中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原則

1、中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原那么二OO五年三月指導原那么編號：【Z】GPT2-1目錄一、概述1二、根本原貝!J1一實驗管理1二具體問題具體分析1三試驗設計2三、根本內容2一受試物2二實驗動物2三試驗分組2四給藥途徑2五給藥容里2六觀察期限3七觀察指標3八結果處理及分析3四、不同情況的中藥、天然藥物急毒試驗的要求4五、參考文獻5六、附錄5附錄I5急性毒性試驗一般可測定的幾個反響劑量附錄n7急性毒性試驗的一般觀察結果與可能涉及的組織、器官、系統(tǒng)七、著8中藥、天然藥物急性毒性研究技術指導原那么一、概述急性毒性是指動物一次或24小時內屢次接受一定劑量的受試物,在一定時間內出現(xiàn)的毒性反響.其目的

2、是為新藥的研發(fā)提供參考信息.中華人民共和國衛(wèi)生部于1994年頒發(fā)的?中藥新藥研究指南?和國家藥品監(jiān)督治理局199件頒發(fā)的?中藥新藥藥理毒理研究的技術要求?,對于統(tǒng)一、標準中藥急性毒性試驗,推動我國中藥的研究和開發(fā)起到了積極的作用.但隨著新藥研究手段的不斷改良,對中藥、天然藥物熟悉的進一步深入,這些要求越來越表現(xiàn)出它的局限性.多數(shù)中藥、天然藥物作用相對溫和,中藥復方制劑通過合理的配伍,也可能使毒性減輕.多數(shù)中藥、天然藥物新藥,其處方來源有些是古方,有些是醫(yī)院制劑或臨床經驗方,有一定的臨床應用根底.但由于現(xiàn)代中藥、天然藥物制劑運用了大量的新技術甚至新的理論,與傳統(tǒng)中藥相比,物質根底和給藥方式可能有

3、明顯改變,而有些改變帶來的結果又是未知的,特別是當某些成分的含量明顯提升后,其藥理作用可能會明顯增強,毒性反響也可能明顯增大.因此,中藥、天然藥物進行急性毒性試驗研究十分必要.本指導原那么是根據(jù)中藥、天然藥物的特點,結合國際上藥物平安性評價的要求和我國藥物平安性研究現(xiàn)狀而制訂的.本指導原那么適用于中藥、天然藥物的急性毒性試驗.二、根本原那么一實驗治理根據(jù)?中華人民共和國藥品治理法?,急性毒性試驗必須執(zhí)行藥物非臨床研究質量治理標準二具體問題具體分析中藥、天然藥物的情況復雜,本指導原那么不可能涵蓋中藥、天然藥物急性毒性試驗的全部內容,在進行中藥、天然藥物急性毒性試驗時,應遵循具體問題具體分析的原那

4、么.三試驗設計試驗設計應符合隨機、對照、重復的原那么.三、根本內容一受試物受試物應能充分代表臨床試驗受試物和上市藥品,因此建議受試物采用制備工藝穩(wěn)定、符合臨床試用質量標準規(guī)定的中試樣品,并注明受試物的名稱、來源、批號、含量或規(guī)格、保存條件及配制方法等.如不采用中試樣品,應有充分的理由.如果由于給藥容量或給藥方法限制,可采用原料藥進行試驗.溶媒和/或輔料：應提供所用溶媒和/或輔料的批號、規(guī)格、生產廠家.二實驗動物一般應采用哺乳動物,雌雄各半,如臨床為單性別用藥,那么可采用相對應的單一性別的動物.根據(jù)具體情況,可選擇嚙齒類和/或非嚙齒類動物.所用動物應符合國家有關藥物非臨床平安性研究的要求.通常采

5、用健康成年動物進行試驗.如果受試物擬用于兒童,建議考慮采用幼年動物.動物初始體重不應超過或低于平均體重的20%.三試驗分組除設受試物的不同劑量組外,還應設空白和/或陰性對照組.四給藥途徑給藥途徑不同,受試物的吸收率、吸收速度和暴露量會有所不同,為了盡可能觀察到動物的急性毒性反響,可采用不同給藥途徑進行急性毒性試驗,其中一種應與擬臨床給藥途徑一致,如不采用擬臨床途徑給藥,必須充分說明理由.經口給藥時應禁食不禁水.五給藥容量經口給藥,大鼠給藥容量一般每次不超過20ml/kg,小鼠一般每次不超過40ml/kg;其他動物及給藥途徑的給藥容量可參考相關文獻及根據(jù)實際情況確定.六觀察期限一般為14天,如果

6、毒性反響出現(xiàn)較慢,應適當延長觀察時間,如觀察時間缺乏14天,應充分說明理由.七觀察指標包括動物體重變化、飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、死亡情況及中毒反響中毒反響的病癥、嚴重程度、起始時間、持續(xù)時間、是否可逆等.對瀕死及死亡動物應及時進行大體解剖,其他動物在觀察期結束后進行大體解剖,當發(fā)現(xiàn)器官出現(xiàn)體積、顏色、質地等改變時,那么對改變的器官進行組織病理學檢查.八結果處理和分析1、根據(jù)所觀察到的各種反響出現(xiàn)的時間、嚴重程度、持續(xù)時間等,分析各種反響在不同劑量時的發(fā)生率、嚴重程度.根據(jù)觀察結果歸納分析,考察每種反響的劑量-反響及時間-反響關系.2、急性毒性試驗一般測定最大給藥量、最大無毒性反響劑量

7、、最大耐受量、致死量等反響劑量參考附錄一.3、判斷出現(xiàn)的各種反響可能涉及的組織、器官或系統(tǒng)等參考附錄二.4、根據(jù)大體解剖中肉眼可見的病變和組織病理學檢查的結果,初步判斷可能的毒性靶器官.如組織病理學檢查發(fā)現(xiàn)有異常變化,應附有相應的組織病理學照片.組織病理學檢查報告應經檢查者簽名和病理檢查單位蓋章.5、說明所使用的計算方法和統(tǒng)計學方法,必要時提供所選用方法合理性的依據(jù).6、應根據(jù)急性毒性試驗結果,提示在其他平安性試驗、臨床試驗、質量限制方面應注意的問題,同時,結合其他平安性試驗、有效性試驗及質量可控性試驗結果,權衡利弊,分析受試物的開發(fā)前景.四、不同情況的中藥、天然藥物急性毒性試驗的要求由于中藥

8、、天然藥物的特殊性,在具體進行試驗時可參照以下要求進行,如不按以下要求進行,應充分說明理由.1 .未在國內上市銷售的從中藥、天然藥物中提取的有效成分及其制劑,未在國內上市銷售的來源于植物、動物、礦物等藥用物質制成的制劑,未在國內上市銷售的中藥材新的藥用部位制成的制劑,未在國內上市銷售的從中藥、天然藥物中提取的有效部位制成的制劑,未在國內上市銷售的由中藥、天然藥物制成的注射劑.以上情況,由于其物質根底較傳統(tǒng)中藥發(fā)生了明顯改變,或應用經驗較少,一般采用兩種給藥途徑、嚙齒類和非嚙齒類兩種動物,全面考察受試物的急性毒性反響情況,并對結果進行分析,如不按以上要求進行,應說明理由.如臨床為非血管內給藥,那

9、么建議另一給藥途徑采用靜脈給藥方式,以便全面暴露受試物的毒性反響情況.如果由于制劑等原因不能采用靜脈給藥,應充分說明理由,這種情況下,可采用另一種給藥途徑或僅采用一種擬臨床給藥途徑進行毒性反響的觀察.血管內給藥可僅采用擬臨床給藥途徑進行毒性反響的觀察.2 .未在國內上市銷售的由中藥、天然藥物組成的非注射給藥的復方制劑.如該復方制劑處方組成符合中醫(yī)藥理論,有一定的臨床應用經驗,一般情況下,可采用一種動物,按擬臨床給藥途徑進行急性毒性反響的觀察.如該復方制劑為天然藥物復方制劑,建議采用嚙齒類和非嚙齒類兩種實驗動物,按擬臨床給藥途徑進行急性毒性反響的觀察,如不按以上要求進行,應說明其合理性.如以上制

10、劑處方中含有天然藥物、有效成份或化學藥品,那么應當對上述藥用物質進行急性毒性的相互作用研究.3 .改變國內已上市銷售藥品給藥途徑不包括由非注射劑改為注射劑的制劑.可僅采用一種動物,比擬改變前后兩種不同給藥途徑的毒性反響.4 .改變國內已上市銷售藥品劑型或改變工藝但不改變給藥途徑的中藥、天然藥物復方制劑.如制備工藝有質的改變,建議采用一種動物,按擬臨床給藥途徑進行急性毒性的觀察.5 .增加新的適應癥或者功能主治的品種.如需延長用藥周期或增加劑量者,應結合原申報資料及處方組成的情況確定是否需進行急性毒性試驗、急性毒性試驗的內容.五、參考文獻1 .袁伯俊,王治喬.新藥臨床前平安性評價與實踐.北京,軍

11、事醫(yī)學科學出版社,1997:22-422 .CDER,FDA.Guidanceforindustry:singledoseacutetoxicitytestingforpharmaceuticalsFinal.19963 .徐叔云,主編.藥理實驗方法學.北京：人民衛(wèi)生出版社,2002:227-2314 .陳奇,主編.中藥藥理研究方法學.北京：人民衛(wèi)生出版社,1993:112-1195 .LouisCD,HayesAW.Acutetoxicityandeyeirritancy.In:HaysAWedited,Principlesandmethodsoftoxicology.Fourthediti

12、on,2001:853-916六、附錄附錄I急性毒性試驗一般可測定的幾個反響劑量最大給藥量最大給藥量指單次或24小時內屢次23次給藥所采用的最大給藥劑量.最大給藥量試驗是指在合理的給藥濃度及合理的給藥容量的條件下,以允許的最大劑量給予實驗動物,觀察動物出現(xiàn)的反響.最大無毒性反響劑量最大無毒性反響劑量,是指受試物在一定時間內,按一定方式與機體接觸,用靈敏的現(xiàn)代檢測方式未發(fā)現(xiàn)損害作用的最高劑量.最大耐受量最大耐受量是指動物能夠耐受的而不引起動物死亡的最高劑量.從獲取平安性信息的角度考慮,有時對實驗動物的異常反響和病理過程的觀察、分析,較以死亡為觀察指標更有毒理學意義.致死量致死量是指受試物引起動物

13、死亡的劑量,測定的致死量主要有最小致死量、半數(shù)致死量.在測定致死量的同時,應仔細觀察動物死亡前的中毒反響情況.一般情況下,應測定最大無毒性反響劑量和最大耐受量或/和最小致死量或/和半數(shù)致死量.如只能測定最大給藥量,可不必進行其他毒性反響劑量的測定.附錄n急性毒性試驗的一般觀察結果與可能涉及的組織、器官、系統(tǒng)觀察指征可能涉及的組織、器官、系統(tǒng)I.鼻孔呼吸阻塞,呼吸頻率和深度改變,體表顏色改變.A.呼吸困難：呼吸困難或費力,喘息,通常呼吸頻率減慢1.腹式呼吸：隔膜呼吸,吸氣時腹部明顯塌陷呼吸中樞,肋間肌麻痹,膽堿能神經麻痹2.喘息：用力深吸氣,有明顯的吸氣聲呼吸中樞,肺水腫,呼吸道分泌物蓄積,膽堿

14、功能增強B.呼吸暫停：用力呼吸后出現(xiàn)短暫的呼吸停止呼吸中樞,肺心功能不全C.紫綃：尾部、口和足墊呈現(xiàn)藍紫色肺心功能缺乏,肺水腫D.呼吸急促：呼吸快而淺呼吸中樞刺激,肺心功能不全E.r鼻分泌物：紅色或無色肺水腫,出血II.運動功能：運動頻率和特點的改變.A.自發(fā)活動、探究、梳理毛發(fā)、運動增加或減少軀體運動,CNSB.困倦：動物出現(xiàn)昏睡,但易警醒而恢復正常活動睡眠中樞C.正常反射消失,翻正反射消失CNS,感官,神經肌肉D.麻醉：正常反射和疼痛反射消失CNS,感官E.僵?。罕３衷藙莶蛔僀NS,感官,神經肌肉,自主神經F.運動失調：動物活動時運動不協(xié)調,但無痙攣、局部麻痹或僵直CNS,感官,自主神經

15、G.異常運動：痙攣,足尖步態(tài),踏步、忙碌、低伏CNS,感官,神經肌肉H.俯臥：不移動,腹部貼地CNS,感官,神經肌肉I.震顫：包括四肢和全身的顫抖和震顫神經肌肉,CNSJ.肌束震顫：背部、肩部、后肢和足部肌肉的運動神經肌肉,CNS,自主神經iii.驚厥6M!：隨意肌明顯的無意識收縮或驚厥性收縮A.陣攣性抽搐：肌肉收縮和松弛交替性痙攣CNS,呼吸衰竭,神經肌肉,自主神經B.強直性抽搐：肌肉持續(xù)性收縮,后肢僵硬性伸展CNS,呼吸衰竭,神經肌肉,自主神經C.強直性-陣攣性抽搐：兩種類型抽搐交替出現(xiàn)CNS,呼吸衰竭,神經肌肉,自主神經D.昏厥性抽搐：通常是陣攣性抽搐并伴有喘息和紫甜CNS,呼吸衰竭,神

16、經肌肉,自主神經E.角弓反張：僵直性發(fā)作,背部弓起,頭抬起向后CNS,呼吸衰竭,神經肌肉,自主神經IV.反射A.角膜眼瞼閉合：接觸角膜導致眼瞼閉合感官,神經肌肉B.根本反射：輕輕敲擊外耳內側,導致外耳扭動感官,神經肌肉C.正位反射：翻正反射CNS,感官,神經肌肉D.牽張反射：后肢從某一外表邊緣掉下時收回的水平感官,神經肌肉E.對光反射瞳孔反射；見光瞳孔收縮感官,神經肌肉,自主神經F.驚跳反射：對外部刺激如觸摸、噪聲的反響感官,神經肌肉7觀察指征可能涉及的組織、器官、系統(tǒng)V.眼檢指征A.流淚：眼淚過多,淚液清澈或有色自主神經B.縮瞳：無論有無光線,瞳孔縮小自主神經C.散瞳：無論有無光線,瞳孔擴大

17、自主神經D.眼球突出：眼眶內眼球異常突出自主神經E.上瞼下垂：上瞼下垂,刺激后動物不能恢復正常自主神經F.血淚：眼淚呈紅色自主神經,出血,感染G.上瞼松弛自主神經H.結膜渾濁,虹膜炎,結膜炎眼睛刺激激惹VI.心血管指征A.心動過緩：心率減慢自主神經,肺心功能低下B.心動過速：心率減慢自主神經,肺心功能低下C.血管擴張：皮膚、尾、舌、耳、足墊、結膜、陰囊發(fā)紅,體熱自主神經、CNS、心輸出量增加,環(huán)境溫度局D.血管收縮：皮膚蒼白,體涼自主神經、CNS、心輸出量降低,環(huán)境溫度低E.心律不齊：心律異常CNS、自主神經、肺心功能低下,心肌損傷VII.唾液分泌A.唾液分泌過多：口周毛潮濕自主神經VIII.豎毛A.毛囊豎毛肌