第八章藥物制劑的微生物學(xué)檢查

1、第八章第八章 藥物制劑的藥物制劑的微生物學(xué)檢查微生物學(xué)檢查 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社【學(xué)習(xí)目標(biāo)】1.1.掌握藥物的體外抗菌試驗方法，了解藥物的體掌握藥物的體外抗菌試驗方法，了解藥物的體內(nèi)抗菌試驗。內(nèi)抗菌試驗。 2.2.掌握一般滅菌制劑的無菌檢查方法和原理，熟掌握一般滅菌制劑的無菌檢查方法和原理，熟悉特殊藥品的無菌檢查方法。悉特殊藥品的無菌檢查方法。3.3.掌握非滅菌藥物的掌握非滅菌藥物的細(xì)菌、霉菌和酵母菌計數(shù)細(xì)菌、霉菌和酵母菌計數(shù)方方法，熟悉藥品的大腸埃希菌檢查方法。法，熟悉藥品的大腸埃希菌檢查方法。4.4.了解一般藥品的大腸菌群、沙門菌、銅綠假單了解一般藥

2、品的大腸菌群、沙門菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌的檢查方法。胞菌、金黃色葡萄球菌的檢查方法?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社第一節(jié)第一節(jié) 藥物的抗菌試驗藥物的抗菌試驗v藥物的抗菌試驗?zāi)康氖菫榱藱z查藥物的抗菌能力，藥物的抗菌試驗?zāi)康氖菫榱藱z查藥物的抗菌能力，包括藥物的抑菌試驗和殺菌試驗。包括藥物的抑菌試驗和殺菌試驗。 一般先進(jìn)行體一般先進(jìn)行體外抗菌試驗，再進(jìn)行體內(nèi)抗菌試驗。外抗菌試驗，再進(jìn)行體內(nèi)抗菌試驗。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社一、藥物的體外抗菌試驗( (一一) )體外抑菌試驗體外抑菌試驗v1.1.連續(xù)稀釋法連續(xù)稀釋法 用于測定

3、藥物的用于測定藥物的最小抑菌濃度最小抑菌濃度(minimal (minimal inhibitory concentrationinhibitory concentration，MICMIC), ), MICMIC是指藥是指藥物能抑制細(xì)菌生長的最低濃度，以物能抑制細(xì)菌生長的最低濃度，以g/mlg/ml或或U/mlU/ml表示，數(shù)值愈小，藥物的抑菌作用愈強(qiáng)。表示，數(shù)值愈小，藥物的抑菌作用愈強(qiáng)?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社（1）液體培養(yǎng)基稀釋法：v在試管中用液體培養(yǎng)基進(jìn)行在試管中用液體培養(yǎng)基進(jìn)行2 2倍系列稀釋藥物，使倍系列稀釋藥物，使其終濃度（其終濃度（g/mlg

4、/ml）為）為512512、256256、128128、6464、等等 在每管中加定量的試驗菌液在每管中加定量的試驗菌液（5 5105cfu/ml105cfu/ml） 242448h48h培養(yǎng)培養(yǎng)觀察結(jié)果，觀察結(jié)果，以能抑制試驗菌生長的最低濃度為該藥的以能抑制試驗菌生長的最低濃度為該藥的MICMIC。v如何判斷抑菌還是殺菌？科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社（2）固體培養(yǎng)基稀釋法：1 1）平板法：）平板法： 方法：方法：將不同濃度的藥液按將不同濃度的

5、藥液按1 19 9混入尚未凝固混入尚未凝固的瓊脂培養(yǎng)基中（厚度的瓊脂培養(yǎng)基中（厚度3 34mm4mm） 制作成含有制作成含有遞減濃度藥物的瓊脂平板遞減濃度藥物的瓊脂平板將定量的菌液（將定量的菌液（0.50.5麥麥?zhǔn)媳葷岫染合♂屖媳葷岫染合♂?010倍）倍） 點種法逐個點種于點種法逐個點種于平板（要進(jìn)行陰性對照）平板（要進(jìn)行陰性對照） 培養(yǎng)培養(yǎng) 測得各種細(xì)測得各種細(xì)菌對藥物的菌對藥物的MICMIC（g/mlg/ml）。）。 應(yīng)用：應(yīng)用：測定多種細(xì)菌對同一藥物的測定多種細(xì)菌對同一藥物的MICMIC； 各種藥物的抗菌活性測定；各種藥物的抗菌活性測定； 新抗菌藥物的篩選。新抗菌藥物的篩選。 優(yōu)點：

6、優(yōu)點：不受藥物顏色及渾濁度的影響，且手續(xù)不受藥物顏色及渾濁度的影響，且手續(xù)簡便。簡便?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社2）斜面法： 方法：方法：將不同遞減濃度的藥液將不同遞減濃度的藥液混入未凝固的混入未凝固的裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管中裝有瓊脂培養(yǎng)基的試管中制成斜面制成斜面接種定量接種定量的試驗菌液的試驗菌液培養(yǎng)培養(yǎng)測知測知MIC MIC （g/mlg/ml）。）。 應(yīng)用：應(yīng)用：適用于必須較長時間培養(yǎng)的試驗菌適用于必須較長時間培養(yǎng)的試驗菌( (如如結(jié)核桿菌結(jié)核桿菌) )或避免孢子飛揚(yáng)污染環(huán)境的霉菌?；虮苊怄咦语w揚(yáng)污染環(huán)境的霉菌?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生

7、職業(yè)教育出版分社2.瓊脂擴(kuò)散法原理：原理：是利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散，并在一定濃度范圍是利用藥物在瓊脂培養(yǎng)基中擴(kuò)散，并在一定濃度范圍內(nèi)抑制細(xì)菌生長，形成無菌生長的透明圈即為抑菌環(huán)。抑內(nèi)抑制細(xì)菌生長，形成無菌生長的透明圈即為抑菌環(huán)。抑菌環(huán)的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥菌環(huán)的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的對測試菌的MICMIC呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（抑菌環(huán)越大，呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（抑菌環(huán)越大， MIC MIC 越?。?。越小）。 方法：方法：在瓊脂平板上在瓊脂平板上接種（涂布法或傾注法）試驗菌接種（涂布法或傾注法）試驗菌加藥于平板上加藥于平板上培養(yǎng)培養(yǎng)181824h24h觀

8、察測量抑菌環(huán)直徑，觀察測量抑菌環(huán)直徑，或抑菌范圍的大小或抑菌范圍的大小評價藥物抗菌作用的強(qiáng)弱。評價藥物抗菌作用的強(qiáng)弱。 應(yīng)用：應(yīng)用： 用于定性試驗；用于定性試驗； 初步判斷藥物的抗菌作用的大小。初步判斷藥物的抗菌作用的大小。 缺點：缺點：精確度較差、干擾因素較多。精確度較差、干擾因素較多。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社（1）濾紙片法：方法：方法：無菌濾紙片無菌濾紙片蘸取一定濃度的抗菌藥物蘸取一定濃度的抗菌藥物放置放置 于含菌平板表面。于含菌平板表面。 將預(yù)先配制含藥的干紙片將預(yù)先配制含藥的干紙片貼在接種細(xì)菌的貼在接種細(xì)菌的 平板表面。平板表面。 國際標(biāo)準(zhǔn)國際標(biāo)準(zhǔn)

9、K-BK-B法（法（Kirby-BauerKirby-Bauer法）：法）： 水解酪蛋白水解酪蛋白(Mueller-Hinton(Mueller-Hinton，MH)MH)培養(yǎng)基；培養(yǎng)基； 被測細(xì)菌的濃度、紙片的質(zhì)量、紙片含藥量；被測細(xì)菌的濃度、紙片的質(zhì)量、紙片含藥量； 其他試驗條件。其他試驗條件。 以卡尺精確量取抑菌環(huán)的直徑大小，以卡尺精確量取抑菌環(huán)的直徑大小， 判斷該菌對該藥物的判斷該菌對該藥物的 耐藥耐藥 （resistant,resistant,R R）、）、 中介（中介（intermediate,intermediate,I I） 敏感（敏感（susceptible,suscepti

10、ble,S S）科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社 優(yōu)點：優(yōu)點：在在1 1個平板上測定多種藥物對同一試驗菌的抗菌作用個平板上測定多種藥物對同一試驗菌的抗菌作用 應(yīng)用：應(yīng)用：新藥的初篩試驗，以初步判斷新藥是否具有抗菌作用新藥的初篩試驗，以初步判斷新藥是否具有抗菌作用 病原菌的藥物敏感試驗，供醫(yī)生選用藥物時參考病原菌的藥物敏感試驗，供醫(yī)生選用藥物時參考 藥敏藥敏試驗結(jié)果解釋：試驗結(jié)果解釋： “耐藥耐藥”（R R）：）：即表示測試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗即表示測試菌不能被在體內(nèi)感染部位可能達(dá)到的抗菌藥物濃

11、度所抑制，臨床治療無效；菌藥物濃度所抑制，臨床治療無效； “中介中介”（I I）：）：提示該細(xì)菌對常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的提示該細(xì)菌對常規(guī)用藥體液或組織中的藥物濃度的反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效反應(yīng)率低于敏感株，使用高于正常給藥量有療效； “敏感敏感”（S S）：）：即表示測試菌可被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)即表示測試菌可被測定藥物常規(guī)劑量給藥后在體內(nèi)達(dá)到的血藥濃度所抑制。達(dá)到的血藥濃度所抑制。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社 方法：方法：是在無菌平板上挖直溝，溝內(nèi)加入藥液，然是在無菌平板上挖直溝，溝內(nèi)加入藥液，然后在溝兩旁接種幾種試驗菌，

12、經(jīng)培養(yǎng)后觀察細(xì)菌后在溝兩旁接種幾種試驗菌，經(jīng)培養(yǎng)后觀察細(xì)菌的生長情況，根據(jù)溝和細(xì)菌間抑菌距離的長短來的生長情況，根據(jù)溝和細(xì)菌間抑菌距離的長短來判斷藥物的抗菌能力。判斷藥物的抗菌能力。 應(yīng)用：應(yīng)用：測試一種藥物對幾種細(xì)菌的抗菌作用。測試一種藥物對幾種細(xì)菌的抗菌作用?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社(二)體外殺菌試驗v1.1.最小殺菌濃度（最小殺菌濃度（minimal bactericidal minimal bactericidal concentration concentration MBCMBC）的測定）的測定 方法：方法：按液體培養(yǎng)基稀釋法操作測出藥物的按液體

13、培養(yǎng)基稀釋法操作測出藥物的MICMIC，將未長菌的各管培養(yǎng)液分別移種到無菌平板，將未長菌的各管培養(yǎng)液分別移種到無菌平板上，培養(yǎng)后以無菌生長的最低藥物濃度為該藥物上，培養(yǎng)后以無菌生長的最低藥物濃度為該藥物的的MBCMBC，也可稱為最小致死濃度（，也可稱為最小致死濃度（minimal lethal minimal lethal concentration,concentration,MLCMLC）。）。科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社(三) 聯(lián)合抗菌試驗臨床應(yīng)用臨床應(yīng)用 治療混合性感染；治療混合性感染； 預(yù)防或

14、推遲細(xì)菌抗生素耐藥性的發(fā)生；預(yù)防或推遲細(xì)菌抗生素耐藥性的發(fā)生； 聯(lián)合用藥可以減少劑量以避免達(dá)到毒性劑量；聯(lián)合用藥可以減少劑量以避免達(dá)到毒性劑量； 聯(lián)合用藥比單一用藥時效果更好。聯(lián)合用藥比單一用藥時效果更好?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社聯(lián)合抗菌試驗的常用方法有：聯(lián)合抗菌試驗的常用方法有： 棋盤稀釋法和瓊脂擴(kuò)散紙片法棋盤稀釋法和瓊脂擴(kuò)散紙片法v1.1.棋盤稀釋法棋盤稀釋法 定義：定義：是由兩種抗菌藥物的不同稀釋度加以組是由兩種抗菌藥物的不同稀釋度加以組合，每一種藥物濃度都有單獨(dú)管和與另一種藥物合，每一種藥物濃度都有單獨(dú)管和與另一種藥物不同濃度的聯(lián)合管，因其排列呈棋盤

15、狀而得名。不同濃度的聯(lián)合管，因其排列呈棋盤狀而得名。 特點：特點：能精確地測定兩種抗菌藥物在適當(dāng)濃度能精確地測定兩種抗菌藥物在適當(dāng)濃度的比例下所產(chǎn)生的相互作用。的比例下所產(chǎn)生的相互作用?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社抗菌藥物聯(lián)合應(yīng)用的4種結(jié)果： 協(xié)同作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨(dú)作用協(xié)同作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著大于其單獨(dú)作用 的總和；的總和； 相加作用，兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用時的活性等于兩藥相加作用，兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用時的活性等于兩藥 單獨(dú)抗菌活性之和；單獨(dú)抗菌活性之和； 無關(guān)作用，兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其無關(guān)作用，兩種藥物聯(lián)合作用的活性等于其 單獨(dú)活性；單獨(dú)

16、活性； 拮抗作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于其單獨(dú)拮抗作用，兩種藥物聯(lián)合作用顯著低于其單獨(dú) 抗菌活性?？咕钚?。科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社2.瓊脂擴(kuò)散紙片法方法：方法：將兩種含藥紙片貼于已涂布試驗菌的將兩種含藥紙片貼于已涂布試驗菌的MHMH瓊脂瓊脂平板表面，兩紙片之間的距離以平板表面，兩紙片之間的距離以3 34mm4mm為宜，培為宜，培養(yǎng)養(yǎng)24h24h后觀察結(jié)果。后觀察結(jié)果。 結(jié)果觀察：結(jié)果觀察：由于兩種抗菌藥物的聯(lián)合作用，對由于兩種抗菌藥物的聯(lián)合作用，對細(xì)菌可產(chǎn)生不同的抑菌結(jié)果，而顯示各種圖形，細(xì)菌可產(chǎn)生不同的抑菌結(jié)果，而顯示各種圖形，可按不同圖形報告甲、乙兩

17、藥聯(lián)合時對待測菌產(chǎn)可按不同圖形報告甲、乙兩藥聯(lián)合時對待測菌產(chǎn)生協(xié)同、相加、無關(guān)或拮抗作用。生協(xié)同、相加、無關(guān)或拮抗作用。 含藥紙片的周圍出現(xiàn)抑菌環(huán)或無抑菌環(huán)，分別含藥紙片的周圍出現(xiàn)抑菌環(huán)或無抑菌環(huán)，分別代表單獨(dú)藥物的敏感或耐藥；兩種紙片之間的變代表單獨(dú)藥物的敏感或耐藥；兩種紙片之間的變化代表兩種藥物的聯(lián)合作用?；韮煞N藥物的聯(lián)合作用?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社二、藥物的體內(nèi)抗菌試驗v抗菌藥物進(jìn)入體內(nèi)后，其作用的發(fā)揮受體內(nèi)各種抗菌藥物進(jìn)入體內(nèi)后，其作用的發(fā)揮受體內(nèi)各種因素的影響。藥物在體內(nèi)與體液結(jié)合可

18、降低藥物因素的影響。藥物在體內(nèi)與體液結(jié)合可降低藥物的活性或被破壞；某些藥物在體內(nèi)可因降解而增的活性或被破壞；某些藥物在體內(nèi)可因降解而增強(qiáng)活性；有些細(xì)菌進(jìn)入體內(nèi)后，由于代謝活力的強(qiáng)活性；有些細(xì)菌進(jìn)入體內(nèi)后，由于代謝活力的改變，對藥物的敏感性可能降低等。因此，體外改變，對藥物的敏感性可能降低等。因此，體外抗菌試驗有效的藥物，還需要經(jīng)過體內(nèi)抗菌試驗抗菌試驗有效的藥物，還需要經(jīng)過體內(nèi)抗菌試驗證明有效后，才能應(yīng)用于臨床。證明有效后，才能應(yīng)用于臨床?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社三、影響抗菌試驗的因素v1.1.試驗菌試驗菌 v2.2.培養(yǎng)基培養(yǎng)基 v3.3.抗菌藥物抗菌藥物v

19、4.4.對照試驗對照試驗 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社第二節(jié)第二節(jié) 滅菌制劑的無菌檢查滅菌制劑的無菌檢查v各種注射劑、眼用及外傷用制劑、植入劑、可吸收的止血劑、手術(shù)用敷料、醫(yī)療器具等，必須保證不含活的微生物，否則注入人體將會引起嚴(yán)重的事故。因此，這類制劑在出廠前都必須進(jìn)行無菌檢驗。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社一、無菌檢驗的基本原則一、無菌檢驗的基本原則v1.1.嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作v2.2.正確采集樣品正確采集樣品科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社二、無菌檢驗的基本方法二、無菌檢驗的基本方法

20、v（一）一般藥物及物品的無菌檢驗 直接接種法 液體被檢品可直接接種于培養(yǎng)基內(nèi)。固體粉末或凍干制劑，需用無菌生理鹽水溶解，或制成均勻懸液再作檢驗。無菌敷料，則以無菌操作拆開每個包裝，于不同部位剪取100mg或1cm3cm的樣品，分別接種于適量培養(yǎng)基中。供試品為放射性藥品，接種量和培養(yǎng)基量均減半。科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社（二）（二） 油劑藥物的無菌檢驗油劑藥物的無菌檢驗 v因油劑藥物與培養(yǎng)基不混溶，漂浮于培養(yǎng)基表面而影響菌的生長。因此這類藥物做無菌檢驗時，應(yīng)在培養(yǎng)基中加入表面活性劑（如吐溫-80），使藥物均勻分布于培養(yǎng)基中，以利于微生物的檢出。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職

21、業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社（三）抗菌藥物及含防腐劑藥物的無菌檢（三）抗菌藥物及含防腐劑藥物的無菌檢驗驗v這兩類藥物在進(jìn)行無菌檢驗前必須采用某些方法使抗菌藥或防腐劑去除或失效，才能不影響對被檢藥物的無菌檢驗結(jié)果。常用的方法有 ：v1滅活法 v2微孔濾膜過濾法 v3離子交換樹脂法 v4稀釋法 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社三、無菌檢驗的結(jié)果判斷三、無菌檢驗的結(jié)果判斷 陽性對照管應(yīng)生長良好，陰性對照管不得有菌生長。否則，試驗無效。v1.若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；v2.若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長，判供試

22、品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社三、無菌檢驗的結(jié)果判斷三、無菌檢驗的結(jié)果判斷當(dāng)符合下列至少一個條件時，方可判試驗結(jié)果無效：v（1）無菌檢查試驗所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不符合無菌檢查法的要求；v（2）回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；v（3）供試品管中生長的微生物經(jīng)鑒定后，確認(rèn)是因無菌試驗中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。v試驗若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時，重新取同量供試品，依法檢查，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若有菌生長，判供試品不符合規(guī)定?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職

23、業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社第三節(jié)第三節(jié) 藥物的微生物限度檢查藥物的微生物限度檢查v藥物的微生物限度檢查，是指非規(guī)定滅菌制劑及其原料、輔料受到微生物污染程度的一種檢查方法，包括染菌量及控制菌的檢查。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社一、微生物限度檢查的基本原則一、微生物限度檢查的基本原則v1. 藥物取樣應(yīng)有一定的數(shù)量 v2.藥物在檢驗前應(yīng)保持原包裝狀態(tài)，不得開啟，以免污染v3.檢驗操作應(yīng)在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行 v4.為排除藥物中所含防腐劑或抑菌成分對試驗結(jié)果的干擾，應(yīng)在被檢藥物的稀釋液中，加入定量（約50100個）的已知陽性對照菌，然后按檢驗方法進(jìn)行

24、操作 v5.細(xì)菌總數(shù)、霉菌總數(shù)、酵母菌總數(shù)及控制菌四項均符合該品種微生物限度檢查項目規(guī)定的，應(yīng)判供試品合格；其中任何一項不符合者，則判供試品不合格科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社二、二、 細(xì)菌總數(shù)的測定細(xì)菌總數(shù)的測定v細(xì)菌總數(shù)的測定方法采用的是營養(yǎng)瓊脂傾注平皿計數(shù)法 v為了防止菌落連成片狀而影響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入0.001的2，3，5氯化三苯四氮唑(TTC)，在此培養(yǎng)基上形成的菌落呈粉紅色，便于計數(shù)?？茖W(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社三、三、 霉菌（酵母菌）總數(shù)的測定霉菌（酵母菌）總數(shù)的測定v測定方法與細(xì)菌總數(shù)的測定方法基本相同，但培養(yǎng)

25、基是采用適合霉菌（酵母菌）生長的玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基（酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基）v為了避免細(xì)菌的干擾，可在培養(yǎng)基中加入適當(dāng)?shù)目辜?xì)菌抗生素，如新霉素、青霉素、鏈霉素等以控制細(xì)菌的生長。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社四、控制菌的檢驗四、控制菌的檢驗v按照制劑類型的不同，要求不得在藥品中檢出某些特定病原菌 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社（一）大腸埃希菌的檢查（一）大腸埃希菌的檢查檢驗程序 v1.增菌培養(yǎng) v2.分離培養(yǎng) v3.純培養(yǎng) v4生化反應(yīng) 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社（一）大腸埃希菌的檢查（一）大腸埃希菌的檢查結(jié)果報告 v完全符合以下結(jié)果：革蘭氏陰性無芽孢桿菌；乳糖發(fā)酵產(chǎn)酸產(chǎn)氣，或產(chǎn)酸不產(chǎn)氣；IMViC試驗反應(yīng)為+-。應(yīng)判定為檢出大腸桿菌。 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出版分社 (二二) 沙門菌的檢查沙門菌的檢查檢驗程序 v1增菌培養(yǎng) v2分離培養(yǎng)和初步鑒別 v3染色鏡檢 v4生化反應(yīng) v5血清凝集試驗 科學(xué)出版社衛(wèi)生職業(yè)教育出