人參中人參皂苷的提取分離及鑒定

1、實(shí)驗(yàn)六 人參中人參皂苷的提取分離及鑒定人參為五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Mey. )的干燥根，是傳統(tǒng)名貴中藥，始載于我國第一部本草專著神農(nóng)本草經(jīng)。其栽培者稱為 “園參 ”，野生者稱為“山參 ”。人參具有大補(bǔ)元?dú)?、?fù)脈固脫、補(bǔ)脾益肺、生津、 安神之功能，用于體虛欲脫、肢冷脈微、脾虛食少、肺虛喘咳、津傷口渴、內(nèi)熱消渴、久病虛羸、驚悸失眠、陽痿宮冷、心力衰竭、心源性休克等的治療。人參的化學(xué)成分很復(fù)雜，有皂苷、揮發(fā)油、糖類及維生素等。經(jīng)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)和藥理研究證明，人參皂苷為人參的主要有效成分，它具有人參的主要生理活性。人參的根、莖、葉、花及果實(shí)中均含有多種人參皂苷(ginsenos

2、ides)。到目前為止，文獻(xiàn)報(bào)道從人參根及其它部位已分離確定化學(xué)結(jié)構(gòu)的人參皂苷有人參皂苷-Ro、 -Ra1、 -Ra2 、 -Rb1、 -Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3等50 余種人參皂苷。根據(jù)皂苷元的結(jié)構(gòu)可分為A、 B、 C三種類型：人參二醇型-A型，人參三醇型-B 型，齊墩果酸型-C 型。 A 型和 B 型皂苷均屬四環(huán)三萜皂苷，其皂苷元為達(dá)馬烷型四環(huán)三萜，A 型皂甙元稱為20(S)-原人參二醇20( S) -protopanaxadiol。 B 型皂甙元稱為20(S)-原人參三醇20( S) -protopana

3、xatriol。 C 型皂苷則是齊墩果烷型五環(huán)三萜的衍生物，其皂苷元是齊墩果酸(oleanolic acid)。11目的要求 1. 通過實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步掌握三萜類化合物的理化性質(zhì)及提取、分離和檢識(shí)方法。2. 學(xué)習(xí)和掌握簡單回流提取法、兩相溶劑萃取法、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器、大孔樹脂柱色譜等基本實(shí)驗(yàn)操作技能。實(shí)驗(yàn)原理人參的主要成分為人參皂苷，總皂苷含量約4，人參皂苷大多數(shù)是白色無定形粉末或無色結(jié)晶，味微甘苦，具有吸濕性。人參皂苷易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等親脂性有機(jī)溶劑。水溶液經(jīng)振搖后可產(chǎn)生大量的泡沫。人參總皂苷無溶血作用，分離后，B 型和 c 型人參皂苷有顯著的溶血作用，

4、而A型人參皂苷有抗溶血作用。人參中除含有皂苷外，還含有脂溶性成分如揮發(fā)油，脂肪、甾體化合物及大量的糖類等，這些類成分對(duì)人參皂苷的分離和精制有干擾，所以必須除去，方可得到純度較高的皂苷。本實(shí)驗(yàn)以人參根為原料提取分離人參總皂苷，利用人參總皂苷易溶于甲醇，不溶于乙醚性質(zhì)采用溶劑法進(jìn)行初步提取去雜；然后根據(jù)皂苷在含水丁醇中有較好的溶解度的性質(zhì)采用萃取法進(jìn)行分離；再用沉淀法或大孔吸附樹脂法進(jìn)行進(jìn)一步分離精制；對(duì)提出的總皂苷采用檢測(cè)三萜類化合物通性的理化檢識(shí)方法泡沫試驗(yàn)及顯色反應(yīng)進(jìn)行初步定性檢識(shí)；最后根據(jù)人參總皂苷中各單體皂苷分子結(jié)構(gòu)中糖基個(gè)數(shù)和羥基數(shù)不同而極性大小不同的性質(zhì)，通過薄層色譜法對(duì)人參總皂苷進(jìn)

5、一步分離和專屬定性檢識(shí)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 一、 人參總皂苷的提取分離任選一種方案方案 （1）人參根粗粉（60 目 10g ）用濾紙筒包好，置索氏提取器中，加甲醇加熱回流提取至三氯化銻氯仿飽和溶液反應(yīng)呈陰性，提取液減壓回收甲醇用 10 倍量蒸餾水溶解水溶液用乙醚在分液漏斗中，振搖脫脂4 次乙醚液（脂類）水層用水飽和的正丁醇萃取6 次，合并正丁醇液減壓回收正丁醇，蒸干殘留物（總皂苷粗品）方案 （2）人參根粗粉（60 目 10g ）用濾紙筒包好，置索氏提取器中，加 10 倍量乙醚回流脫脂至無色，殘?jiān)蛹状技訜峄亓魈崛≈寥然R氯仿飽和溶液反應(yīng)呈陰性甲醇提取液減壓回收甲醇浸膏用 10 倍量蒸餾水溶解水溶液用水

6、飽和的正丁醇萃取6 次，合并正丁醇液人參總皂苷的分離精制將人參總皂苷粗品分為兩份方法（ 1 ）沉淀法1 份總皂苷粗品甲醇溶解，傾入約10 倍量丙酮，不斷攪拌，析出黃白色沉淀母液過濾回收溶劑，用少量甲醇溶解，再傾入約10 倍量丙酮總皂苷黃白色沉淀合并，減壓60 下真空干燥，稱重計(jì)算收率精制總皂苷2）大孔樹脂柱色譜法 大孔樹脂色譜是近年來用于分離和富集天然化合物的一種常用先用水洗脫除去糖和其他然后改用不同濃度的甲醇或乙醇進(jìn)行梯度洗脫。極性大極性小的皂苷則被高濃度1 份總皂苷粗品用少量水溶解，加樣于處理好的D101 型大孔樹脂柱上，吸附1 小時(shí)后，用3 倍柱體積蒸餾水洗脫除雜質(zhì)繼用60% 乙醇洗脫至

7、三氯化銻氯仿飽和溶液反應(yīng)呈陰性洗脫液減壓回收溶劑60 下真空干燥，稱重計(jì)算收率精制總皂苷三、人參皂苷的鑒定（一）理化檢識(shí)1 泡沫試驗(yàn)取人參根粗粉1g，加水浸泡（1： 10） 1 小時(shí)或置80 水浴上30 分鐘，過濾得濾液供以下試驗(yàn)。取供試液2ml 于試管中，緊塞試管口后猛力振搖，試管內(nèi)液體則。注：含蛋白質(zhì)和粘液質(zhì)的水溶液雖也能產(chǎn)生泡沫，但不持久，放2. 顯色反應(yīng)（ 1）醋酐濃硫酸反應(yīng)（Liebermann-Burchard反應(yīng)）取樣品適量，加冰醋酸0.5ml 使溶解，續(xù)加醋酐0.5ml 攪勻，再1 滴濃硫酸，觀察并記錄現(xiàn)象。（ 2）三氯甲烷濃硫酸反應(yīng)（Salkowski 反應(yīng)）取樣品適量，加三

8、氯甲烷1ml 使溶解， 沿試管壁加等量的濃硫酸，分別置可見光及紫外燈下，觀察并記錄現(xiàn)象。（ 3）五氯化銻反應(yīng)（Kahlenberg reaction）取樣品適量，加五氯化銻的氯仿溶液反應(yīng)呈紫色?；?qū)悠返穆确禄虼既芤狐c(diǎn)于濾紙上，噴20五氯化銻的氯仿溶液（或不含乙醇和水的三氯化銻飽和的氯仿溶液）， 干燥后60 70加熱，顯色， 觀察并記錄現(xiàn)象。（二 ）色譜檢識(shí)1. 薄層色譜吸附劑：硅膠-CMC 薄層板樣品溶液：稱取由沉淀法及大孔吸附樹脂法制得的精制總皂苷各一份，加甲醇制成1ml 含 2mg的樣品溶液。對(duì)照品溶液：稱取人參皂苷Rb1、 Re、 Rg1 對(duì)照品，加甲醇制成 1ml 含 2mg的對(duì)照品

9、混合溶液。對(duì)照藥材溶液：取人參對(duì)照藥材粉末1 g，加氯仿40ml，置水浴上回流1 小時(shí)，棄去氯仿液，藥渣揮干殘存溶劑，加水0.5ml 拌勻濕潤后，加水飽和的正丁醇10ml，超聲處理30 分鐘，吸取上清液，加氨試液三倍量，搖勻，放置分層，取上層液蒸干加甲醇溶解，使成1ml ，作為對(duì)照藥材溶液。展開劑：A. 氯仿-甲醇-水 （65： 35： 10）10以下放置后的下層溶液;B. 氯仿-乙酸乙酯-甲醇 -水 （15： 40： 22： 10） 10以下放置后的下層溶液;顯色劑：10%硫酸乙醇溶液顯色方式：10% 硫酸乙醇溶液噴霧后，105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。分別置日光及紫外燈（365nm） 下檢視 .

10、實(shí)驗(yàn)說明及注意事項(xiàng)1 萃取操作時(shí)，注意振搖不能過度劇烈，以防產(chǎn)生乳化現(xiàn)象。2在使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器進(jìn)行甲醇提取液減壓濃縮時(shí)，因含皂苷易產(chǎn)生大量泡沫發(fā)生倒吸現(xiàn)象。故應(yīng)注意觀察隨時(shí)調(diào)整水浴溫度及旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器轉(zhuǎn)速，避免事故的發(fā)生。3在連續(xù)回流提取過程中，水浴溫度不宜過高，應(yīng)與溶劑沸點(diǎn)相適應(yīng)。此外可加快冷凝水的流速，以增加冷凝效果。4回收乙醚的蒸餾操作，不必另換蒸餾裝置。只將索氏提取器中的濾紙筒取出，再照原樣裝好，繼續(xù)加熱回收燒瓶中的溶劑，待溶劑液面增加至高虹吸管頂部彎曲處1cm 處，暫?；厥眨∠绿崛∑?，將其中乙醚移置另外容器中，如此反復(fù)操作，即可完成回收乙醚的操作。5在連續(xù)提取過程中，欲檢查有效成分是否提取完全，可取提取器中提取液數(shù)滴，滴于白瓷皿中，揮散溶劑，觀察有無殘留物，或滴于濾紙片上，然后進(jìn)行醋酐濃硫酸反應(yīng)或三氯化銻氯仿飽和溶液反應(yīng)。若反應(yīng)呈陰性，示已提盡。6大孔樹脂在使用前應(yīng)按說明書處理好，加乙醇浸泡24 h 后，再用乙醇洗脫至流出液與3 倍水混合后不呈混濁，繼續(xù)用蒸餾水洗至無醇為止備用。思考題1 三萜皂苷可用哪些反應(yīng)進(jìn)行鑒定？如何與甾體皂苷區(qū)別？2試設(shè)計(jì)一種從人參莖葉為原料提取分離人