醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課教學(xué)大綱.

1、醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課教學(xué)大綱供臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)七年制使用前言細(xì)胞生物學(xué)是生命科學(xué)中最重要的根底學(xué)科和前沿學(xué)科,細(xì)胞生物學(xué)課程是培養(yǎng)醫(yī)學(xué)生根底理論知識(shí)、實(shí)踐水平、創(chuàng)新水平的關(guān)鍵環(huán)節(jié).優(yōu)秀的細(xì)胞生物學(xué)課程高等醫(yī)學(xué)院校課程體系建設(shè)的重要內(nèi)容.結(jié)合汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院人才培養(yǎng)目標(biāo),我們將鍛造理論與實(shí)踐、臨床與根底重組滲透,水平培養(yǎng)貫穿始終的、特色鮮明的醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)課程體系作為本課程建設(shè)的目標(biāo),力爭(zhēng)通過本課程的學(xué)習(xí)使臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)學(xué)生掌握細(xì)胞生物學(xué)的根本原理、研究方法,掌握相關(guān)疾病的分子機(jī)制,提升科學(xué)素養(yǎng),為其今后的終身學(xué)習(xí)、臨床實(shí)踐、科學(xué)研究奠定良好基礎(chǔ).實(shí)驗(yàn)課教學(xué)是理論教學(xué)的重要補(bǔ)充,是人才培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié).在

2、實(shí)驗(yàn)教學(xué)上我們以科研與教學(xué)相結(jié)合、科研應(yīng)用于教學(xué)為指導(dǎo)思想,堅(jiān)持實(shí)驗(yàn)內(nèi)容的先進(jìn)性和綜合性,創(chuàng)造條件改善和提升學(xué)生的動(dòng)手水平,為培養(yǎng)學(xué)生根本科研技能奠定根底.力爭(zhēng)通過實(shí)驗(yàn)課學(xué)習(xí)使學(xué)生掌握醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)的根本理論和實(shí)驗(yàn)技能,提升學(xué)生獨(dú)立分析問題和解決問題的水平,培養(yǎng)學(xué)生學(xué)習(xí)的主動(dòng)性,使其具備一定的科研思維和科研水平,提升科學(xué)素養(yǎng),為其今后的終身學(xué)習(xí)、臨床實(shí)踐和科學(xué)研究奠定良好根底.七年制細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程包括根底性實(shí)驗(yàn)-綜合設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)-科研活動(dòng)三個(gè)層次的實(shí)驗(yàn)課課程體系.通過該課程體系對(duì)七年制學(xué)生實(shí)驗(yàn)水平進(jìn)行全程培養(yǎng).本教學(xué)大綱規(guī)定根底性實(shí)驗(yàn)和綜合設(shè)計(jì)性性實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容.科研活動(dòng)的內(nèi)容和要求由學(xué)生和教師

3、討論后自行確定.七年制醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課內(nèi)容實(shí)驗(yàn)工程名稱學(xué)時(shí)層次教學(xué)手段實(shí)驗(yàn)一數(shù)碼互動(dòng)系統(tǒng)使用及細(xì)胞根本形態(tài)觀察4根底實(shí)驗(yàn)數(shù)碼互動(dòng)系統(tǒng)講授示教討論實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞生理活動(dòng)觀察4根底實(shí)驗(yàn)數(shù)碼互動(dòng)系統(tǒng)多媒體演示實(shí)驗(yàn)三細(xì)胞染色體標(biāo)本制備與觀察4根底實(shí)驗(yàn)講授、示教討論數(shù)碼互動(dòng)系統(tǒng)講授、示教討論實(shí)驗(yàn)四細(xì)胞的原代與傳代培養(yǎng)6根底實(shí)驗(yàn)數(shù)碼互動(dòng)系統(tǒng)多媒體演示實(shí)驗(yàn)五細(xì)胞組分的別離與鑒定>12綜合實(shí)驗(yàn)講授、示教討論討論多媒體實(shí)驗(yàn)六細(xì)胞骨架對(duì)細(xì)胞、細(xì)胞器的影響>12綜合實(shí)驗(yàn)討論多媒體實(shí)驗(yàn)七藥物對(duì)細(xì)胞增殖與凋亡的影響>12綜合實(shí)驗(yàn)討論多媒體實(shí)驗(yàn)八定位信號(hào)與蛋白亞細(xì)胞定位>12綜合實(shí)驗(yàn)討論多媒體大學(xué)

4、生科研活動(dòng)工程科研活動(dòng)綜合應(yīng)用多種教學(xué)手根底實(shí)驗(yàn)一數(shù)碼互動(dòng)系統(tǒng)使用及細(xì)胞根本形態(tài)觀察1 .實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)掌握顯微鏡的結(jié)構(gòu)和性能、使用方法和保護(hù)方法.(2)掌握Motic數(shù)碼互動(dòng)系統(tǒng)的使用.(3)觀察、了解真核細(xì)胞的根本形態(tài)結(jié)構(gòu),了解細(xì)胞所處位置與形態(tài),功能的關(guān)系.(4)掌握蛙的解剖和血涂片制備方法.2 .實(shí)驗(yàn)用品(1)材料和標(biāo)本：雄蛙1只,人血液1滴.(2)器材和儀器：載片10張、蓋片3張、吸水紙、手術(shù)器材1套、解剖盤1個(gè)(3)試劑：1%甲苯胺蘭、Ringer's液(兩棲類用)3 .實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)制備雄蛙脊髓壓片觀察脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)細(xì)胞.(2)雄蛙骨骼肌細(xì)胞的剝離與觀察(3)雄蛙肝臟壓

5、片的制備與觀察(4)雄蛙血涂片的制備與觀察(5)人血涂片的制備與觀察(6)人口腔上皮細(xì)胞標(biāo)本的制備與觀察4 .思考總結(jié)總結(jié)動(dòng)物細(xì)胞形態(tài)與其功能的關(guān)系.根底實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞生理活動(dòng)觀察1 .實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)通過制片與觀察加深理解細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、吞噬等生理活動(dòng).(2)掌握小白鼠的解剖方法2 .實(shí)驗(yàn)用品(1)材料和標(biāo)本：雄蛙、小白鼠、l%雞血懸液、6%淀粉肉湯、草履蟲.(2)器材和儀器：光鏡、2ml注射器、載玻片、蓋玻片、解剖器材、滴管、試管、玻璃片、黑紙.(3)試劑：0.3%臺(tái)盼蘭、1%剛果紅.3 .實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)小白鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬活動(dòng)的觀察(2)蛙口腔口腔上頜粘膜上皮細(xì)胞纖毛和精子鞭毛運(yùn)動(dòng)觀察(3)草履

6、蟲纖毛運(yùn)動(dòng)及吞噬泡的觀察4 .思考總結(jié)(1)小鼠巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)如何解釋細(xì)胞內(nèi)臺(tái)盼蘭的著色.(2)總結(jié)鞭毛與纖毛運(yùn)動(dòng)的異同.(3)結(jié)合吞噬泡形成和消失的過程,說明溶酶體的形成過程.根底實(shí)驗(yàn)三細(xì)胞染色體標(biāo)本制備與觀察1 .實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)掌握小鼠骨髓細(xì)胞染色體制備方法.(2)掌握細(xì)胞骨架的功能及影響因素.2 .實(shí)驗(yàn)用品(1)材料：小白鼠器材：解剖扳、解剖剪、大小銀子、吸管、離心管、注射器、離心機(jī)、培養(yǎng)皿、恒溫水浴鍋、量筒、預(yù)冷載玻片、灑精燈、普通天平、香柏油、二甲苯、擦鏡紙.試劑：200聞/ml秋水仙素、0.075mol/LKCl低滲液、甲醇、冰乙酸,pH6.8磷酸緩沖液,Giemsa原液,生理鹽

7、水.3 .實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)小鼠骨髓細(xì)胞有絲分裂抑制(2)制備小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本(3)比擬觀察分析小鼠骨髓細(xì)胞和人正常細(xì)胞染色體的結(jié)構(gòu)差異.4 .思考總結(jié)(1)結(jié)合實(shí)驗(yàn)說明選擇什么樣的材料及如何制備染色體(2)細(xì)胞骨架的功能根底實(shí)驗(yàn)四細(xì)胞的原代與傳代培養(yǎng)1 .實(shí)驗(yàn)?zāi)康?1)掌握哺乳動(dòng)物細(xì)胞的原代培養(yǎng)與傳代培養(yǎng)的根本操作過程.(2)掌握細(xì)胞培養(yǎng)的根本條件2 .實(shí)驗(yàn)用品(1)材料和標(biāo)本：新生大鼠、HeLa細(xì)胞(人宮頸癌細(xì)胞)(2)器材和儀器：手術(shù)器械、平皿、培養(yǎng)瓶、吸管、離心管(滅菌后備用)、酒精燈、燒杯、超凈工作臺(tái)、二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡.試劑：含有5%小牛血清的MEM培養(yǎng)液、0.01mol

8、/LPBS,0.25%胰蛋白酶-0.02%EDTA混合消化液、75%乙醇.3 .實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)原代細(xì)胞培養(yǎng)(2)傳代細(xì)胞培養(yǎng)4 .思考總結(jié)(1)器材及液體的準(zhǔn)備和無菌操作的考前須知(2)原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞培養(yǎng)有哪些區(qū)別(3)總結(jié)一下你自己的經(jīng)驗(yàn),怎樣才能既迅速,又保證無菌操作.綜合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)一細(xì)胞組分的別離與鑒定1 .實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)(1)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞核、胞質(zhì)溶膠、線粒體、溶酶體等細(xì)胞器的分級(jí)別離.(2)鑒定出不同細(xì)胞組分2 .實(shí)驗(yàn)要求(1)根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)理論課所學(xué)知識(shí),就以上實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)出實(shí)驗(yàn)方案(包括所選用材料、實(shí)驗(yàn)技術(shù)、方法).(2)實(shí)驗(yàn)方案須交指導(dǎo)教師修改后,然后開始實(shí)驗(yàn).(3)實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)

9、格遵守操作規(guī)程,獨(dú)立完成.(4)以小組為單位整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),按研究論文寫作要求撰寫論文.3 .學(xué)習(xí)目標(biāo)(1)掌握通過分級(jí)別離細(xì)胞組分的方法.掌握細(xì)胞勻漿、差速離心、密度梯度離心、SDS-PAGE和Western印跡方法.(3)掌握不同細(xì)胞組分的分子標(biāo)記及鑒定方法4 .實(shí)驗(yàn)用品材料：小鼠肝臟,Hela細(xì)胞(2)器材和儀器：組織勻漿器、超聲細(xì)胞破碎儀、臺(tái)式冷凍離心機(jī)、電泳槽、電泳儀、電轉(zhuǎn)儀、天平、光學(xué)顯微鏡及其他耗材試齊I：分級(jí)別離試劑：生理鹽水、0.25mol/L蔗糖溶液、0.34mol/L蔗糖溶液、51g/L蔗糖溶液、51.5g/L蔗糖溶液.SDS-PAGE試齊1J:30%PAGE、1MTris

10、-HCl(pH6.8)、l.5MTris-HCl(pH8.8)、10%SDS、10%過硫酸錢、考馬斯亮藍(lán)R250、甲醇、冰醋酸、去離子水、TEMED、蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物.Western印跡試劑：actin、histone!cytochromeC等抗體、轉(zhuǎn)移緩沖液、HRP標(biāo)記二抗、羊血清、0.5%麗春紅S染料溶液、印跡緩沖液(TTBS)、封閉緩沖液、硝酸纖維薄膜、3M濾紙等.5 .實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)胞質(zhì)溶膠、細(xì)胞核、線粒體、溶酶體、過氧化物酶體的分級(jí)別離.(2)胞質(zhì)溶膠、細(xì)胞核、線粒體、溶酶體、過氧化物酶體鑒定及純度分析.6 .思考總結(jié)(1)如何保持分級(jí)別離產(chǎn)物的產(chǎn)量和純度.(2)細(xì)胞組分的鑒定

11、可以采用哪些方法.(3)細(xì)胞組分的分級(jí)別離實(shí)驗(yàn)可用于那些科研工程的研究.綜合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)二細(xì)胞骨架對(duì)細(xì)胞影響的觀察1 .實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)(1)觀察微絲、微管、中間纖維在細(xì)胞內(nèi)的結(jié)構(gòu)、分布(2)鑒定藥物對(duì)微絲、微管、中間纖維的作用性質(zhì)(3)鑒定微絲、微管、中間纖維對(duì)細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞核功能的影響(4)鑒定細(xì)胞骨架對(duì)基因表達(dá)影響2 .實(shí)驗(yàn)要求(1)根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)理論課所學(xué)知識(shí),就以上實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)出實(shí)驗(yàn)方案(包括所選用材料、實(shí)驗(yàn)技術(shù)、方法).(2)實(shí)驗(yàn)方案須交指導(dǎo)教師修改后,然后開始實(shí)驗(yàn).(3)實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,獨(dú)立完成.(4)以小組為單位整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),按研究論文寫作要求撰寫論文.3 .學(xué)習(xí)目標(biāo)(1)掌

12、握微絲、微管、細(xì)胞核、線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的觀察方法(2)掌握細(xì)胞松弛素B、秋水仙素對(duì)細(xì)胞骨架的作用性質(zhì)(3)掌握免疫熒光顯微鏡技術(shù)4 .實(shí)驗(yàn)用品材料：小鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3(2)器材和設(shè)備：CO2培養(yǎng)箱、熒光顯微鏡、相差顯微鏡、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴箱、微量加樣器、臺(tái)式冷凍離心機(jī)、PCR儀、電泳槽、電泳儀、電轉(zhuǎn)儀、天平、凝膠成像分析系統(tǒng)及其他耗材試齊I：細(xì)胞骨架觀察試劑：actin、tubulin、laminA抗體、Rhodamine123抗、FITC-二抗、線粒體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)活體熒光染料、DAPI、細(xì)胞松弛素B、秋水仙素.SDS-PAGE試齊1J:30%PAGE、1MTris-HCl(pH6.8)、

13、l.5MTris-HCl(pH8.8)、10%SDS、10%過硫酸錢、考馬斯亮藍(lán)R250、甲醇、冰醋酸、去離子水、TEMED、蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物.Western印跡試劑：actin、histone!cytochromeC等抗體、轉(zhuǎn)移緩沖液、HRP標(biāo)記二抗、羊血清、0.5%麗春紅S染料溶液、印跡緩沖液(TTBS)、封閉緩沖液、硝酸纖維薄膜、3M濾紙等.RT-PCR試劑：Trizol、Qiagen逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、PCR引物瓊脂糖凝膠電泳試劑：瓊脂糖、TAE、EB染料1國/小加樣緩沖液蛋白濃度測(cè)定試劑：BCA試劑5 .實(shí)驗(yàn)內(nèi)容細(xì)胞松弛素B、秋水仙素小鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3微絲、微管、細(xì)胞核、線粒

14、體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)分布的影響.(2)細(xì)胞松弛素B、秋水仙素小鼠成纖維細(xì)胞NIH3T3細(xì)胞細(xì)胞骨架成分的作用性質(zhì)：結(jié)合性質(zhì)、是否導(dǎo)致細(xì)胞骨架成分降解.(3)細(xì)胞骨架變化對(duì)基因表達(dá)的影響：mRNA水平、蛋白水平6 .思考總結(jié)(1)如何獲得清楚的熒光顯微鏡照片(2)本實(shí)驗(yàn)工程可用于那些科研工程的研究綜合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)三藥物對(duì)細(xì)胞增殖與凋亡的影響1 .實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)(1)證實(shí)放線菌素D對(duì)月中瘤細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用(2)區(qū)分細(xì)胞群中正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞、壞死細(xì)胞2 .實(shí)驗(yàn)要求(1)根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)理論課所學(xué)知識(shí),就以上實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)出實(shí)驗(yàn)方案(包括所選用材料、實(shí)驗(yàn)技術(shù)、方法).(2)實(shí)驗(yàn)方案須交指導(dǎo)教師修改后,然后開始實(shí)驗(yàn).(3)

15、實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,獨(dú)立完成.(4)以小組為單位整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),按研究論文寫作要求撰寫論文.3 .學(xué)習(xí)目標(biāo)(1)掌握細(xì)胞凋亡的特征(2)掌握DNAladder、caspase舌化、DNA缺口、細(xì)胞核形態(tài)變化、細(xì)胞膜變化等凋亡細(xì)胞的鑒定方法.4 .實(shí)驗(yàn)用品(1)器材和設(shè)備：CO2培養(yǎng)箱、熒光顯微鏡、相差顯微鏡、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴箱、微量加樣器、臺(tái)式冷凍離心機(jī)、電泳槽、電泳儀、電轉(zhuǎn)儀、天平及其他耗材試齊細(xì)胞凋亡鑒定：DAPI、Hochest33258PI、AnnexinV、caspase9抗體、HRP-二抗、酚氯仿、TUNEL試齊1J.SDS-PAGE試齊1J:30%PAGE、1MTri

16、s-HCl(pH6.8)、l.5MTris-HCl(pH8.8)、10%SDS、10%過硫酸錢、考馬斯亮藍(lán)R250、甲醇、冰醋酸、去離子水、TEMED、蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)參照物.Western印跡試劑：caspas巡抗體、轉(zhuǎn)移緩沖液、HRP標(biāo)記二抗、羊血清、0.5%麗春紅S染料溶液、印跡緩沖液(TTBS)、封閉緩沖液、硝酸纖維薄膜、3M濾紙等.瓊脂糖凝膠電泳試劑：瓊脂糖、TAE、EB染料1國/小加樣緩沖液蛋白濃度測(cè)定試劑：BCA試劑5 .實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(1)放線菌素D對(duì)Hela細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)作用：濃度、時(shí)間DNAladder、TUNEL、細(xì)胞核、細(xì)胞膜變化、caspase舌化等鑒定細(xì)胞凋亡狀06 .思

17、考總結(jié)本實(shí)驗(yàn)工程可用于那些科研工程的研究綜合設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)四定位信號(hào)與NRDR蛋白亞細(xì)胞定位影響1 .實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)(1)將外源基因?qū)氲郊?xì)胞內(nèi)(2)鑒定外源基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)(3)鑒定定位信號(hào)對(duì)蛋白亞細(xì)胞定位的影響2 .實(shí)驗(yàn)要求(1)根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)理論課所學(xué)知識(shí),就以上實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑O(shè)計(jì)出實(shí)驗(yàn)方案(包括所選用材料、實(shí)驗(yàn)技術(shù)、方法).(2)實(shí)驗(yàn)方案須交指導(dǎo)教師修改后,然后開始實(shí)驗(yàn).(3)實(shí)驗(yàn)過程中要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程,獨(dú)立完成.(4)以小組為單位整理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù),按研究論文寫作要求撰寫論文.3 .學(xué)習(xí)目標(biāo)(1)掌握質(zhì)粒純化方法(2)掌握轉(zhuǎn)染技術(shù)(3)掌握免疫熒光雙染技術(shù)(4)熟悉載體構(gòu)建方法4 .實(shí)驗(yàn)用品(1)器材和

18、設(shè)備：CO2培養(yǎng)箱、熒光顯微鏡、相差顯微鏡、超凈工作臺(tái)、恒溫水浴箱、恒溫?fù)u床、微量加樣器、臺(tái)式冷凍離心機(jī)、電泳槽、電泳儀、電轉(zhuǎn)儀、天平及其他耗材.試齊載體：N端-融合GFP-NRDR質(zhì)粒、刪除C-端定位信號(hào)N-融合GFP-NRDR質(zhì)粒、C端-融合GFP-NRDR質(zhì)粒、刪除N-端定位信號(hào)C端-融合GFP-NRDR質(zhì)粒、NRDR真核表達(dá)載體亞細(xì)胞定位：線粒體、過氧化物酶體熒光染料、DAPI、COS-7細(xì)胞SDS-PAGE試齊1J:30%PAGE、1MTris-HCl(pH6.8)、l.5MTris-HCl(pH8.8)、10%SDS、10%過硫酸錢、考馬斯亮藍(lán)R250、甲醇、冰醋酸、去離子水、TEMED、蛋白質(zhì)分子量標(biāo)