高效液相色譜法簡介

1、2022-4-16高效液相色譜法高效液相色譜法高效液相色譜法2022-4-16GC：能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品，能氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品， 高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及及 高聚物的樣品不可檢測高聚物的樣品不可檢測 占有機(jī)物的占有機(jī)物的20%HPLC：溶解后能制成溶液的樣品，溶解后能制成溶液的樣品， 不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制 分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子子 和離子型樣品均可檢測和離子型樣品均可檢測 用途廣泛，占有機(jī)物的用途廣泛，占有機(jī)物的80%2022

2、-4-162流動相差別流動相差別vGC：流動相為惰性氣體流動相為惰性氣體組分與流動相無親合作用力，只與固定相作用組分與流動相無親合作用力，只與固定相作用 vHPLC：流動相為液體流動相為液體流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、流動相與組分間有親合作用力，為提高柱的選擇性、 改善分離度增加了因素，對分離起很大作用改善分離度增加了因素，對分離起很大作用流動相種類較多，選擇余地廣流動相種類較多，選擇余地廣流動相極性和流動相極性和pH值的選擇也對分離起到重要作用值的選擇也對分離起到重要作用 選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相選用不同比例的兩種或兩種以上液體作為流動相 可以增大分離選擇

3、性可以增大分離選擇性2022-4-16(3)氣相色譜一般都在較高溫度下進(jìn)行的，而高效液相色譜法則經(jīng)?？稍谑覝貤l件下工作。 高效液相色譜法的儀器設(shè)備費(fèi)用昂貴，操作嚴(yán)格，這是它的主要缺點(diǎn)。2022-4-16四、影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素四、影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素四、影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素四、影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素四、影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素四、影響色譜峰擴(kuò)展及色譜分離的因素2022-4-16第一節(jié)第一節(jié)第一節(jié)第一節(jié)第一節(jié)第一節(jié) 高效液相色譜儀高效液相色譜儀高效液相色譜儀高效液相色譜儀高效液相色譜儀高效液相色譜儀2022-4-16液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（

4、液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（2 2 2）2022-4-16液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（3 3 3）2022-4-16液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（液相色譜儀（4 4 4）2022-4-162022-4-16流程及主要部件流程及主要部件流程及主要部件流程及主要部件流程及主要部件流程及主要部件 process and main assembly of process and main assembly of process and main assembly of HPLCHPLCHPLC1.流程流程2022-4-1

5、62.2.2.主要部件主要部件主要部件主要部件主要部件主要部件(1)高壓輸液系統(tǒng)：一般由貯液器、高壓泵、脫氣、高壓輸液系統(tǒng)：一般由貯液器、高壓泵、脫氣、梯度洗脫裝置梯度洗脫裝置高壓泵為主要部件之一，壓力：150350105 Pa。 為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液體的流動相高速通過時，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。 應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性2022-4-16( ( (2) 2) 2) 進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)， 通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置， 其結(jié)構(gòu)如圖所示：2022-4-

6、16( ( (3) 3) 3) 高效分離柱高效分離柱高效分離柱高效分離柱高效分離柱高效分離柱色譜柱是高效液相色譜儀的心臟，要求分離度高、柱容量大、色譜柱是高效液相色譜儀的心臟，要求分離度高、柱容量大、分析速度快，高性能的色譜柱與固定相本身性能、柱結(jié)構(gòu)、裝分析速度快，高性能的色譜柱與固定相本身性能、柱結(jié)構(gòu)、裝填和使用技術(shù)有關(guān)。填和使用技術(shù)有關(guān)。柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑16 mm，柱柱長長540 cm。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。發(fā)展趨勢是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。標(biāo)準(zhǔn)柱型：內(nèi)徑標(biāo)準(zhǔn)柱型：內(nèi)徑4.6或或3.9mm，長度為，長度為15-30cm不銹鋼柱，不銹鋼

7、柱，填料填料5-10 mm，柱效，柱效7000-10000塔板數(shù)。塔板數(shù)。2022-4-16( ( (4) 4) 4) 檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng) a. 紫外檢測器紫外檢測器 應(yīng)用最廣，對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。應(yīng)用最廣，對大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 靈敏度高；靈敏度高； 線形范圍高；線形范圍高； 流通池可做的很小（流通池可做的很?。?mm 10mm ，容積容積 8L）；）； 對流動相的流速和溫度變化不敏感；對流動相的流速和溫度變化不敏感； 波長可選，易于操作；波長可選，易于操作； 可用于梯度洗脫。可用于梯度洗脫。 2022-4-16b. b. b. 光電二極

8、管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器(PDAD,photodiode array detector )(PDAD,photodiode array detector )(PDAD,photodiode array detector ) 紫外檢測器的重要進(jìn)展；紫外檢測器的重要進(jìn)展； 光電二極管陣列檢測器：光電二極管陣列檢測器：1024個二極管陣列，能快速同時檢測從200900nm范圍的全譜信息。計算機(jī)快速處理，三維立體譜圖。2022-4-16c. c. c. 示差折光檢測器示差折光檢測器示差折光檢測器示差折光檢測器示差折

9、光檢測器示差折光檢測器（differential refractive index detectordifferential refractive index detectordifferential refractive index detector） 除紫外檢測器之外應(yīng)用最多的檢測器； 可連續(xù)檢測參比池和樣品池中流動相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比；特點(diǎn)： 通用型檢測器；通用型檢測器； 靈敏度低；靈敏度低；對溫度敏感；對溫度敏感；不能用于梯度洗脫不能用于梯度洗脫 2022-4-16示差折光檢測器示差折光檢測器示差折光檢測器示差折光檢測器示差折光檢測器示差折光檢測器2022-4-16d

10、. d. d. 熒光檢測器熒光檢測器熒光檢測器熒光檢測器熒光檢測器熒光檢測器（fluorescence detectorfluorescence detectorfluorescence detector）特點(diǎn)：特點(diǎn)：選擇性檢測器；高靈選擇性檢測器；高靈敏度、高選擇性；敏度、高選擇性； 適用對象適用對象：對多環(huán)芳烴，維：對多環(huán)芳烴，維生素生素B、黃曲霉素、卟啉類化黃曲霉素、卟啉類化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應(yīng)；、甾類化合物等有響應(yīng)；2022-4-16 通用型檢測器，用于檢測揮發(fā)性低于流動相的通用型檢測器，用于檢測揮發(fā)性低于流動相的任何樣品。任何樣品。 可

11、用于梯度洗脫可用于梯度洗脫 對溫度變化不敏感對溫度變化不敏感f. f. f. 蒸發(fā)激光光散射檢測器（蒸發(fā)激光光散射檢測器（蒸發(fā)激光光散射檢測器（蒸發(fā)激光光散射檢測器（蒸發(fā)激光光散射檢測器（蒸發(fā)激光光散射檢測器（ELSD, ELSD, ELSD, Evaporation Laser scatter detectorEvaporation Laser scatter detectorEvaporation Laser scatter detector）2022-4-16g.質(zhì)譜檢測器質(zhì)譜檢測器（mass spectroscopy）h. 電化學(xué)檢測器：電導(dǎo)檢測器、安培檢測器等電化學(xué)檢測器：電導(dǎo)檢測器

12、、安培檢測器等2022-4-16（一）、（一）、（一）、（一）、（一）、（一）、 液液液液液液- - -固吸附色譜固吸附色譜固吸附色譜固吸附色譜固吸附色譜固吸附色譜 固定相固定相：固體吸附劑，如極性的硅膠和氧化鋁，非極性的 苯乙烯-二乙烯苯基共聚物和石墨化炭黑微球，較常使用的是510m的硅膠吸附劑； 流動相流動相：各種不同極性的一元或多元溶劑。 基本原理基本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸； 適用于分離相對分子質(zhì)量中等的油溶性試樣，對具有官能團(tuán)的化合物和異構(gòu)體有較高選擇性； 缺點(diǎn)缺點(diǎn)：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾；2022-4-16 1. 環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量分析環(huán)境中有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量

13、分析 固定相：薄殼型硅膠(37 50m) 流動相：正己烷 流 速：1.5 mL/min 色譜柱：50cm2.5mm(內(nèi)徑) 檢測器：差示折光檢測器 可對水果、蔬菜中的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行分析。2022-4-16（二）、（二）、（二）、（二）、（二）、（二）、 液液液液液液- - -液分配色譜液分配色譜液分配色譜液分配色譜液分配色譜液分配色譜liquid- liquid partitionliquid- liquid partitionliquid- liquid partition chromatographychromatographychromatography 固定相與流動相均為液體（互不相溶

14、）； 基本原理基本原理：組分在固定相和流動相上的分配； 正相色譜：固定相-親水性填料；流動相-疏水性溶劑或混合物 反向色譜：固定相-疏水性填料；流動相-親水性溶劑或混合物 正相與反相的出峰順序相反； 固定相固定相：早期涂漬固定液，固定液流失，較少采用； 化學(xué)鍵合固定相化學(xué)鍵合固定相：（將各種不同基團(tuán)通過化學(xué)反應(yīng)鍵合到硅膠（擔(dān)體）表面的游離羥基上。C-18柱（反相柱,ODS），氰基柱（正相）。2022-4-16（3 3 3）化學(xué)鍵合固定相）化學(xué)鍵合固定相）化學(xué)鍵合固定相）化學(xué)鍵合固定相）化學(xué)鍵合固定相）化學(xué)鍵合固定相 化學(xué)鍵合固定相: 目前應(yīng)用最廣、性能最佳的固定相； a. 硅氧碳鍵型：硅氧碳鍵

15、型： SiOC b. 硅氧硅碳鍵型：硅氧硅碳鍵型：SiOSi C 穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣穩(wěn)定，耐水、耐光、耐有機(jī)溶劑，應(yīng)用最廣； c. 硅碳鍵型：硅碳鍵型： SiC d. 硅氮鍵型：硅氮鍵型： SiN2022-4-162022-4-162. 2. 2. 稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析稠環(huán)芳烴的分析 稠環(huán)芳烴多為致癌物質(zhì)。 固定相：十八烷基硅烷化鍵合相 流動相：20%甲醇-水 100%甲醇 線 性 梯 度 淋 洗 ，2%/min 流 速：1mL/min 柱 溫：50 C 柱 壓：70 104 Pa 檢測器：紫外檢測器2022-4-16（三）

16、、（三）、（三）、（三）、（三）、（三）、 離子交換色譜離子交換色譜離子交換色譜離子交換色譜離子交換色譜離子交換色譜ion-exchangeion-exchangeion-exchange chromatographychromatographychromatography 固定相固定相：陰離子離子交換樹脂或陽離子離子交換樹脂； 流動相流動相：陰離子離子交換樹脂作固定相，采用酸性水溶液；陽離子離子交換樹脂作固定相，采用堿性水溶液； 基本原理基本原理：組分在固定相上發(fā)生的反復(fù)離子交換反應(yīng)；組分與離子交換劑之間親和力的大小與離子半徑、電荷、存在形式等有關(guān)。親和力大，保留時間長； 陽離子交換：RSO

17、3H +M+ = RSO3 M + H + 陰離子交換：RNR4OH +X- = RNR4 X + OH- 應(yīng)用應(yīng)用：離子及可離解的化合物，氨基酸、核酸等。2022-4-16（四）、（四）、（四）、（四）、（四）、（四）、 離子色譜離子色譜離子色譜離子色譜離子色譜離子色譜（ion chromatographyion chromatographyion chromatography， ICICIC）2022-4-16離子色譜的優(yōu)點(diǎn)離子色譜的優(yōu)點(diǎn)離子色譜的優(yōu)點(diǎn)離子色譜的優(yōu)點(diǎn)離子色譜的優(yōu)點(diǎn)離子色譜的優(yōu)點(diǎn)（1）分析速度快）分析速度快 可在數(shù)分鐘內(nèi)完成一個試樣的分析；（2）分離能力高）分離能力高 在適宜

18、的條件下，可使常見的各種陰離子混合物分離；例：使用雙柱法，在十幾分鐘內(nèi)，可使七種陰離子完全分離。（3）分離混合陰離子的最有效方法）分離混合陰離子的最有效方法（4）耐腐蝕，儀器流路采用全塑件，玻璃柱）耐腐蝕，儀器流路采用全塑件，玻璃柱2022-4-163 3 3、離子色譜的應(yīng)用、離子色譜的應(yīng)用、離子色譜的應(yīng)用、離子色譜的應(yīng)用、離子色譜的應(yīng)用、離子色譜的應(yīng)用 陰離子分析陰離子分析: 雙 柱 ； 薄 殼 型 陰 離 子 交 換 樹 脂 分 離 柱雙 柱 ； 薄 殼 型 陰 離 子 交 換 樹 脂 分 離 柱(3250mm), 流動相：流動相：0.003molL-1 NaHCO3 / 0.0024 m

19、olL-1 Na2CO3，流量，流量138 mL/hr。 七種陰離子在七種陰離子在20分鐘內(nèi)基本上得到完全分離，各分鐘內(nèi)基本上得到完全分離，各組分含量在組分含量在350 ppm。2022-4-16（五）、（五）、（五）、（五）、（五）、（五）、 離子對色譜離子對色譜離子對色譜離子對色譜離子對色譜離子對色譜ion pair chromatographyion pair chromatographyion pair chromatography 原理原理：將一種（或多種）與溶質(zhì)離子電荷相反的離子（對離子或反離子）加到流動相中使其與溶質(zhì)離子結(jié)合形成疏水性離子對化合物，使其能夠在兩相之間進(jìn)行分配； 陰

20、離子分離陰離子分離：常采用烷基銨類，如氫氧化四丁基銨或氫氧化十六烷基三甲銨作為對離子； 陽離子分離陽離子分離：常采用烷基磺酸類，如己烷磺酸鈉作為對離子； 反相離子對色譜反相離子對色譜：非極性的疏水固定相(C-18柱)，含有對離子Y+的甲醇-水或乙腈-水作為流動相，試樣離子X-進(jìn)入流動相后，生成疏水性離子對Y+ X -后；在兩相間分配。2022-4-162022-4-162022-4-16（六）、（六）、（六）、（六）、（六）、（六）、 排阻色譜色譜排阻色譜色譜排阻色譜色譜排阻色譜色譜排阻色譜色譜排阻色譜色譜size- exclusion chromatographysize- exclusio

21、n chromatographysize- exclusion chromatography 固定相固定相：凝膠凝膠(具有一定大小孔隙分布具有一定大小孔隙分布)； 原理原理：按分子大小分離：按分子大小分離。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙。小分子可以擴(kuò)散到凝膠空隙，由其中通過，出峰最慢；中，由其中通過，出峰最慢；中等分子只能通過部分凝膠空隙等分子只能通過部分凝膠空隙，中速通過；而大分子被排斥，中速通過；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶劑分子小在外，出峰最快；溶劑分子小，故在最后出峰。，故在最后出峰。 組分全部在死體積前出峰組分全部在死體積前出峰； 可 對 相 對 分 子 質(zhì) 量 在可 對 相 對 分

22、子 質(zhì) 量 在100-105范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)范圍內(nèi)的化合物按質(zhì)量分離量分離 2022-4-162022-4-16（七）、（七）、（七）、（七）、（七）、（七）、 親和色譜親和色譜親和色譜親和色譜親和色譜親和色譜( ( (AC)AC)AC) Affinity Affinity Affinity chromatographychromatographychromatography 原理原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某種特異性親和力，進(jìn)行選擇性分離。 先在載體表面鍵合上一種具有一般反應(yīng)性能的所謂間隔臂(環(huán)氧、聯(lián)胺等)，再連接上配基(酶、抗原等)，這種固載化的配基將只能和具有親和力特性吸附的

23、生物大分子作用而被保留。改變淋洗液后洗脫。2022-4-16二、分離類型選擇二、分離類型選擇二、分離類型選擇二、分離類型選擇二、分離類型選擇二、分離類型選擇 choice of separation typeschoice of separation typeschoice of separation types2022-4-16 根據(jù)相對分子量選擇根據(jù)相對分子量選擇分子量十分低的，揮發(fā)性好的樣品，一般用氣相色譜；分子量十分低的，揮發(fā)性好的樣品，一般用氣相色譜；標(biāo)準(zhǔn)液相色譜類型（液固吸附色譜、液液分配色譜、離標(biāo)準(zhǔn)液相色譜類型（液固吸附色譜、液液分配色譜、離子交換色譜、離子色譜、離子對色譜）最適

24、合的相對子交換色譜、離子色譜、離子對色譜）最適合的相對分子量范圍是分子量范圍是200-2000；分子量大于分子量大于2000的，用排阻色譜。的，用排阻色譜。2022-4-16 根據(jù)溶解度選擇根據(jù)溶解度選擇樣品溶解與水且屬于能離解物質(zhì)：離子色譜、離子交換樣品溶解與水且屬于能離解物質(zhì)：離子色譜、離子交換色譜、離子對色譜色譜、離子對色譜樣品可溶于烴類（苯或異辛烷）：液固吸附色譜樣品可溶于烴類（苯或異辛烷）：液固吸附色譜樣品溶解于四氯化碳：常規(guī)的分配和吸附色譜樣品溶解于四氯化碳：常規(guī)的分配和吸附色譜樣品溶于水和異丙醇：常采用反相液液分配色譜樣品溶于水和異丙醇：常采用反相液液分配色譜理計算累積公差，以防

25、理計算累積公差，以防按鍵手感不良。按鍵手感不良。2022-4-16 根據(jù)分子結(jié)構(gòu)選擇異構(gòu)體的分離：液固吸附色譜異構(gòu)體的分離：液固吸附色譜不同官能團(tuán)的化合物、同系物的分離：液液分配色譜不同官能團(tuán)的化合物、同系物的分離：液液分配色譜能離解的化合物：能離解的化合物：高分子聚合物：尺寸排阻色譜高分子聚合物：尺寸排阻色譜2022-4-16第四節(jié)第四節(jié)第四節(jié)第四節(jié)第四節(jié)第四節(jié) HPLCHPLCHPLC的的的的的的應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用應(yīng)用 2022-4-162022-4-162022-4-162022-4-162022-4-16醫(yī)藥研究方面的應(yīng)用醫(yī)藥研究方面的應(yīng)用醫(yī)藥研究方面的應(yīng)用2022-4-16食品分析

26、中的應(yīng)用食品分析中的應(yīng)用食品分析中的應(yīng)用 糖類糖類 酸類物質(zhì)酸類物質(zhì) 維生素類維生素類 合成色素合成色素 食品污染物食品污染物2022-4-162022-4-162022-4-162022-4-162022-4-162022-4-162022-4-162022-4-162022-4-162022-4-162022-4-163.9 3.9 3.9 制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜制備型液相色譜 制備型液相色譜制備型液相色譜：結(jié)構(gòu)與分析型一樣，但泵流量大、進(jìn)樣量大、采用制備柱；柱后餾分收集器。 制備柱制備柱：內(nèi)徑2050mm，柱長50cm。2022-4-16液

27、相制備色譜液相制備色譜液相制備色譜液相制備色譜液相制備色譜液相制備色譜 preparative liquid chromatographypreparative liquid chromatographypreparative liquid chromatography 獲得高純物質(zhì)（色譜純）的有效方法。 半制備柱（內(nèi)徑8mm，長度15 30cm），一次制備量.1mg；1.色譜柱的柱容量（柱負(fù)荷）色譜柱的柱容量（柱負(fù)荷） 對分析柱：對分析柱：不影響柱效時的最大進(jìn)樣量； 對制備柱：對制備柱：不影響收集物純度時的最大進(jìn)樣量； 超載：超載：進(jìn)樣量超過柱容量。柱效迅速下降，峰變寬。 超載可提高制備效率

28、，以柱效下降一半或容量因子超載可提高制備效率，以柱效下降一半或容量因子k降低降低10%為宜。為宜。2022-4-162. 2. 2. 液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法液相制備色譜的方法收集組分時，通常有以下情況： （1）可獲得良好分離，主峰 使用制備柱，超載提高效率； （2）兩主成分之間的小組分； 超載，分離切分使待分離組分成為主成分（富集）后，再次分離制備。 2022-4-16高效液相色譜實驗技術(shù)高效液相色譜實驗技術(shù)高效液相色譜實驗技術(shù)高效液相色譜實驗技術(shù)高效液相色譜實驗技術(shù)高效液相色譜實驗技術(shù) 一、色譜柱的保養(yǎng)一、色譜柱的保養(yǎng) 二、

29、色譜柱的再生二、色譜柱的再生 三、實驗前準(zhǔn)備工作三、實驗前準(zhǔn)備工作 四、樣品處理技術(shù)四、樣品處理技術(shù) 2022-4-16色譜柱的保養(yǎng)色譜柱的保養(yǎng)色譜柱的保養(yǎng)色譜柱的保養(yǎng)色譜柱的保養(yǎng)色譜柱的保養(yǎng) 在正常情況下，色譜柱至少可以使用36個月，能完成數(shù)百次以上的分離。但是，若操作不慎，將使色譜柱很易損壞而不能使用。因此為了保持柱效、柱容量及滲透性，必須對色譜柱進(jìn)行仔細(xì)地保養(yǎng)。 2022-4-16 1、色譜柱極易被微小的顆粒雜質(zhì)培塞，使操作壓力速升高而無法使用，因此必須將流動相仔細(xì)地蒸餾或用0.45m孔徑的濾膜過濾。在流動相組貯槽與色譜柱間，安裝0.45m孔徑的過濾器。在柱子上端接頭處裝上多孔過濾片，以

30、防止固體顆粒進(jìn)入色譜柱中。在水溶液流動相中，細(xì)菌容易生長，可能堵塞篩板加入0.01NaOH能防止能防止細(xì)菌生長。2022-4-16 2、最好使用進(jìn)祥閥進(jìn)樣，以防止注射器進(jìn)樣時、注射隔膜碎屑堵塞柱子入口。 2022-4-16 3、對硅膠基鍵合相填科，水溶液流動相的pH值不得超出285的范圍，使溫度不宜過高。柱子在酸性或堿性條件下使用之后，應(yīng)依次用水、甲醇清洗，對暫時不用而需要較長時間保存的柱子，要用純甲清洗，柱子兩端用金屬螺帽封閉，保存于干凈的有機(jī)溶劑中。 2022-4-16 4、要防止色譜柱被振動或撞擊，否則柱內(nèi)填料床層產(chǎn)生裂縫和空隙，會使色譜峰出現(xiàn)“駝峰”或“對峰”。 5、要防止流動相逆向流

31、動，否則將使固定相層位移，柱效下降。 2022-4-16 6、使用保護(hù)柱。連續(xù)注射含有未被洗脫樣品時，會使柱效下降，保留值改變。為了延長柱壽命，在進(jìn)樣閥和分析柱間加上保護(hù)柱，其長度一般為35cm，填充與分析柱性質(zhì)相似的表面多孔型固定相，因此可干法填裝。而且價廉、更換容易。實驗表明，使用保護(hù)柱后，除了使擴(kuò)為零的組分的塔板數(shù)減少外，其柱效下降很少。2022-4-16色譜柱的再生色譜柱的再生色譜柱的再生色譜柱的再生色譜柱的再生色譜柱的再生 一般情況下，硅膠和ODS等化學(xué)鍵合固定相再生是困難的。有時，采用下述方法可能提高柱效。 2022-4-16 1、由于雜質(zhì)微粒等因素，使柱上端固定相變色，柱效下降。這時，可仔細(xì)地將變色部分除去(約3mm左右)，再補(bǔ)充新的固定相。 2、當(dāng)色譜柱吸附未被洗脫成分時，柱效將明顯下降，可選擇合適的溶劑進(jìn)行洗凈。 2022-4-16 3、對離子交換樹脂柱，先經(jīng)1molL HCI相1mol NaOH溶液洗凈，再以12mol/L NaCl水溶液平衡，以超聲波發(fā)生器進(jìn)行清洗，通常可獲良好的效果。 4、當(dāng)采用梯度洗脫時，柱在重復(fù)使用前，用泵把幾倍于柱體積的起始溶劑壓經(jīng)柱子，以重新建立起始的平衡來得到再生。2022-4-16實驗前準(zhǔn)備工作實驗前準(zhǔn)備工作實驗前準(zhǔn)備工作實驗前準(zhǔn)備工作實驗前準(zhǔn)備工作實驗前準(zhǔn)備工