第五章化學(xué)發(fā)光免疫分析

1、第一節(jié)第一節(jié) 慨慨 述述一、化學(xué)發(fā)光一、化學(xué)發(fā)光二、化學(xué)發(fā)光效率二、化學(xué)發(fā)光效率第二節(jié)第二節(jié) 化學(xué)發(fā)光劑和標(biāo)記技術(shù)化學(xué)發(fā)光劑和標(biāo)記技術(shù)一、化學(xué)發(fā)光劑一、化學(xué)發(fā)光劑二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)第三節(jié)第三節(jié) 化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析二、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析二、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析四、臨床應(yīng)用四、臨床應(yīng)用發(fā)光免疫分析發(fā)光免疫分析: :是將發(fā)光分析和免疫反是將發(fā)光分析和免疫反應(yīng)相結(jié)合而建立起來(lái)的一種新的檢測(cè)應(yīng)相結(jié)合而建立起來(lái)的一種新的檢測(cè)微量抗原或抗體的新型標(biāo)記免疫分析微量抗原或抗體

2、的新型標(biāo)記免疫分析技術(shù)。技術(shù)。 放射免疫技術(shù)放射免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)酶免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)發(fā)光免疫技術(shù)三大經(jīng)典標(biāo)記技術(shù)三大經(jīng)典標(biāo)記技術(shù) 發(fā)光發(fā)光: :是指分子或原子中的電子吸收能量后，由基態(tài)是指分子或原子中的電子吸收能量后，由基態(tài)（較低能級(jí)）躍遷到激發(fā)態(tài)（較高能級(jí)），然后再返回（較低能級(jí)）躍遷到激發(fā)態(tài)（較高能級(jí)），然后再返回到基態(tài)，并釋放光子的過(guò)程。到基態(tài)，并釋放光子的過(guò)程。根據(jù)形成激發(fā)態(tài)分子的能量來(lái)源不同可分為根據(jù)形成激發(fā)態(tài)分子的能量來(lái)源不同可分為: :光照發(fā)光、生物發(fā)光、光照發(fā)光、生物發(fā)光、化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光等。等。 光照發(fā)光光照發(fā)光（photoluminescence）是指發(fā)光是指發(fā)光劑（熒

3、光素）經(jīng)短波長(zhǎng)的入射光照射后，電子劑（熒光素）經(jīng)短波長(zhǎng)的入射光照射后，電子吸收能量躍遷到激發(fā)態(tài)，在其回復(fù)至基態(tài)時(shí)，吸收能量躍遷到激發(fā)態(tài)，在其回復(fù)至基態(tài)時(shí)，發(fā)射出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的可見(jiàn)光（熒光）。發(fā)射出較長(zhǎng)波長(zhǎng)的可見(jiàn)光（熒光）。 生物發(fā)光生物發(fā)光（bioluminescence）是指發(fā)生在生物是指發(fā)生在生物體內(nèi)的發(fā)光現(xiàn)象，如螢火蟲的發(fā)光，反應(yīng)底物為體內(nèi)的發(fā)光現(xiàn)象，如螢火蟲的發(fā)光，反應(yīng)底物為螢火蟲熒光素，在熒光素酶的催化下，利用螢火蟲熒光素，在熒光素酶的催化下，利用ATPATP能，生成激發(fā)態(tài)氧化型熒光素，它在回復(fù)基態(tài)時(shí)能，生成激發(fā)態(tài)氧化型熒光素，它在回復(fù)基態(tài)時(shí)多余的能量以光子的形式釋放出來(lái)。多余的能量以光

4、子的形式釋放出來(lái)。 化學(xué)發(fā)光化學(xué)發(fā)光（chemiluminescence）是指伴隨化學(xué)反是指伴隨化學(xué)反應(yīng)過(guò)程所產(chǎn)生的光的發(fā)射現(xiàn)象。某些物質(zhì)應(yīng)過(guò)程所產(chǎn)生的光的發(fā)射現(xiàn)象。某些物質(zhì)( (發(fā)光劑發(fā)光劑) )在化學(xué)反應(yīng)時(shí)，吸收了反應(yīng)過(guò)程中所產(chǎn)生的化學(xué)能，在化學(xué)反應(yīng)時(shí)，吸收了反應(yīng)過(guò)程中所產(chǎn)生的化學(xué)能，使反應(yīng)的產(chǎn)物分子或反應(yīng)的中間態(tài)分子中的電子躍使反應(yīng)的產(chǎn)物分子或反應(yīng)的中間態(tài)分子中的電子躍遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子從激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時(shí)，以發(fā)遷到激發(fā)態(tài)，當(dāng)電子從激發(fā)態(tài)回復(fù)到基態(tài)時(shí)，以發(fā)射光子的形式釋放出能量，這一現(xiàn)象稱為化學(xué)發(fā)光。射光子的形式釋放出能量，這一現(xiàn)象稱為化學(xué)發(fā)光。一、化學(xué)發(fā)光一、化學(xué)發(fā)光 一些化學(xué)反應(yīng)能釋

5、放足夠一些化學(xué)反應(yīng)能釋放足夠的能量把參加反應(yīng)的物質(zhì)激的能量把參加反應(yīng)的物質(zhì)激發(fā)到能發(fā)射光的電子激發(fā)態(tài)，發(fā)到能發(fā)射光的電子激發(fā)態(tài)，若被激發(fā)的是一個(gè)反應(yīng)產(chǎn)物若被激發(fā)的是一個(gè)反應(yīng)產(chǎn)物分子，則這種反應(yīng)過(guò)程叫直分子，則這種反應(yīng)過(guò)程叫直接化學(xué)發(fā)光。反應(yīng)過(guò)程可簡(jiǎn)單地描述如下：接化學(xué)發(fā)光。反應(yīng)過(guò)程可簡(jiǎn)單地描述如下： A A十十B CB C* * C C* * C C hh其中其中為光子，為光子，C C* *表示表示C C處于單線激發(fā)態(tài)。處于單線激發(fā)態(tài)。 若激發(fā)能傳遞到另一個(gè)未參加化學(xué)反應(yīng)若激發(fā)能傳遞到另一個(gè)未參加化學(xué)反應(yīng)的分子的分子D D上，使上，使D D分子激發(fā)到電子激發(fā)態(tài)，分子激發(fā)到電子激發(fā)態(tài)，D D分子

6、從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)發(fā)光，這種過(guò)分子從激發(fā)態(tài)回到基態(tài)時(shí)發(fā)光，這種過(guò)程叫間接化學(xué)發(fā)光。反應(yīng)過(guò)程可表示如下：程叫間接化學(xué)發(fā)光。反應(yīng)過(guò)程可表示如下： A A十十B CB C* * C C* *十十D CD C十十D D* * D D* * D D十十hh 化學(xué)發(fā)光效率決定于生成激發(fā)態(tài)產(chǎn)物分子的化化學(xué)發(fā)光效率決定于生成激發(fā)態(tài)產(chǎn)物分子的化學(xué)激發(fā)效率（學(xué)激發(fā)效率（CE）和激發(fā)態(tài)分子的發(fā)射效率）和激發(fā)態(tài)分子的發(fā)射效率（EM）。）?；瘜W(xué)發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光效率、光輻射的化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的發(fā)光效率、光輻射的能量大小以及光譜范圍，完全由發(fā)光物質(zhì)的性質(zhì)所能量大小以及光譜范圍，完全由發(fā)光物質(zhì)的性質(zhì)所決定，每一個(gè)發(fā)光反應(yīng)都具有其特

7、征性的化學(xué)發(fā)光決定，每一個(gè)發(fā)光反應(yīng)都具有其特征性的化學(xué)發(fā)光光譜和不同的化學(xué)發(fā)光效率。光譜和不同的化學(xué)發(fā)光效率。二、化學(xué)發(fā)光效率二、化學(xué)發(fā)光效率第二節(jié)第二節(jié) 化學(xué)發(fā)光劑和標(biāo)記技術(shù)化學(xué)發(fā)光劑和標(biāo)記技術(shù) 在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終在化學(xué)發(fā)光反應(yīng)中參與能量轉(zhuǎn)移并最終以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為以發(fā)射光子的形式釋放能量的化合物，稱為化學(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物?；瘜W(xué)發(fā)光劑或發(fā)光底物。 一、化學(xué)發(fā)光劑一、化學(xué)發(fā)光劑能作為化學(xué)發(fā)光劑的條件：能作為化學(xué)發(fā)光劑的條件：發(fā)光的量子產(chǎn)率高；發(fā)光的量子產(chǎn)率高；它的物理它的物理- -化學(xué)特性要與被標(biāo)記或測(cè)定的化學(xué)特性要與被標(biāo)記或測(cè)定的 物質(zhì)相匹配；物質(zhì)相匹配；

8、能與抗原或抗體形成穩(wěn)定的偶聯(lián)結(jié)合物；能與抗原或抗體形成穩(wěn)定的偶聯(lián)結(jié)合物； 其化學(xué)發(fā)光常是氧化反應(yīng)的結(jié)果；其化學(xué)發(fā)光常是氧化反應(yīng)的結(jié)果；在所使用的濃度范圍內(nèi)對(duì)生物體沒(méi)有毒性。在所使用的濃度范圍內(nèi)對(duì)生物體沒(méi)有毒性。 直接化學(xué)發(fā)光劑直接化學(xué)發(fā)光劑 直接化學(xué)發(fā)光劑在發(fā)光免疫分析過(guò)程中不需直接化學(xué)發(fā)光劑在發(fā)光免疫分析過(guò)程中不需酶的催化作用，直接參與發(fā)光反應(yīng)，它們?cè)诿傅拇呋饔?，直接參與發(fā)光反應(yīng)，它們?cè)诨瘜W(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的特有基團(tuán)，可直接化學(xué)結(jié)構(gòu)上有產(chǎn)生發(fā)光的特有基團(tuán)，可直接標(biāo)記抗原或抗體。標(biāo)記抗原或抗體。 1. 1. 吖啶酯吖啶酯 在堿性條件下被在堿性條件下被H H2 2O O2 2氧化氧化時(shí)時(shí), ,

9、發(fā)出波長(zhǎng)為發(fā)出波長(zhǎng)為470nm470nm的光，具有很高的發(fā)的光，具有很高的發(fā)光效率，其激發(fā)態(tài)產(chǎn)物光效率，其激發(fā)態(tài)產(chǎn)物N-N-甲基吖啶酮是甲基吖啶酮是該發(fā)光反應(yīng)體系的發(fā)光體。該發(fā)光反應(yīng)體系的發(fā)光體。 2 2三聯(lián)吡啶釕三聯(lián)吡啶釕 三聯(lián)吡啶釕三聯(lián)吡啶釕 RU(bpy)RU(bpy)3 3 2+2+是電是電化學(xué)發(fā)光劑，它和電子供體三丙胺（化學(xué)發(fā)光劑，它和電子供體三丙胺（TPATPA）在）在陽(yáng)電極表面可同時(shí)失去一個(gè)電子而發(fā)生氧化反陽(yáng)電極表面可同時(shí)失去一個(gè)電子而發(fā)生氧化反應(yīng)。應(yīng)。 三聯(lián)吡啶釕三聯(lián)吡啶釕電化學(xué)發(fā)光劑反應(yīng)原理電化學(xué)發(fā)光劑反應(yīng)原理 酶促反應(yīng)發(fā)光劑：酶促反應(yīng)發(fā)光劑： 是利用標(biāo)記酶的催化作用，使發(fā)光

10、劑（底是利用標(biāo)記酶的催化作用，使發(fā)光劑（底 物）發(fā)光，這一類需酶催化后發(fā)光的發(fā)光劑物）發(fā)光，這一類需酶催化后發(fā)光的發(fā)光劑 稱為酶促反應(yīng)發(fā)光劑。稱為酶促反應(yīng)發(fā)光劑。 1魯米諾及其衍生物魯米諾及其衍生物 2AMPPD1 1魯米諾魯米諾魯米諾發(fā)光原理魯米諾發(fā)光原理 魯米諾與氫氧化物反應(yīng)時(shí)生成了一個(gè)雙負(fù)離子（Dianion），它可被過(guò)氧化氫分解出的氧氣氧化，產(chǎn)物為一個(gè)有機(jī)過(guò)氧化物。該過(guò)氧化物很不穩(wěn)定，立即分解出氮?dú)?，生成激發(fā)態(tài)的3-氨基鄰苯二甲酸。激發(fā)態(tài)至基態(tài)轉(zhuǎn)化中，釋放的能量以光子的形式存在，波長(zhǎng)位于可見(jiàn)光的藍(lán)光部分。 魯米諾增強(qiáng)發(fā)光反應(yīng)原理魯米諾增強(qiáng)發(fā)光反應(yīng)原理 2AMPPD3-(2-3-(2-螺

11、旋金剛烷螺旋金剛烷)-4-)-4-甲氧基甲氧基-4-(3“-4-(3“-磷酰氧基磷酰氧基) )苯苯-1,2-1,2-二氧雜環(huán)丁烷二氧雜環(huán)丁烷1. 1. 碳二亞胺（碳二亞胺（EDCEDC）縮合法）縮合法 二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)二、發(fā)光劑的標(biāo)記技術(shù)2. 2. 過(guò)碘酸鈉氧化法過(guò)碘酸鈉氧化法 3 3重氮鹽偶聯(lián)法重氮鹽偶聯(lián)法 4. N-4. N-羥基琥珀酰亞胺活化法羥基琥珀酰亞胺活化法 1 1發(fā)光劑的選擇發(fā)光劑的選擇 2 2被標(biāo)記物質(zhì)的性質(zhì)被標(biāo)記物質(zhì)的性質(zhì) 3 3標(biāo)記方法的選擇標(biāo)記方法的選擇 4 4原料比原料比 5 5標(biāo)記率標(biāo)記率 6 6溫度溫度 7 7純化與保存純化與保存 影響標(biāo)記的因素影響標(biāo)記的因素第

12、三節(jié)第三節(jié) 化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型化學(xué)發(fā)光免疫分析的類型 用吖啶酯直接標(biāo)記抗體用吖啶酯直接標(biāo)記抗體( (抗原抗原) )，與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗，與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原原( (抗體抗體) )發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體- -待測(cè)抗原待測(cè)抗原- -吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)只需加入氧化劑（吖啶酯標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)只需加入氧化劑（H H2 2O O2 2）和）和NaOHNaOH使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、使成堿性環(huán)境，吖啶酯在不需要催化劑的情況下分解、發(fā)光發(fā)光 。 由集光器和光電倍增管接收、記錄單位時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生由集光器和光電倍增管接收、記錄單位

13、時(shí)間內(nèi)所產(chǎn)生的光子能，這部分光的積分與待測(cè)抗原的量成正比，可從的光子能，這部分光的積分與待測(cè)抗原的量成正比，可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測(cè)抗原的含量。標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出待測(cè)抗原的含量。一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析一、直接化學(xué)發(fā)光免疫分析發(fā)光發(fā)光Y YY磁微粒磁微粒被測(cè)抗原被測(cè)抗原+抗體抗體+帶丫啶酯帶丫啶酯標(biāo)記物抗標(biāo)記物抗體體YYYYYYYYYYY沖洗后沖洗后（1 1）加入加入H H2 2O O2 2（pH10）直接化學(xué)發(fā)光的機(jī)理直接化學(xué)發(fā)光的機(jī)理磁微粒模式圖磁微粒模式圖Y YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY

14、YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY YY Y特點(diǎn)特點(diǎn) 抗原和抗體結(jié)合與未結(jié)抗原和抗體結(jié)合與未結(jié)合部分的易分離合部分的易分離磁微粒技術(shù)磁微粒技術(shù) 化學(xué)發(fā)光酶免疫分析化學(xué)發(fā)光酶免疫分析（chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA）是用參與催化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶）是用參與催化某一化學(xué)發(fā)光反應(yīng)的酶如辣根過(guò)氧化物酶（如辣根過(guò)氧化物酶（HRP）或堿性磷酸酶或堿性磷酸酶(ALP)(ALP)來(lái)標(biāo)記抗原或抗來(lái)標(biāo)記抗原或抗體，在與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原體，在與待測(cè)標(biāo)本中相應(yīng)的抗原( (抗體抗體) )發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相

15、包被抗體固相包被抗體- -待測(cè)抗原待測(cè)抗原- -酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后，加入酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，經(jīng)洗滌后，加入底物底物( (發(fā)光劑發(fā)光劑) )，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接，酶催化和分解底物發(fā)光，由光量子閱讀系統(tǒng)接收，光電倍增管將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)并加以放大，再把它們收，光電倍增管將光信號(hào)轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)并加以放大，再把它們傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算出測(cè)定物的濃度。傳送至計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算出測(cè)定物的濃度。二、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析二、化學(xué)發(fā)光酶免疫分析該分析系統(tǒng)采用辣根過(guò)氧化物酶（該分析系統(tǒng)采用辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)）標(biāo)記抗體記抗體(或抗原或抗原)，在與反應(yīng)體系中的待測(cè)標(biāo)，

16、在與反應(yīng)體系中的待測(cè)標(biāo)本和固相載體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包本和固相載體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體被抗體-待測(cè)抗原待測(cè)抗原-酶（酶（HRP）標(biāo)記抗體復(fù)合）標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)加入魯米諾發(fā)光劑、物，這時(shí)加入魯米諾發(fā)光劑、H2O2和化學(xué)發(fā)和化學(xué)發(fā)光增強(qiáng)劑使產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。光增強(qiáng)劑使產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖 該分析系統(tǒng)以堿性磷酸酶該分析系統(tǒng)以堿性磷酸酶 標(biāo)記抗體標(biāo)記抗體(或抗原或抗原)，在與反應(yīng)體系中的待測(cè)標(biāo)本和固相載體發(fā)生在與反應(yīng)體系中的待測(cè)標(biāo)本和固相

17、載體發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體免疫反應(yīng)后，形成固相包被抗體-待測(cè)抗原待測(cè)抗原-酶酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)加入標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)加入AMPPD發(fā)光劑，發(fā)光劑，堿性磷酸酶使堿性磷酸酶使AMPPD脫去磷酸根基團(tuán)而發(fā)光。脫去磷酸根基團(tuán)而發(fā)光。 堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析堿性磷酸酶標(biāo)記的化學(xué)發(fā)光免疫分析堿性磷酸酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖堿性磷酸酶標(biāo)記化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖 分配樣品分配樣品,磁顆粒磁顆粒和試劑和試劑孵育孵育使反應(yīng)物使反應(yīng)物結(jié)合結(jié)合在磁場(chǎng)中在磁場(chǎng)中清洗去除清洗去除未結(jié)合物質(zhì)未結(jié)合物質(zhì)加入加入底物底物產(chǎn)生產(chǎn)生信號(hào)信號(hào)孵育孵育,促使信號(hào)促使信號(hào)的產(chǎn)生的產(chǎn)生信號(hào)信號(hào)檢測(cè)檢測(cè)電化學(xué)發(fā)

18、光免疫分析電化學(xué)發(fā)光免疫分析（electrochemiluminescence immunoassay， ECLIA）是以電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記是以電化學(xué)發(fā)光劑三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記 抗體抗體( (抗原抗原) )，以三丙胺，以三丙胺(TPA)(TPA)為電子供體，為電子供體， 在電場(chǎng)中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學(xué)發(fā)光在電場(chǎng)中因電子轉(zhuǎn)移而發(fā)生特異性化學(xué)發(fā)光 反應(yīng)，它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過(guò)程。反應(yīng)，它包括電化學(xué)和化學(xué)發(fā)光兩個(gè)過(guò)程。 三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析三、電化學(xué)發(fā)光免疫分析在電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)中，磁性微粒為固相載體在電化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)中，磁性微粒為固相載體包被抗體包被抗體( (抗原抗原)

19、)，用三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體，用三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體( (抗原抗原) )，在，在反應(yīng)體系內(nèi)待測(cè)標(biāo)本與相應(yīng)的抗原反應(yīng)體系內(nèi)待測(cè)標(biāo)本與相應(yīng)的抗原 ( (抗體抗體) )發(fā)生免疫反發(fā)生免疫反應(yīng)后，形成磁性微粒包被抗體應(yīng)后，形成磁性微粒包被抗體- -待測(cè)抗原待測(cè)抗原- -三聯(lián)吡啶釕三聯(lián)吡啶釕標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)將上述復(fù)合物吸入流動(dòng)室，同標(biāo)記抗體復(fù)合物，這時(shí)將上述復(fù)合物吸入流動(dòng)室，同時(shí)引人時(shí)引人TPATPA緩沖液。當(dāng)磁性微粒流經(jīng)電極表面時(shí)，被安緩沖液。當(dāng)磁性微粒流經(jīng)電極表面時(shí)，被安裝在電極下面的電磁鐵吸引住，而未結(jié)合的標(biāo)記抗體裝在電極下面的電磁鐵吸引住，而未結(jié)合的標(biāo)記抗體和標(biāo)本被緩沖液沖走。與此同時(shí)電極加壓，啟

20、動(dòng)電化和標(biāo)本被緩沖液沖走。與此同時(shí)電極加壓，啟動(dòng)電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使三聯(lián)吡啶釕和學(xué)發(fā)光反應(yīng)，使三聯(lián)吡啶釕和TPATPA在電極表面進(jìn)行電子在電極表面進(jìn)行電子轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光，光的強(qiáng)度與待測(cè)抗原的濃度轉(zhuǎn)移，產(chǎn)生電化學(xué)發(fā)光，光的強(qiáng)度與待測(cè)抗原的濃度成正比。成正比。電化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖電化學(xué)發(fā)光免疫分析示意圖電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定示意圖電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定示意圖標(biāo)記磁顆粒在電場(chǎng)中發(fā)光工作示意圖標(biāo)記磁顆粒在電場(chǎng)中發(fā)光工作示意圖 1、靈敏度高： 這是CLIA關(guān)鍵的優(yōu)越性，其靈敏度可達(dá)10-16/-21mol/L（RIA為10-12mol/L）。又如化學(xué)發(fā)光底物（如AMPPD）可檢測(cè)出的堿性磷酸酶的濃度比顯

21、色底物要靈敏5105倍。 2線性范圍寬： 發(fā)光強(qiáng)度在46個(gè)量級(jí)之間與測(cè)定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。這與顯色的酶免疫分析吸光度（OD值）為2.0的范圍相比，優(yōu)勢(shì)明顯。也優(yōu)于放射免疫分析技術(shù)。 3、安全性好：到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)CLIA的危害性。 4、試劑有效期長(zhǎng) 有效期可長(zhǎng)達(dá)1年以上，放射免疫分析由于放射性同位素的衰變，一般有效期只有一個(gè)月，而酶免的底物貯存性差，都無(wú)法與化學(xué)發(fā)光相比，有效期長(zhǎng)可以降低使用成本，利于推廣應(yīng)用。 5、光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng) 輝光型（glow type）的CLIA產(chǎn)生的光信號(hào)持續(xù)時(shí)間可達(dá)數(shù)小時(shí)甚至一天。簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)操作及測(cè)量。 6、分析方法簡(jiǎn)便快速 絕大多數(shù)分析測(cè)定均為僅需加入一種試劑（或復(fù)合試劑）的一步模式，容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。 7、結(jié)果穩(wěn)定、誤差小 樣品系直接自己發(fā)光，不需要任何光源照射，免除了各種可能因素（光源穩(wěn)定性、光散射、光波選擇器等）給分析帶來(lái)的影響，使分析結(jié)果靈敏穩(wěn)定可靠。8 8、臨床應(yīng)用廣1）甲狀腺激素 2）生殖激素3）腎上腺/垂體激素 4）貧血因子5）腫瘤標(biāo)記物 6）感染性疾病7）糖尿病 8）心血管系統(tǒng)9）病毒標(biāo)記物 10）骨代謝11）過(guò)敏性疾病 12）治療藥物監(jiān)測(cè)1 1什么是發(fā)光免疫分析？什么是化學(xué)發(fā)光免疫分析？什么是發(fā)光免疫分析？什么是化學(xué)發(fā)光免疫分析？2 2化學(xué)發(fā)光與熒光的