多發(fā)性尋常疣誤診為尖銳濕疣1例報(bào)告.docx

1、降鈣素基因相關(guān)肽在銀屑病斑塊型皮損的分泌與表達(dá)降鈣素基因相關(guān)肽在銀屑病斑塊型皮損的分泌與表達(dá)臨床皮膚科雜志 2000年第4期第29卷 臨床及實(shí)驗(yàn)研究作者：何焱玲丁桂鳳候凌飛鄧玉蘭王憲朱鐵君范少光單位：朱鐵君 何焱玲（北京醫(yī)科大學(xué)人民醫(yī)院皮膚科，北京100044）；鄧玉蘭 丁桂鳳（北京醫(yī)科大學(xué)免疫學(xué)系，北京100083）；王憲 候凌飛（北京醫(yī)科大學(xué)心血管研究所，北京100083）；范少光（北京醫(yī)科大學(xué)生理學(xué)系，北京100083）關(guān)鍵詞：銀屑?。簧窠?jīng)肽；降鈣素基因相關(guān)肽摘要：為了解精神心理刺激誘發(fā)加重銀屑病的原因，探討神經(jīng)肽在銀屑病發(fā)病機(jī)理中的作用。研究了降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)在銀屑病皮損中

2、的分泌與表達(dá)，并確定CGRP作用的靶細(xì)胞。應(yīng)用特異性放射免疫反相法分析，測(cè)定32例尋常型銀屑病慢性斑塊型皮損組織提取液中CGRP的含量，用抗生物素蛋白?生物素?過(guò)氧化物酶復(fù)合物法和兔抗人CGRP抗體進(jìn)行免疫組化染色，觀察CGRP分泌表達(dá)的部位和作用的靶細(xì)胞。結(jié)果尋常型銀屑病慢性斑塊型皮損組織提取物中CGRP的含量高于正常人，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異(P0.01)。同時(shí)免疫組化染色形態(tài)學(xué)觀察發(fā)現(xiàn)CGRP分泌表達(dá)于皮損真皮毛細(xì)血管壁周及內(nèi)皮細(xì)胞表面，以及表皮細(xì)胞間和樹(shù)枝狀細(xì)胞表面。提示尋常型銀屑病斑塊型皮損局部神經(jīng)肽CGRP的分泌增加，皮損真皮微血管內(nèi)皮細(xì)胞和表皮樹(shù)枝狀細(xì)胞與神經(jīng)肽CGRP密切接觸

3、。CGRP與銀屑病局部病變密切相關(guān)。中圖分類號(hào)：R758.63文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-4963(2000)04Expression and secretion of calcitonin gene related peptide in psoriatic plaque lesionsHE Yan ling,ZHU Tie jun（Department of Dermatology, People's Hospital, Beijing Medical University, Beijing 100044， China）DING Gui feng（Department of I

4、mmunology, Beijing Medical University, Beijing 100083, China）HOU Ling fei, WANG Xian（Institute of Cardiovascular Disease, Beijing MedicalUniversity, Beijing 100083, China）DENG Yi lan, FAN Shao?guang（Department of Physiology, Beijing Medical University, Beijing 100083,China)Abstract: In order to stud

5、y the mechanism of the effect of stress on psoriasis and the involvement of neuropeptides in psoriatic pathogenesis, we investigated the expression and secretion of calcitonin gene related peptide(CGRP) in psoriatic plaquelesions, then identified the target cells of CGRP in psoriatic plaque lesions.

6、 Specific radioimmunoassay(RIA) was used to determine CGRP secretive content and immuno histochemistry staining with biodin avidin peroxidase compound method to observe the target cells of CGRP in psoriatic plaque lesion tissue of 32 cases of psoriasis vulgaris. The results showed that the content o

7、f CGRP in psoriatic plague lesions was higher than that of normal controls(P 0.01).CGRP was also found on periphly and the endothelial cells of the dermal capillaries and on the surface of epidermal dendrite cells in psoriatic plaque lesions. It indicated that pathogenesis of psoriatic plaque lesion

8、s was related to the overexpression of neuropeptide CGRP, which closely contacted with the dermal microvascular endothelial cells and epidermal dendrite cells in psoriatic plaque lesion.Key Words: Psoriasis;Neuropeptide; Calcitonin gene related peptide精神心理刺激和應(yīng)激反應(yīng)可誘發(fā)和加重銀病，而且在緊張狀態(tài)下銀屑病皮損的神經(jīng)肽含量增加。作為皮膚重要

9、神經(jīng)遞質(zhì)的降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptid,CGRP)與表皮和真皮的多種靶細(xì)胞接觸，其功能還不清楚。但有研究提示CGRP可能直接影響皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞、郎格漢期細(xì)胞、微血管內(nèi)皮細(xì)胞功能。為了解精神心理刺激誘發(fā)加重銀屑病的原因，探討神經(jīng)肽CGRP在銀病發(fā)病中的作用，我們研究了CGRP在尋常型銀屑病患者斑塊型皮損中的分泌與表達(dá)、CGRP作用的靶細(xì)胞，獲得了有意義的結(jié)果。1材料和方法1.1材料1.1.1病例：活檢組織取材于32例尋常型銀屑病患者軀干和四肢伸側(cè)持續(xù)存在的慢性斑塊型皮損，女11例，男21例；年齡平均42例(2065歲)；病程平均17年(235年

10、)。正常對(duì)照組取材于28名正常人相應(yīng)部位的皮膚。1.1.2試劑與儀器：hCGRP抗體和125ICGRP(由北京醫(yī)科大學(xué)王憲教授惠贈(zèng)，分別購(gòu)自美國(guó)半島公司和英國(guó)Amersham公司)：放免緩沖液(0.1BSA,0.01NaN3,5mmol/LNaCl和0.1TTritonX100的0.1mol/LPBS)；ABC免疫組化試劑盒(購(gòu)自中山生物試劑公司)；低溫離心機(jī)(CPKR型，美國(guó)BECKMAN公司)；計(jì)數(shù)器(1470型，瑞士WALLAC公司)；冷凝濃縮干燥機(jī)(GIT100型，美國(guó)SAVANT公司)；DMRIXA顯微鏡(德國(guó)Leica公司)。1.2方法1.2.1特異性放射免疫分析：CGRP放射免疫

11、分析測(cè)定采用特異性放射免疫反相法進(jìn)行。分別取銀屑病慢性斑塊型皮損及正常人對(duì)照組的皮膚組織約100mg(濕重)，放于1mol/L冰醋酸2mL，100煮沸10min，研磨制成組織勻漿，在4以4000r/min離心20min，取上清液1mL/管，放入待測(cè)試管，經(jīng)真空干燥后，儲(chǔ)存于20。將收集的干燥待測(cè)樣本以200L放免緩沖液復(fù)溶。樣本和CGRP標(biāo)準(zhǔn)品與兔抗人CGRP抗血清(100L/管)于4孵育24h，再加入125ICGRP(100L/管)混勻后于4孵育24h，加入放免緩沖液分離劑(1mL/管)，在4放置25min，使結(jié)合的125ICGRP與游離的分離，再于4以3000r/mon離心20min，棄上

12、清液，用計(jì)數(shù)儀測(cè)定沉淀中125I的放射性強(qiáng)度。以2.51000pg/管的系列CGRP標(biāo)準(zhǔn)品(以pg為單位)，分別測(cè)其放射性強(qiáng)度與總管比較，通過(guò)計(jì)數(shù)儀繪制CGRP標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)一步計(jì)算樣品中CGRP的含量(單位為pg)，放免最低監(jiān)測(cè)濃度為2.5pg。1.2.2免疫組織化學(xué)染色：用常規(guī)的免疫組織化學(xué)染色方法，取尋常型銀屑病軀干及四肢伸側(cè)斑塊型皮損組織及對(duì)照組正常人的皮膚組織，10中性福爾馬林液固定，石蠟包埋連續(xù)切片(5m)，常規(guī)脫蠟至80酒精，3H2O2甲醛封閉15min，經(jīng)微波爐修復(fù)抗原后，用血清封閉在37孵育20min，加入1500兔抗人CGRP抗體，于4孵育過(guò)夜后，滴入1200生物素化羊抗兔I

13、gG抗體，在37孵育30min，常規(guī)TBS清洗，加1100ABC液，于37孵育50min，DABH2O2染色，蘇木素復(fù)染封片。以PBS和未免疫兔血清代替一抗作陰性對(duì)照，用鼠脊神經(jīng)節(jié)細(xì)胞作陽(yáng)性對(duì)照。1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：CGRP放射免疫分析檢測(cè)后的結(jié)果數(shù)據(jù)x±s表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)處理的結(jié)果，取雙尾t值和p值。2結(jié)果2.1皮損組織中CGRP的含量測(cè)定：應(yīng)用特異性CGRP放射免疫分析測(cè)定，尋常型銀屑病慢性斑塊型皮損組織提取物中的CGRP含量為27.31pg/200L，正常人對(duì)照組相應(yīng)部位皮膚組織提取物的CGRP含量為13.47pg/200L，經(jīng)t檢驗(yàn)，t=2.01,P0.01

14、，兩者之間統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異(見(jiàn)表1)，表明尋常型銀屑病慢性斑塊型皮損組織的CGRP含量高于正常人對(duì)照組。表1銀屑病斑塊型皮損及正常人皮膚組織CGRP含量檢測(cè)結(jié)果(pg/200L)分組例數(shù)(n)x±st值p值正常人2813.47±1.65銀屑病人3227.31±4.412.010.012.2皮損組織中CGRP免疫組化染色形態(tài)學(xué)觀察：在尋常型銀屑病斑塊型皮損中，可見(jiàn)CGRP分布于增厚的表皮和真皮乳頭及淺層組織。在真皮乳頭毛細(xì)血管壁周及內(nèi)皮細(xì)胞有陽(yáng)性顆粒分布其表面，真皮淺層灶炎性細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)域的小血管叢間可伴行的神經(jīng)纖維表達(dá)分泌CGRP。在表皮見(jiàn)呈樹(shù)枝狀的CGRP陽(yáng)

15、性細(xì)胞，細(xì)胞表面有分枝突起。經(jīng)連續(xù)切片做HE染色，未顯示此陽(yáng)性細(xì)胞，提示其可能為郎格漢斯細(xì)胞。同時(shí)，也發(fā)現(xiàn)在銀屑病斑塊型皮損中，CGRP陽(yáng)性的神經(jīng)纖維伸入到表皮內(nèi)，可見(jiàn)呈條索狀排列的陽(yáng)性表達(dá)顆粒(圖1)。在正常皮膚組織切片未發(fā)現(xiàn)同樣的CGRP陽(yáng)性顆粒。用正常兔血清代替CGRP結(jié)果為陰性。圖1銀屑病斑塊皮損CGRP陽(yáng)性的神經(jīng)纖維伸入表皮內(nèi)，可見(jiàn)呈條索狀排列的陽(yáng)性表達(dá)顆粒3討論降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)是一種含37個(gè)氨基酸殘基的神經(jīng)肽，1982年Amara首次在人和哺乳物體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，由降鈣素基因編碼，轉(zhuǎn)錄合經(jīng)不同的剪接接修產(chǎn)生組織特異性的降鈣素和CGRP，前者存在于甲狀腺C細(xì)胞，而CGRP則廣泛在

16、于中樞和外周神經(jīng)系統(tǒng)。在外周神經(jīng)系統(tǒng)，CGRP主要由感覺(jué)神經(jīng)元合成，分布于無(wú)髓鞘的C纖維，存在于人體皮膚。表皮下有單個(gè)散在CGRP反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)纖維，能穿透基底膜進(jìn)入表皮，真皮深層CGR性神經(jīng)纖維可從神經(jīng)束中伸出分枝，到達(dá)小血管和汗腺周圍，釋放CGRP，調(diào)節(jié)其功能，CGRP成為皮膚重要的感覺(jué)神經(jīng)遞質(zhì)。由于CGRP既是一種有效的血管活性劑，有較強(qiáng)的舒張微血管作用，又能刺激人皮膚微血管內(nèi)皮細(xì)胞(human dermal microvascular endothelial cell,HDMEC)活化，使HDMEC分泌趨化因子IL8，誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞與單一核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞的粘作用。因此，CGRP在一系列炎

17、癥反應(yīng)過(guò)程中發(fā)揮了重要的作用。本實(shí)驗(yàn)特異性放射免疫分析結(jié)果表明，銀屑病斑塊型皮損局部組織CGRP的含量27.31pg/200L，而正常人為13.4pg/200L，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理兩者有顯著性差異，說(shuō)明尋常型銀屑病患者斑塊型皮損神經(jīng)肽CGRP的分泌量比正常人升高。這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果與Farber的報(bào)道相符合。為了確定CGRP在銀屑病在患者斑塊型皮損區(qū)分泌表達(dá)的部位和作用的靶細(xì)胞，我們用抗生物素蛋白生物素過(guò)氧化物酶復(fù)合物法，進(jìn)行免疫組化染色觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)真皮毛細(xì)血管壁周及內(nèi)皮細(xì)胞表面有CGRP陽(yáng)性顆粒分布，真皮淺層灶狀炎性細(xì)胞浸潤(rùn)區(qū)域的微血管叢間，有伴行的神經(jīng)纖維分泌表達(dá)CGRP。而且，增厚的表皮內(nèi)見(jiàn)條索狀

18、排列的陽(yáng)性表達(dá)顆粒和樹(shù)枝狀的陽(yáng)性細(xì)胞，并經(jīng)連續(xù)切片HE染色為陰性，提示可能為郎格漢斯細(xì)胞。在此基礎(chǔ)上，我們進(jìn)行了雙相免疫熒光及激光共聚焦掃描，證實(shí)CGRP陽(yáng)性的樹(shù)枝狀細(xì)胞是CD1的郎格漢斯細(xì)胞(另文發(fā)表)。由此可見(jiàn)，神經(jīng)肽CGRP在銀屑病變過(guò)程中，對(duì)擴(kuò)張微血管，誘導(dǎo)炎性細(xì)胞的局部浸潤(rùn)，影響靶細(xì)胞的功能，可能具有十分重要的作用。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)銀屑病斑塊型皮損的CGRP神經(jīng)纖維比正常皮膚增多了，一些CGRP陽(yáng)性神經(jīng)纖維從真皮的末端進(jìn)入表皮。這表明銀屑病斑塊型皮損的病變與CGRP的過(guò)度分泌密切相關(guān)，但其作用如何有待進(jìn)一步研究。參考文獻(xiàn) ：Jiang WY, Raychoudhuri SP, Farber

19、 EM. Double labeled immunofluorescence study of cutaneous nerves in psoriasis. Int J Dermatol, 1998,37(8):572 574.Schelzen T, Armstrong CA, Bunnett NW, et al. Neuropepitdes in the skin: Interaction between the neuroendocrine and the skin immune system. Exp Dermatol, 1998,72(2 3):81 96.Hosoi J, Murph

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