生物化學(xué)第十章的合成

1、真核與組（考綱未要求）丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白DNA的生物丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白大綱要求的酶。1.2.3.DNA的特征及DNA半保留的基本過(guò)程。逆轉(zhuǎn)錄的概念、逆轉(zhuǎn)錄酶、逆轉(zhuǎn)錄的過(guò)程。逆轉(zhuǎn)錄的意義。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白（一）DNA1.半保留概念：的基本特征：時(shí)雙鏈解開(kāi)分別作為模板新2條DNA，一條來(lái)自親代，一條新。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新親代DNA首醫(yī)大三博腦科 小白子代DNA2001A-29若將1個(gè)完全被放射性標(biāo)記的DNA放于無(wú)放射性中，無(wú)放射性標(biāo)記的環(huán)境中標(biāo)記的DNA三代后，所產(chǎn)生的全部DNA有幾個(gè)A. 1個(gè)B. 2個(gè)C4個(gè)D6個(gè)：第

2、二代DNA丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新經(jīng)產(chǎn)生8個(gè)DNA，只有2個(gè)DNA分子各帶母代D首N醫(yī)A大的三博各腦一科 條小白鏈，其余6個(gè)為無(wú)放射標(biāo)記。解題公式：2的N次方-2。2雙向：時(shí)DNA從起始點(diǎn)向兩個(gè)方向解鏈，叉。形成兩個(gè)延伸相反的丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新時(shí)DNA形成2個(gè)延伸方向相反的開(kāi)鏈區(qū)，稱為叉。首醫(yī)大三博腦科 小白3535原核生物：環(huán)狀DNA；丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新一個(gè)起始點(diǎn)首醫(yī)大三博腦科 小白真核生物：DNA有多個(gè)兩個(gè)起始點(diǎn)之間的DN起始點(diǎn)。段稱為的功能子(replicon)。子是完成。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新5353子首醫(yī)大三博腦科 小白真核生物多個(gè)起始點(diǎn)、子與叉丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博

3、腦科 小白3半不連續(xù)：前導(dǎo)鏈：順著解鏈方向生成的子鏈連續(xù)進(jìn)行后隨鏈：鏈復(fù)方向與解鏈方向相反不能連續(xù)延長(zhǎng)丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白中的不連續(xù)片段稱為岡崎片段2006A-30、岡崎片段是指A.起始時(shí)，RNA聚合酶的片段段B. 兩個(gè)起始點(diǎn)之間的DNCDNA半不連續(xù)時(shí)出現(xiàn)的DN段丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新D. DNA連續(xù)EE.coli時(shí)出現(xiàn)的DN段起始點(diǎn)oriC的跨度為245bp片段：領(lǐng)頭鏈?zhǔn)揍t(yī)連大續(xù)三而小隨白從鏈不連續(xù)是DNA的半不連續(xù)性。隨從鏈上不連續(xù)的片段稱為岡崎片段。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新（二）DNA酶學(xué)首醫(yī)大三博腦科 小白的化學(xué)反應(yīng)丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新DNA 新鏈生成需引物和模

4、板；新鏈的延長(zhǎng)只可沿5¢ 3¢方向進(jìn)行 。首醫(yī)大三博腦科 小白(dNMP)n + dNTP (dNMP)n+1 + PPi1.原核生物DNA聚合酶pol Ipol IIpol III+5¢®3¢聚合酶活性+3¢®5¢外切酶活性丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新+琴琴5¢®3¢外切酶活性校讀、修復(fù)、應(yīng)急狀態(tài)修復(fù)催化DNA聚合切除引物填補(bǔ)空隙I：監(jiān)督-糾錯(cuò)、安排-填空、更改-切除II 二線：值班首醫(yī)突況科：小應(yīng)白 急III 住院醫(yī)：真正干活pol IV 跨損傷pol V跨損傷DNA聚合酶DNA聚合酶核

5、酸外切酶活性丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新DNA-pol功能：校讀，去除RNA引物，填補(bǔ)空隙，參與DNA損傷修復(fù)。3¢ ® 5¢外切酶活性：辨認(rèn)錯(cuò)配堿基并水解。5¢ ® 3¢外切酶首醫(yī)活大性三博：腦切科除小白引物和突變DN段。ADNA聚合酶 IBDNA聚合酶 C二者都是D二者都不是丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新2001B-123具有3琴5外切酶及5琴3外切酶活性的是A2001B-124在DNA中鏈延長(zhǎng)上起重要作用的B首醫(yī)大三博腦科 小白2009X-158、下列有關(guān)DNA聚合酶III的敘述正確的有：A、在延長(zhǎng)中起主要催化作用的酶B、5'-3&#

6、39;聚合酶活性C、3'-5'外切酶活性D、5'-3'外切酶活性丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白DNA-pol N 端C 端木瓜蛋白酶丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新小片段5¢ ® 3¢核酸外切酶活性大片段/Klenow 片段DNA聚合酶活性 3¢ ® 5¢ 核酸外切酶活性RNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄酶無(wú)3¢ ® 5¢ 外切酶活性，無(wú)校對(duì)功能錯(cuò)誤率高首醫(yī)大三博腦科 小白Klenow片段是哪種DNA聚合酶的水解片段？A、DNA-pol IB、DNA-pol II C、DNA-pol

7、IIID、DNA-pol 丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新：木瓜蛋白酶將DNA-pol I水解成小片段和大片段，大片段即Klenow片段。首醫(yī)大三博腦科 小白2.真核生物DNA聚合酶DNA-pol 引物酶DNA-pol 低保真應(yīng)急修復(fù)DNA-pol 線粒體DNA-pol 后隨鏈DNA-pol 前導(dǎo)鏈引導(dǎo) "A=G"-保-射線類似豆芽，迅速生長(zhǎng)丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新所有的真核生物聚合酶都具有5'-3'外切酶活性。首醫(yī)大三博腦科 小白2007A-166真核細(xì)胞中主要的酶是A、DNA-pol B、DNA-pol C、DNA-pol D、DNA-pol 丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新

8、首醫(yī)大三博腦科 小白真核細(xì)胞中參與校對(duì)、修復(fù)和填補(bǔ)空隙酶是A、DNA-pol B、DNA-pol C、DNA-pol D、DNA-pol 丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新：本身有兩個(gè)缺口，當(dāng)然要修復(fù)填補(bǔ)空隙。首醫(yī)大三博腦科 小白3.保真性的酶學(xué)依據(jù)（一）的保真性和堿基選擇：DNA聚合酶（二）DNA-pol的核酸外切酶活性：即時(shí)校讀、切除片段丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白（一）解螺旋酶、引物酶和單鏈DNA結(jié)合蛋白4.原核生物起始的相關(guān)蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)（）通用名功能辨認(rèn)起始點(diǎn)DnaA(dnaA )DNA解開(kāi)雙鏈DnaBDnaC(dnaB )解螺旋酶丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新(dnaC)DnaB運(yùn)送和協(xié)同

9、DnaG(dnaG)RNA引物酶催化引物生成SSB單鏈DNA穩(wěn)定已解開(kāi)的單鏈結(jié)合蛋白拓?fù)洚悩?gòu)酶(gyrA, B)理順DNA鏈?zhǔn)揍t(yī)大三博腦科 小白A是字母表的開(kāi)頭，是起始點(diǎn)；B 掰開(kāi)解螺旋酶；G（gou）引物酶；單鏈結(jié)合蛋白（single stranded binding protein , SSB) 具有結(jié)合單鏈DNA的能力。作用：Ø Ø維待模板的單鏈穩(wěn)定狀態(tài)；免受細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的核酸酶的降解。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白A、DnaA蛋白B、DnaB蛋白C、DnaC蛋白D、DnaG蛋白丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新2009B-131、具有辨認(rèn)起始點(diǎn)功能的蛋白是 A20

10、09B-132、具有解螺旋酶活性的蛋白是B首醫(yī)大三博腦科 小白2008A-35下列引物作用的是起始相關(guān)蛋白質(zhì)中，具有RNAA. DnaAB. DnaB CDnaCDDnaG丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶解開(kāi)超螺旋切斷DNA一股鏈。反應(yīng)不需ATP。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新切斷DNA兩股鏈，利用ATP供能。作用特點(diǎn)：既水解又連接磷酸二酯鍵首醫(yī)大三博腦科 小白2005X-133拓?fù)洚悩?gòu)酶對(duì)DNA的作用有A. 解開(kāi)DNA超螺旋B. 切斷單鏈DNAC. 結(jié)合單鏈DNAD. 連接磷酸二酯鍵丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新：拓?fù)洚悩?gòu)酶作用DNA過(guò)程中雙螺旋沿軸旋繞，造成DNA打結(jié)。拓?fù)洚悩?gòu)酶

11、可解開(kāi)超螺旋，改變拓?fù)錁?gòu)象（A）首。醫(yī)大三切博腦斷科D小N白A雙鏈中的一股使DNA解鏈旋轉(zhuǎn)，不致打結(jié)(B)。適時(shí)拓?fù)涿高B接磷酸二酯健，封閉切口。結(jié)合單鏈DNA的是單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)。DNA連接酶：連接3¢-OH和5¢-P末端，生成磷酸二酯鍵。OP O-O-O工程重要工具酶，功能是接合缺口：丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新ATPDNA連接酶1、不連續(xù)；AMP2、DNA修復(fù)、重組及剪接首醫(yī)大三博O腦科 小白OPO-O-HO過(guò)程中具有催化3，5磷酸二酯鍵生成的酶有A引物酶BDNA聚合酶C拓?fù)洚悩?gòu)酶DDNA連接酶丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新（三）

12、原核生物DNA過(guò)程首醫(yī)大三博腦科 小白1、起始： 解鏈：拓?fù)洚悩?gòu)酶:松弛超螺旋解螺旋酶:解開(kāi)雙螺旋成為兩條單鏈丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新單鏈DNA結(jié)合蛋白(single stranded DNA binding protein,SSB)：中維持模板處于單鏈狀態(tài)并保護(hù)單鏈完整。首醫(yī)大三博腦科 小白引物和體：引物（primer）：引物酶催化短鏈的RNA引物酶依賴DNA的RNA聚合酶Ø丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新Ø催化游離NTP聚合dnaG產(chǎn)物:DnaGØØ催化引物生成首醫(yī)大三博腦科 小白Dna B、 Dna C3¢Dna A5¢3¢丁香醫(yī)

13、考特約講師張?zhí)N新DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶5¢SSB含有解螺旋酶、DnaC蛋白、引物酶和DNA起始區(qū)域的復(fù)合結(jié)構(gòu)稱為醫(yī)體大。三博腦科 小白2005A-32RNA引物在DNA過(guò)程中的作用是A. 提供起始模板B. 激活引物酶C提供D提供所需的5'-磷酸所需的3'-羥基丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新：因DNA聚合酶沒(méi)有有聚合dNTP的能力，引物酶先利用游離NTP，形成一段RNA引物，提供3'-OH 末端(為D)。首醫(yī)大三博腦科 小白2006X-135參與DNA起始的有ADna蛋白BSSBC解螺旋酶DRNA酶丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新：RNA酶參與的是終止，而不是起始。首醫(yī)大三博腦科 小白

14、總結(jié)：常見(jiàn)英文Okazaki fragment：岡崎片段SSB：?jiǎn)捂溄Y(jié)合蛋白Helicase：解螺旋酶 DnaB rep蛋白Polymerase：聚合酶Primase：引物酶 DnaGLigase：DNA連接酶丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白2、延長(zhǎng)DNA-pol III催化下dNTP以dNMP形式加入，生成磷酸二酯鍵。前導(dǎo)鏈：5¢ ® 3¢后隨鏈：5¢ ® 3¢丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白3、終止：原核生物是環(huán)狀DNA，雙向的片段在的終止點(diǎn)(ter)處匯合。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新oriE.coli8232te

15、r首醫(yī)大三博腦科 小白5¢隨從鏈岡崎片段連接：5¢去除RNA引物：DNA聚合酶I填補(bǔ)空隙：DNA聚合酶IRNA酶5¢結(jié)合缺口5¢OHP丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新DNA-pol 5¢5¢首醫(yī)大三博腦科 小白PATPDNA連接酶ADP+Pi5¢5¢2003X-134、DNA過(guò)程中參與岡崎片段之間連接的酶有A、RNA酶B、DNA琴pol C、DnaA蛋白D、連接酶丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新：岡崎片段處理:RNA酶水解:去掉RNA引物并換成DNA，把DN段連接完整。RNA水解由RNA酶成;RNA水解后留下空隙由DNA首-p醫(yī)o大l

16、三博填腦補(bǔ)科 ;小白DNA連接酶連接缺口。岡崎片段的處理所需酶為RNA酶、DNA-pol、DNA連接酶。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新（四）真核生物DNA過(guò)程首醫(yī)大三博腦科 小白1、的起始 真核生物性，即有多個(gè)起始點(diǎn)，是多子。有時(shí)序子以分組方式激活而不是同步起動(dòng)。 增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)在起始和延長(zhǎng)中起關(guān)鍵作用。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白2000A-29下列關(guān)于真核生物DNA特點(diǎn)描述錯(cuò)誤的是ARNA引物較小B岡崎片段較短C片段連接時(shí)由ATP供給能量丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新D在E僅有一個(gè)中，DNA鏈的延長(zhǎng)短度較慢起點(diǎn)：真核生物的DNA段的長(zhǎng)度小于首醫(yī)原大核三博生腦物科。小有許多特點(diǎn)。如

17、RNA引物和岡崎片速度慢、僅為原核生物的1琶10。2、的延長(zhǎng)引物和岡崎片段較原核短；組裝成核小體速度慢丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白2011X-160.下列真核生物與原核生物特點(diǎn)的比較中正確的有A.真核生物的可能需要端粒酶參與B.真核生物的岡崎片段短于原核生物C.真核生物的起始點(diǎn)少于原核生物丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新D.真核生物DNA聚合酶的催化速率低于原核生物首醫(yī)大三博腦科 小白真核DNA終止：1、岡崎片段連接2、端粒和端粒酶端粒（telomere）是指真核生物線性DNA末端的結(jié)構(gòu)部分，通常膨大成粒狀。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 由末端DNA序列和蛋白質(zhì)。

18、末端DNA序列是多次重復(fù)的富含G、T堿基的短序列。TTTTGGGGTTTTGGGG丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新功能：維持維持DNA穩(wěn)定性完整性首醫(yī)大三博腦科 小白端粒酶(telomerase)Ø線性DNA完成后，末端由于引物RNA水解可能出現(xiàn)縮短。Ø需要在端粒酶的催化下，進(jìn)行延長(zhǎng)反應(yīng)。丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新首醫(yī)大三博腦科 小白端粒酶（RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合體）以RNA為模板通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程對(duì)末端DNA鏈進(jìn)行延長(zhǎng) 端。粒酶特殊逆轉(zhuǎn)錄酶端粒酶RNA：提供DNA模板端粒酶協(xié)同蛋白端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶-蛋白質(zhì)丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新 老化與端粒酶活性下降有關(guān)； 腫瘤的發(fā)生與端粒酶活性有關(guān)；首醫(yī)大三博腦

19、科 小白A. 核酶(ribozyme)B. 端粒酶C二者都是D二者都不是丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新2000B-123一種由RNA和蛋白質(zhì)組成的酶是2000B-124屬于一種特殊的反轉(zhuǎn)錄酶的是BB：端粒酶是一種由RNA和蛋白質(zhì)組成的酶。終止時(shí)DNA末端可首縮醫(yī)短大三，博通腦科過(guò)小端白粒不依賴模板的可補(bǔ)償。端粒酶以其自身攜帶的RNA為模板特殊的逆轉(zhuǎn)錄酶（反轉(zhuǎn)錄酶）。互補(bǔ)鏈，故端粒酶可看作一種2004X-135.下列選項(xiàng)中含有RNA的酶有A. 核酶B. 端粒酶C. 逆轉(zhuǎn)錄酶D. RNase丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新：含有RNA催化劑-核酶、端粒酶、snRNP。首醫(yī)大三博腦科 小白（五）逆轉(zhuǎn)錄和逆轉(zhuǎn)錄酶逆轉(zhuǎn)錄：逆轉(zhuǎn)錄酶催化下以RNA為模板DNA的過(guò)程。RNA模板丁香醫(yī)考特約講師張?zhí)N新逆轉(zhuǎn)錄酶雙鏈DNA首醫(yī)大三博腦科 小白200