（三）誤差的表示方法 絕對誤差：是指檢測值與真值或約定真值之間的絕對誤差：是

26、指檢測值與真值或約定真值之間的差值。其單位與檢測值相同，可用于評價檢測結(jié)差值。其單位與檢測值相同，可用于評價檢測結(jié)果的準確程度。果的準確程度。 相對誤差：是指檢測值絕對誤差與真值或約定相對誤差：是指檢測值絕對誤差與真值或約定真值之比，通常以百分數(shù)表示，它能客觀的表真值之比，通常以百分數(shù)表示，它能客觀的表示出檢測結(jié)果的準確程度。示出檢測結(jié)果的準確程度。 總誤差：總誤差： 常規(guī)樣本測定結(jié)果與真值的差異是隨常規(guī)樣本測定結(jié)果與真值的差異是隨機誤差和系統(tǒng)誤差的總和。機誤差和系統(tǒng)誤差的總和。 返回節(jié)目錄返回節(jié)目錄 四、測量不確定度四、測量不確定度 （一）定義（一）定義表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測

27、量結(jié)果相聯(lián)系的參表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)。不確定度是指在統(tǒng)計控制狀態(tài)下賦予被測量之值的分散性。數(shù)。不確定度是指在統(tǒng)計控制狀態(tài)下賦予被測量之值的分散性。 不確定度不確定度按量綱分類按量綱分類 按賦予按賦予不確定度不確定度大小的程度大小的程度 按評定方法按評定方法 標準標準不確定度不確定度 相對相對不確定度不確定度 A A類標準類標準不確定度不確定度 B B類標準類標準不確定度不確定度 標準標準不確定度不確定度 擴展擴展不確定度不確定度 合成標準合成標準不確定度不確定度 （二）不確定度分類（二）不確定度分類 標準不確定度：是指以標準差表示的測量不確標準不確定度：是指

28、以標準差表示的測量不確定度。定度。 相對不確定度：是指標準不確定度除以被測量相對不確定度：是指標準不確定度除以被測量之值。之值。 A A類標準不確定度：是指用統(tǒng)計分析的方法來評類標準不確定度：是指用統(tǒng)計分析的方法來評定出的不確定度，其評定方法為定出的不確定度，其評定方法為A A類評定類評定 B B類標準不確定度：是指用非統(tǒng)計分析的方法來類標準不確定度：是指用非統(tǒng)計分析的方法來評定出的不確定度，其評定方法為評定出的不確定度，其評定方法為B B類評定類評定（二）不確定度分類（二）不確定度分類 擴展不確定度：是指確定測量結(jié)果區(qū)間的量，合理擴展不確定度：是指確定測量結(jié)果區(qū)間的量，合理賦予被測量之值分布

29、在指定概率內(nèi)含于此區(qū)間。賦予被測量之值分布在指定概率內(nèi)含于此區(qū)間。 具有一定可信度的測量值都處于此區(qū)間內(nèi)具有一定可信度的測量值都處于此區(qū)間內(nèi)，又稱范圍不確定度或展伸不確定度。，又稱范圍不確定度或展伸不確定度。 合成標準不確定度：是指當測量結(jié)果是由若干個其合成標準不確定度：是指當測量結(jié)果是由若干個其他的值求得時，按其他各量的方差和協(xié)方差算得的他的值求得時，按其他各量的方差和協(xié)方差算得的標準不確定度。標準不確定度。（三）不確定度計算（三）不確定度計算 準確計算不確定度非常困難，一般僅能近準確計算不確定度非常困難，一般僅能近似估算不確定度似估算不確定度 實驗室的不確定度為合成不確定度，表示為：實驗室

30、的不確定度為合成不確定度，表示為： 返回章目錄返回章目錄 測量不確定度與誤差的主要區(qū)別測量不確定度與誤差的主要區(qū)別 區(qū) 別不確定度誤差評定目的表明被測量值的分散性表明測量結(jié)果偏離真值的程度評定結(jié)果用標準差或標準差的倍數(shù)或置信區(qū)間的半寬表示，可以通過A、B類評定方法定量確定。誤差為有正號或負號的量值，其值為測量結(jié)果減去被測量的真值，誤差往往不能準確得到，只可得到其估計值。影響因素當測量條件、方法、程序改變時測量不確定度必定改變而不論測量結(jié)果如何，分析時，應(yīng)充分考各種影響因素，并對不確定度的評定加以驗證。誤差是客觀存在的，不受外界因素的影響，不以人的認識程度而改變，只要測量結(jié)果不變，誤差不變。性質(zhì)

31、區(qū)分測量不確定度分量評定時一般不必區(qū)分其性質(zhì)，其分量本身無本質(zhì)區(qū)別，而只是按評定的方法可分為A類和B類兩類。誤差出現(xiàn)于測量結(jié)果中的規(guī)律可分為隨機誤差和系統(tǒng)誤差兩類結(jié)果修正不確定度本身隱含為一種可估計的值，它不是指具體確切的誤差值，雖可估計，但卻不能用以修正測量結(jié)果。系統(tǒng)誤差的估計值如果已知則可以對測量結(jié)果修正，一個量值經(jīng)過修正后，可能會更靠近真值第三節(jié)第三節(jié) 方法學的評價方法學的評價一、準確度的評價一、準確度的評價二、精密度的評價二、精密度的評價三、檢測限的評價三、檢測限的評價四、可報告范圍四、可報告范圍五、參考區(qū)間驗證五、參考區(qū)間驗證一、準確度的評價一、準確度的評價（一）定義（一）定義 準確

32、度（準確度（accuracyaccuracy）是指測定值與真值接近的程度）是指測定值與真值接近的程度一般用偏差和偏差系數(shù)表示一般用偏差和偏差系數(shù)表示 準確性評價方法有：回收試驗準確性評價方法有：回收試驗 干擾試驗干擾試驗 方法比對試驗方法比對試驗 （二）回收實驗（二）回收實驗 回收實驗用于評估實驗方法正確測定在常規(guī)樣本中回收實驗用于評估實驗方法正確測定在常規(guī)樣本中加入的純分析物加入的純分析物( (質(zhì)量、濃度、活性質(zhì)量、濃度、活性) )的能力。的能力。 結(jié)果用回收率表示結(jié)果用回收率表示 對實驗方法的準確度進行評價對實驗方法的準確度進行評價 （二）回收實驗（二）回收實驗回收濃度樣本最終測定濃度基礎(chǔ)

33、樣本濃度回收濃度樣本最終測定濃度基礎(chǔ)樣本濃度1.1.回收實驗基本步驟回收實驗基本步驟AAAAAAAAAAAAAAAAA加分析物 加水H2O制備樣本制備樣本 計算加入的待測物計算加入的待測物A A的濃度的濃度測定樣本中待測物測定樣本中待測物A A的濃度的濃度 計算回收率計算回收率 2.2.回收實驗注意事項回收實驗注意事項 使用常規(guī)樣品基質(zhì)使用常規(guī)樣品基質(zhì) 吸量準確吸量準確 加入待測物的濃度加入待測物的濃度 標準液濃度標準液濃度 重復(fù)測定重復(fù)測定 計算比例系統(tǒng)誤差：計算比例系統(tǒng)誤差： 比例系統(tǒng)誤差比例系統(tǒng)誤差 = 100% - = 100% - 平均回收率平均回收率（三）干擾試驗（三）干擾試驗 干

34、擾物質(zhì)可以是測量誤差的重要來源干擾物質(zhì)可以是測量誤差的重要來源 干擾物質(zhì)引起的誤差是恒定系統(tǒng)誤差，與分析物的濃干擾物質(zhì)引起的誤差是恒定系統(tǒng)誤差，與分析物的濃度無關(guān)度無關(guān) 常見干擾物質(zhì)有：常見干擾物質(zhì)有：病理條件下的代謝物：糖尿病病理條件下的代謝物：糖尿病患者本身原因：飲酒、藥物、飲食等患者本身原因：飲酒、藥物、飲食等樣本中因素：溶血、脂血、黃疸等樣本中因素：溶血、脂血、黃疸等樣本處理中因素：抗凝劑、添加劑等樣本處理中因素：抗凝劑、添加劑等（三）干擾試驗（三）干擾試驗1.1.原理原理 將陽性干擾物加入臨床標本的混合液將陽性干擾物加入臨床標本的混合液( (干擾干擾測定樣本測定樣本) )中，與不加干

35、擾物的同一混合液中，與不加干擾物的同一混合液( (干擾干擾對照樣本對照樣本) )組比較有無偏倚，稱為組比較有無偏倚，稱為“配對差異配對差異”試試驗驗 混合液的干擾物濃度應(yīng)具有臨床決定性水平混合液的干擾物濃度應(yīng)具有臨床決定性水平 一般最有效的方法是在較高濃度下對系列可能的干一般最有效的方法是在較高濃度下對系列可能的干擾物做初步篩選擾物做初步篩選2.2.干擾實驗基本步驟干擾實驗基本步驟制備樣本制備樣本 計算加入的待測物計算加入的待測物A A的濃度的濃度測定樣本中待測物測定樣本中待測物A A的濃度的濃度 計算干擾值計算干擾值A(chǔ)AAAAAAAAAAAAA加干擾物加水BH2O3.3.干擾實驗注意事項干擾

36、實驗注意事項 試驗標本：常選擇患者標本試驗標本：常選擇患者標本 吸量精確吸量精確 加入干擾物的濃度、體積：要加入干擾物的濃度、體積：要達病理標本的最高達病理標本的最高濃度值，體積盡可能小濃度值，體積盡可能小 干擾物的選擇：干擾物的選擇：根據(jù)反應(yīng)原理、廠家建議和文獻根據(jù)反應(yīng)原理、廠家建議和文獻提示提示 測定次數(shù)測定次數(shù)（四）方法比對試驗（四）方法比對試驗 方法比對試驗是指把試驗方法方法比對試驗是指把試驗方法( (待評價或待驗證待評價或待驗證的方法的方法) )與比對方法與比對方法( (參考方法或準確度已知的參考方法或準確度已知的方法方法) )進行比較，從測定結(jié)果間的差異了解待進行比較，從測定結(jié)果間

37、的差異了解待評價方法的檢測結(jié)果的偏倚。評價方法的檢測結(jié)果的偏倚。 如果這些誤差小于總誤差，方法是可接受如果這些誤差小于總誤差，方法是可接受 如果誤差太大，則必須拒絕該方法，或需要識別如果誤差太大，則必須拒絕該方法，或需要識別和消除其誤差來源。和消除其誤差來源。（四）方法比對試驗（四）方法比對試驗 1.1.基本方法基本方法 用試驗方法和比對方法同時測定一組患者用試驗方法和比對方法同時測定一組患者的新鮮標本，分析兩個檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的新鮮標本，分析兩個檢測系統(tǒng)測定結(jié)果的差異，得到恒定或比例系統(tǒng)誤差的數(shù)據(jù)。的差異，得到恒定或比例系統(tǒng)誤差的數(shù)據(jù)。 2.2.比對實驗要求比對實驗要求 新鮮患者標本新鮮患者

38、標本 最少在最少在5 5個工作日對最少個工作日對最少4040份份 覆蓋從低值、參考區(qū)間到高值覆蓋從低值、參考區(qū)間到高值 基于隨機的、系統(tǒng)的和總誤差的大小判斷基于隨機的、系統(tǒng)的和總誤差的大小判斷方法的可接受性。方法的可接受性。 3.3.方法學比較實驗方法學比較實驗 實驗方法：用做比對的方法實驗方法：用做比對的方法( (新方法新方法) ) 比較方法：與之比對的方法比較方法：與之比對的方法( (原來方法原來方法) ) 室內(nèi)比對：比對在實驗室內(nèi)部之間進行的室內(nèi)比對：比對在實驗室內(nèi)部之間進行的方法學比對實驗方法學比對實驗 室間比對：在不同實驗室之間進行的方法學室間比對：在不同實驗室之間進行的方法學比對實

39、驗比對實驗4.4.比對實驗步驟比對實驗步驟樣本數(shù)：樣本數(shù)：8 8個臨床患者樣本，編號。用兩個臨床患者樣本，編號。用兩種方法同時進行實驗種方法同時進行實驗 ，正序倒序測定，正序倒序測定 1 1、2 2、3 3、4 4、5 5、6 6、7 7、8 8 8 8、7 7、6 6、5 5、4 4、3 3、2 2、1 1重復(fù)重復(fù)5 5天，必須進行校準和室內(nèi)質(zhì)控。天，必須進行校準和室內(nèi)質(zhì)控。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告。數(shù)據(jù)處理及結(jié)果報告。5.5.方法比對試驗要點方法比對試驗要點 樣本要求：應(yīng)選擇常規(guī)檢測的新鮮標本作為試驗標本樣本要求：應(yīng)選擇常規(guī)檢測的新鮮標本作為試驗標本 比對方法：用兩種方法同時測定一批標本，計算出

40、兩比對方法：用兩種方法同時測定一批標本，計算出兩種檢測方法間測定結(jié)果的差異，以此來估計試驗方法種檢測方法間測定結(jié)果的差異，以此來估計試驗方法在測定標本時可能引入的誤差原則上，比較方法應(yīng)具在測定標本時可能引入的誤差原則上，比較方法應(yīng)具有好的精密度，無已知的干擾物，分析范圍至少與實有好的精密度，無已知的干擾物，分析范圍至少與實驗方法相同。驗方法相同。 標本測定：不同檢測系統(tǒng)開始檢測的時間應(yīng)相近，標本測定：不同檢測系統(tǒng)開始檢測的時間應(yīng)相近，且都應(yīng)在且都應(yīng)在2 2個小時內(nèi)檢測完畢。個小時內(nèi)檢測完畢。 6.6.方法比對試驗結(jié)果評價方法比對試驗結(jié)果評價 作圖分析：作圖法是方法學比較最基本的分作圖分析：作圖

41、法是方法學比較最基本的分析技術(shù)，可以直觀地初步判斷數(shù)據(jù)的分布特析技術(shù)，可以直觀地初步判斷數(shù)據(jù)的分布特點。可繪制散點圖和偏差圖點。可繪制散點圖和偏差圖 離群點的檢查離群點的檢查 標本內(nèi)分析物含量的統(tǒng)計分析檢驗標本內(nèi)分析物含量的統(tǒng)計分析檢驗 線性回歸統(tǒng)計線性回歸統(tǒng)計 臨床可接受性能判斷臨床可接受性能判斷 7.7.方法比對試驗簡易方法方法比對試驗簡易方法 參照參照CLIS EP15-A2CLIS EP15-A2文件文件用戶對精密度和準用戶對精密度和準確度性能的核實試驗確度性能的核實試驗批準指南批準指南（第（第2 2版版）進行準確度評價。）進行準確度評價。 通過對定值參考物檢測，對檢測系統(tǒng)的準確通過對

42、定值參考物檢測，對檢測系統(tǒng)的準確度性能進行評價。度性能進行評價。 8.8.簡易評價程序簡易評價程序 選擇定值參考物，至少要求測定選擇定值參考物，至少要求測定2 2個水平，用實驗個水平，用實驗方法重復(fù)測定方法重復(fù)測定2 2次，將檢測結(jié)果與說明書標示值次，將檢測結(jié)果與說明書標示值或靶值進行比對?；虬兄颠M行比對。 計算偏倚，以計算偏倚，以CLIACLIA8888的的1/21/2作為評價標準，偏倚小作為評價標準，偏倚小于于CLIACLIA8888的的1/21/2，認為新檢測系統(tǒng)的偏倚臨床可，認為新檢測系統(tǒng)的偏倚臨床可接受水平，新檢測系統(tǒng)或新方法可應(yīng)用于臨床。接受水平，新檢測系統(tǒng)或新方法可應(yīng)用于臨床。

43、返回節(jié)目錄返回節(jié)目錄 二、精密度的評價二、精密度的評價 精密度（精密度（precisionprecision）是指測量程序在相）是指測量程序在相同條件下，對同一樣本進行連續(xù)多次測同條件下，對同一樣本進行連續(xù)多次測量所得結(jié)果之間的一致性，是表示測定量所得結(jié)果之間的一致性，是表示測定結(jié)果中隨機誤差大小程度的指標。精密結(jié)果中隨機誤差大小程度的指標。精密度常用標準差或變異系數(shù)來描述不精密度常用標準差或變異系數(shù)來描述不精密度，從而度量精密度大小。度，從而度量精密度大小。 （一）精密度檢測基本方法（一）精密度檢測基本方法 批內(nèi)重復(fù)性試驗批內(nèi)重復(fù)性試驗 日內(nèi)重復(fù)性試驗日內(nèi)重復(fù)性試驗 日間重復(fù)性試驗日間重復(fù)性

44、試驗 總的不精密度總的不精密度（二）注意事項（二）注意事項 試驗標本的選擇試驗標本的選擇 （1 1）標準液簡便易得，可制成不同濃度，）標準液簡便易得，可制成不同濃度，干擾因素少，可作為評價隨機誤差的最佳樣干擾因素少，可作為評價隨機誤差的最佳樣品。品。 （2 2）凍干質(zhì)控血清穩(wěn)定、使用方便，適用于進）凍干質(zhì)控血清穩(wěn)定、使用方便，適用于進行日間重復(fù)性試驗。行日間重復(fù)性試驗。 （3 3）患者標本或混合血清常用于短時間內(nèi)）患者標本或混合血清常用于短時間內(nèi)完成的試驗。完成的試驗。（二）注意事項（二）注意事項 分析物濃度的選擇分析物濃度的選擇 在醫(yī)學上具有決定性意在醫(yī)學上具有決定性意義的濃度水平義的濃度水

45、平 試驗樣本數(shù)量試驗樣本數(shù)量 在試驗周期內(nèi)至少做在試驗周期內(nèi)至少做2020個樣個樣本的檢測本的檢測 試驗條件試驗條件 要盡量在相同的條件下要盡量在相同的條件下 返回節(jié)目錄返回節(jié)目錄 三、檢測限的評價三、檢測限的評價 檢測限是指檢測系統(tǒng)可檢測出的最低分析物檢測限是指檢測系統(tǒng)可檢測出的最低分析物濃度，又稱為分析靈敏度濃度，又稱為分析靈敏度 試驗樣品：空白樣品試驗樣品：空白樣品 檢測限樣品檢測限樣品 測定次數(shù)：無具體規(guī)定，通常測定測定次數(shù)：無具體規(guī)定，通常測定10102020次。次。 試驗時間：一般做試驗時間：一般做1010天檢測。天檢測。 結(jié)果計算結(jié)果計算 檢測低限檢測低限 生物檢測限：生物檢測限

46、更真實地反映實生物檢測限：生物檢測限更真實地反映實際檢測限濃度水平樣本測定的不確定度。際檢測限濃度水平樣本測定的不確定度。 功能靈敏度：功能靈敏度反映了方法能可功能靈敏度：功能靈敏度反映了方法能可靠測定的最低濃度?？繙y定的最低濃度。三、檢測限的評價三、檢測限的評價 返回節(jié)目錄返回節(jié)目錄 四、可報告范圍四、可報告范圍 （一）可報告范圍（一）可報告范圍 指檢測方法可以報告的所有結(jié)果范圍，指檢測方法可以報告的所有結(jié)果范圍，包擴分析測量范圍和臨床可報告范圍。包擴分析測量范圍和臨床可報告范圍。分析測量范圍分析測量范圍 指患者樣本沒有進行任何預(yù)指患者樣本沒有進行任何預(yù)處理（稀釋或濃縮等），檢測方法能夠直接處理（稀釋或濃縮等），檢測方法能夠直接測定出的待測物的范圍測定出的待測物的范圍 臨床可報告范圍臨床可報告范圍 是指對臨床診斷、治療有意義是指對臨床診斷、治療有意義的待測物濃度范圍。的待測物濃度范圍。 （二）線性試驗（二）線性試驗 線性試驗是指用試驗方法對一系列濃度樣線性試驗是指用試驗方法對一系列濃度樣本進行分析，對檢測結(jié)果進行直線回歸，本進行分析，對檢測結(jié)果進行直線回歸，評價該分析方法能準確報告的最低濃度、評價該分析方法能準確報告的最低濃度、最高濃度或能檢測到的范圍。最高濃度或能檢測到的范圍。1