蛋白質(zhì)工程在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用及其發(fā)展前景

1、它的應(yīng)用主要是蛋白質(zhì)工程在其誕生以來(lái)就在人們生活的方方面面起到了很大的作用, 在在醫(yī)藥，食品加工，輕工業(yè)，農(nóng)牧業(yè)等方面，為社會(huì)的發(fā)展進(jìn)步提供了不容忽視的力量, 這將預(yù)示著蛋白質(zhì)工程將在以后的社會(huì)發(fā)展中有著良好的發(fā)展前景。隨著20世紀(jì)70年代初期DNA基因工程的誕生， 蛋白質(zhì)工程在它的沖擊下應(yīng)運(yùn)而生。1983年，美國(guó) Genex公司 K.Ulmer在Science上發(fā)表以Protein Engineering.»為題的 專論，第一次提出了蛋白質(zhì)工程的概念，并建立了專門的研究實(shí)體，制定了相應(yīng)研究開(kāi)發(fā)計(jì)劃，標(biāo)志著蛋白質(zhì)工程的正式誕生。在以后的二十多年里，蛋白質(zhì)工程有了長(zhǎng)足的發(fā)展且應(yīng)用于醫(yī)學(xué)

2、，農(nóng)業(yè)，輕工等各個(gè)領(lǐng)域，產(chǎn)生了較大的經(jīng)濟(jì)效益和社會(huì)效益。一.蛋白質(zhì)工程在醫(yī)藥中的的醫(yī)用基因工程為實(shí)現(xiàn)蛋白質(zhì)工程已經(jīng)提供了基因克隆、表達(dá)、突變以至活性測(cè)定等關(guān)鍵技術(shù)，而蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)分析、結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)和預(yù)測(cè)為蛋白質(zhì)工程的實(shí)施提供了必要的結(jié)構(gòu)模型和結(jié) 構(gòu)基礎(chǔ)。蛋白質(zhì)工程的實(shí)施實(shí)際上是一個(gè)由理論到實(shí)踐、由實(shí)踐到理論的周而復(fù)始的研究過(guò)程，對(duì)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)一功能關(guān)系的規(guī)律性認(rèn)識(shí)是一個(gè)螺旋式上升的過(guò)程。蛋白質(zhì)工程不但有著廣泛的應(yīng)用前景，而且在揭示蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)形成和功能表達(dá)的關(guān)系研究中也是一個(gè)不可替代 的手段。（一）蛋白質(zhì)工程在醫(yī)藥中的應(yīng)用1抗體工程的應(yīng)用抗體工程的出發(fā)點(diǎn)是改善抗體的特異性、親和性以及在受體細(xì)胞中

3、的可生產(chǎn)性。當(dāng)然也包括使其特性擴(kuò)展，可同時(shí)作用于不同的抗原。 對(duì)于很多應(yīng)用而言，只改變親和性是不夠的。 在一些應(yīng)用中，特別小的抗體片段是必需的；鼠抗體必須改成人抗體；再者，增加抗體分子對(duì)蛋白酶的穩(wěn)定性以及正確折疊都是重要的考慮。下面以一個(gè)特異性結(jié)合實(shí)體瘤的單克隆鼠抗體為例。這種抗體對(duì)高度特異性腫瘤治療而言是很理想的，它可以將免疫毒素帶到瘤細(xì)胞中，從而殺死瘤細(xì)胞。由于完整的抗體分子太大，不能最大限度地?cái)U(kuò)散到瘤體中，以致不能完成治療目的。為此，必須將抗體分子變小， 抗體的最小片段Fv就成了最佳候選分子。然而Fv本身不穩(wěn)定，這樣抗體運(yùn)載體Fy和所攜帶的毒素可能在到達(dá)目的地之前就分開(kāi)。因而，首先要使其

4、穩(wěn)定化；然后抗體的親和性要盡可能高，這是因?yàn)榭贵w對(duì)抗原 （即瘤細(xì)胞）的結(jié)合越好，所攜帶的毒素錯(cuò)誤地在身體內(nèi)傳布的 危險(xiǎn)性就越小，抗體更能達(dá)到其目的地。 然而，如果病人的免疫系統(tǒng)將這個(gè)鼠源抗體識(shí)別為外源蛋白質(zhì)，則幾天之后由于HAMA反應(yīng)產(chǎn)生的人抗鼠抗體就阻斷了攜帶毒素的鼠抗體到達(dá)瘤細(xì)胞之路，使免疫治療歸于失敗。為了解決這一問(wèn)題，就要對(duì)抗體進(jìn)行改造。近年來(lái)， 用大腸桿菌系統(tǒng)有效地表達(dá)所需要的特定功能的抗體技術(shù)取得突破，向人們提供了具有全新性質(zhì)的醫(yī)用抗體片段。以上就是對(duì)鼠源抗體改造的路子。如上所述，由于 HAMA 免疫反應(yīng)直接從具有特異性結(jié)合活性的鼠源單抗在治療中的 作用就受到限制。由于絕大多數(shù)HA

5、MA抗體是抗鼠源抗體的恒定區(qū)，使人們想到產(chǎn)生嵌合抗體可能解決上述問(wèn)題，即將鼠單抗的恒定區(qū)換成人抗的恒定區(qū)。由于人抗體基因和鼠抗體基因都可以分別進(jìn)行克隆，利用PCR技術(shù)很容易將鼠單抗可變區(qū)與人的恒定區(qū)重組到一起， 所得到的嵌合抗體仍然能特異性地結(jié)合抗原，而HAMA反應(yīng)被減少。由于這樣的嵌合抗體的恒定區(qū)（或恒定結(jié)構(gòu)域）來(lái)源于人，因而它對(duì)于激活人免疫系統(tǒng)的某些輔助功能更有效，則 可有效地激活依賴于抗體的細(xì)胞的細(xì)胞毒性（ADCC）,這就是某些像這樣的人源化抗體已經(jīng)用到臨床實(shí)驗(yàn)的原因。如前所述，抗體的人源化可很明顯地減低HAMA 反應(yīng)，但也產(chǎn)生少數(shù)抗鼠可變結(jié)構(gòu)域的人抗鼠抗體（HAMA抗體）。從抗體的結(jié)構(gòu)

6、圖中可以看出抗體的可變結(jié)構(gòu)域可以分成為超 變區(qū)（即互補(bǔ)性決定區(qū) CDRs）和變化性較少的骨架區(qū)，而與抗原的結(jié)合是由超變區(qū)決定的。與超變區(qū)相比，這些骨架區(qū)是保守的， 這些有限的骨架區(qū)的氨基酸序列由一個(gè)緊密相關(guān)的基 因家族編碼。這種結(jié)構(gòu)特點(diǎn)使人們想到，是否可以將鼠抗體的超變區(qū)嫁接到一個(gè)相關(guān)的人抗 體可變結(jié)構(gòu)域的骨架部位， 這就是所謂的超變區(qū)嫁接的設(shè)計(jì)。按著這一種設(shè)想產(chǎn)生的第一個(gè)抗體，其親和性比它的前體 （鼠抗體）明顯地降低。隨著對(duì)許多不同抗體的三級(jí)結(jié)構(gòu)認(rèn)識(shí)的擴(kuò) 大，CDR嫁接所得到的結(jié)果也隨之改善。現(xiàn)在，幾個(gè)完全人源化抗體的親和性已與鼠抗體 幾乎沒(méi)有差別，用這樣的抗體作為治療制劑也再不受HAMA反

7、應(yīng)的困擾。這些研究也對(duì)抗體的結(jié)構(gòu)功能研究有很大促進(jìn)，發(fā)現(xiàn)了在抗體可變區(qū)某些氨基酸是很 重要的，某些氨基酸的配對(duì)對(duì)可變區(qū)的穩(wěn)定性和正確折蠢是不可替代的。在人源化抗體的操作中，這些氨基酸都不能改變。 這些發(fā)現(xiàn)體現(xiàn)了蛋白質(zhì)工程操作從理論到實(shí)踐，再由實(shí)踐到理論的過(guò)程?？傊?，通過(guò)抗體的蛋白質(zhì)工程可以對(duì)具有特定結(jié)合活性的鼠源抗體人源化，為疾病的 治療提供安全可靠的藥物。此外還可以通過(guò)同源融合、異源融合產(chǎn)生各種雙功能抗體用于臨 床的治療。人抗鼠抗體（HAMA）檢測(cè)試劑盒2,抗體酶的應(yīng)用抗體酶是研究酶作用機(jī)理的有力工具。酶抑制劑的研究支持了Pauling過(guò)渡態(tài)理論，但它只能提供作用過(guò)程中結(jié)合專一性的信息，不能

8、給出結(jié)合后發(fā)生催化反應(yīng)以及結(jié)合與催化之間的關(guān)系?？贵w酶實(shí)驗(yàn)則彌補(bǔ)了這一缺陷。除了基礎(chǔ)理論研究的價(jià)值，抗體酶的應(yīng)用前景也令人鼓舞。Lerner指出，若將催化水解反應(yīng)的抗體酶研究深入下去，極有可能得到一種新型蛋白酶，這種抗體酶在醫(yī)學(xué)上可用來(lái)專一破壞病毒蛋白質(zhì)及清除體內(nèi)“垃圾"。Lerner還提到，將具有立體專一性的抗體酶應(yīng)用于制藥工業(yè)，將有助于解決對(duì)映體拆分的難題。隨著制備抗體酶新方法的不斷發(fā)展，抗體酶的催化反應(yīng)的范圍將進(jìn)一步拓寬特別是對(duì)那些天然酶不能催化的反應(yīng)，則可研制抗體酶來(lái)進(jìn)行催化。其次，抗體酶的研究，為人們提供了一條合理途徑去設(shè)計(jì)適合于市場(chǎng)需要的蛋白質(zhì)，即人為地設(shè)計(jì)制作酶。這是酶

9、工程的一個(gè)全新領(lǐng)域。例如：利用動(dòng)物免疫系統(tǒng)產(chǎn)生抗體的高度專一性，可以得到一系列高度專一性的抗體酶，成為針對(duì)性強(qiáng)、藥效高的藥物，于是生產(chǎn)高 純度立體專一性的藥物成為現(xiàn)實(shí)。又如：以某個(gè)生化反應(yīng)的過(guò)渡態(tài)類似物來(lái)誘導(dǎo)免疫反應(yīng)，產(chǎn)生特定抗體酶，以治療某種酶先天性缺陷的遺傳病。 抗體酶還可有選擇地使病毒外殼蛋白 的肽鍵裂解，從而防止病毒與靶細(xì)胞結(jié)合。另外， 抗體酶的固定化已獲得成功，將大大地推 進(jìn)工業(yè)化進(jìn)程。標(biāo)記抗半抗原抗體一半抗原標(biāo)記特異抗體組織抗原統(tǒng)體鰭構(gòu)域族體苒帶黑城3,融合蛋白質(zhì)的應(yīng)用腦啡脹（Enk）N端5肽線性結(jié)構(gòu)是8型受體結(jié)合的基本功能區(qū)域，干擾素（IFN）是一種廣譜抗病毒抗腫瘤的細(xì)胞因子。黎

10、孟楓等人化學(xué)合成了Enk N端5肽編碼區(qū)，通過(guò)一連接 3肽編碼區(qū)與人a 1型IFN基因連接，在大腸桿菌中表達(dá)了這一融合蛋白。以體外人結(jié)腸腺癌細(xì)胞和多形膠質(zhì)瘤細(xì)胞為模型，采用3H一胸腺喀咤核昔摻入法證明該融合蛋白抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的活性顯著高于單純的IFN,通過(guò)Naloxone競(jìng)爭(zhēng)阻斷實(shí)驗(yàn)證明，抑制活性的增高確由Enk導(dǎo)向區(qū)介導(dǎo)。表2處于臨床赳無(wú)院段的百世白融合菊也TinHs 2 A MHHuy of HSAHEuiJmi pruiviii Jm靜 in clinical HMmb幽情名霸他*惟融件后與硼臺(tái)前 半壺瓣乘也值適應(yīng)證或用途研殖段研發(fā)公司. il «. luliik22102型

11、相尿病m -：；：荒”索史克uillRjIrni-n就3 01M)a-ah實(shí)體痛，慢性蜘醐的怵白皿病匐西邛忖燙in培隼dllml n ijiiiin工長(zhǎng)曲上CH.i4-6生長(zhǎng)徼峨穗陷II F1心allmgraBiiin2中性和班嵬減少癥口案梯瓦制藥曲 mi240-340利尿劑u -：梯配材菊alliulliii4211KW2 M觸球病叫梅，.用醬IJ&E 國(guó).A t lX sII型血友病|期杰靜貝怫4,蛋白質(zhì)工程酶的應(yīng)用蛋白質(zhì)酶工程在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用相當(dāng)成功。人體的消化功能依靠胃腸運(yùn)動(dòng)的機(jī)械性消化和消化酶作用的化學(xué)性消化來(lái)完成。消化液中含有大量消化酶，可促進(jìn)食物中糖、脂肪、 蛋白質(zhì)的水解。

12、由大分子物質(zhì)變?yōu)樾》肿游镔|(zhì)，以便被人體吸收利用。葡萄糖、甘油、甘油-酯、氨基酸等都是可溶解的小分子物質(zhì)，可被小腸吸收。臨床中，消化酶不足既可引起廣泛的消化不良癥候群，如胃腸脹氣、胃飽脹、惡心、腹痛 、腹瀉、厭食等癥狀，還影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì) 的消化和吸收，造成低蛋白血癥、脂肪性腹瀉、脂溶性維生素缺乏、內(nèi)分泌紊亂等。藥物消 化酶則可以有效地解決這方面的疾病。消炎酶，溶菌酶，抗腫瘤酶等蛋白酶也在疾病的治療中各有其不同，為生命工程的發(fā)展做出了巨大貢獻(xiàn)。注射用胰蛋白酶a -葡糖甘酶浮事靜含片消炎酶 力克舒膠囊是一種加酶抗感冒藥。 具有解熱鎮(zhèn)痛、消炎止咳效果。力克舒 膠囊最大特點(diǎn)是配方中加入消炎酶， 它是從菠蘿

13、汁或其莖汁水中提取的一種蛋白水解酶。力克舒主要針對(duì)感冒癥狀，對(duì)鼻咽部卡他癥狀（如鼻塞、流涕、咽充血、痰涎等）。因就I力克舒電二，蛋白質(zhì)工程的發(fā)展前景蛋白質(zhì)工程研究，從2 0世紀(jì)8 0年代初至今，由于分子生物學(xué)和技術(shù)科學(xué)相結(jié)合， 已經(jīng)完成了幾十種蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)的改造。在蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與其功能的研究上已獲得很多有價(jià)值的檢測(cè)資料。人們已經(jīng)初步掌握了蛋白質(zhì)工程的技術(shù)程序，這就是基因定位、誘變。在了解蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)與功能的基礎(chǔ)上，對(duì)突變后的一維纖性肽鏈進(jìn)行分子設(shè)計(jì)，從而構(gòu)建全新的蛋白質(zhì)分子。當(dāng)今，在這個(gè)技術(shù)程序的控制手段方面已經(jīng)取得了關(guān)鍵技術(shù)的突破。當(dāng)前，蛋白質(zhì)工程是發(fā)展較好、較快的分子工程。這是因?yàn)樵谶M(jìn)行

14、蛋白質(zhì)分子設(shè)計(jì) 后，已可應(yīng)用高效的基因工程來(lái)進(jìn)行蛋白的合成。最早的蛋白工程是福什特(Forsht)等在1982 1985年間對(duì)酪氨酰一tRNA合成酶的分子改造工作。他根據(jù) XRD (X射線衍射) 實(shí)測(cè)該酶與底物結(jié)合部位結(jié)構(gòu)，用定位突變技術(shù)改變與底物結(jié)合的氨基酸殘基，并用動(dòng)力學(xué)方法測(cè)量所得變體酶的活性，深入探討了酶與底物的作用機(jī)制。佩里( Perry) 1984年通過(guò) 將溶菌酶中Ile(3)改成Cys(3),并進(jìn)一步氧化生成 Cys(3)-Cys (97)二硫鍵，使酶熱穩(wěn)定性 提高，顯著改進(jìn)了這種食品工業(yè)用酶的應(yīng)用價(jià)值。1987年福什特通過(guò)將枯草桿菌蛋白酶分子表面的Asp (99)和Glu (1

15、56)改成Lys,而導(dǎo)致了活性中心 His (64)質(zhì)子pKa從7下降到6,使酶在pH=6時(shí)的活力提高10倍。工業(yè)用酶最佳 pH的改變預(yù)示可帶來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)效 益。蛋白工程還可對(duì)酶的催化活性、底物專一性、抗氧化性、熱變性、堿變性等加以改變。由此可以看出蛋白工程的威力及其光輝前景。上述各例是通過(guò)對(duì)關(guān)鍵氨基酸殘基的置換與增刪進(jìn)行蛋白工程的一類方法。另一類是以某個(gè)典型的折疊進(jìn)行“從頭設(shè)計(jì)”的方法。1988年杜邦公司宣布，成功設(shè)計(jì)并合成了由四段反平行“一螺旋組成為73個(gè)氨基殘基的成果。這顯示，按人們預(yù)期要求，通過(guò)從頭設(shè)計(jì)以折疊成新蛋白的目標(biāo)已是可望又可及了。預(yù)測(cè)結(jié)構(gòu)的模型法，在奠定分子生物學(xué)基礎(chǔ)時(shí)起過(guò)重大

16、作用。蛋白的一級(jí)結(jié)構(gòu)，包含著關(guān)于高級(jí)結(jié)構(gòu)的信息這一點(diǎn)已日益明確。結(jié)合模型法，通過(guò)分子工程來(lái)預(yù)測(cè)高級(jí)結(jié)構(gòu)，已成為人們所矚目的問(wèn)題了。蛋白質(zhì)工程匯集了當(dāng)代分子生物學(xué)等學(xué)科的一些前沿領(lǐng)域的最新成就，它把核酸與蛋白質(zhì)結(jié)合、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)與生物功能結(jié)合起來(lái)研究。蛋白質(zhì)工程將蛋白質(zhì)與酶的研究推進(jìn)到嶄新的時(shí)代，為蛋白質(zhì)和酶在工業(yè)、 農(nóng)業(yè)和醫(yī)藥方面的應(yīng)用開(kāi)拓了誘人的前景。蛋白質(zhì)工程開(kāi)創(chuàng)了按照人類意愿改造、創(chuàng)造符合人類需要的蛋白質(zhì)的新時(shí)期。蛋白質(zhì)工程取得的進(jìn)展向人們展示出誘人的前景。例如，科學(xué)家通過(guò)對(duì)胰島素的改造， 已使其成為速效型藥品。如今，生物和材料科學(xué)家正積極探索將蛋白質(zhì)工程應(yīng)用于微電子方 面。用蛋白質(zhì)工

17、程方法制成的電子元件，具有體積小、耗電少和效率高的特點(diǎn)，因此有極為廣闊的發(fā)展前景。在21實(shí)際的社會(huì)發(fā)展 為我們提供極大的便利，1 士總結(jié):一 月二月三月產(chǎn)品名稱數(shù)量金額利潤(rùn)產(chǎn)品名稱數(shù)量金額利潤(rùn)產(chǎn)品名稱數(shù)量金額利潤(rùn)合計(jì)合 計(jì)合 計(jì)總而言之，蛋白質(zhì)工程作為生物工程領(lǐng)域的一向重要技術(shù)和發(fā)展方向, 中將會(huì)有更多的蛋白質(zhì)工程的技術(shù)和產(chǎn)品應(yīng)用到我們的日?；顒?dòng)中， 解決許多重大的難題，為社會(huì)進(jìn)步和經(jīng)濟(jì)發(fā)展起到重大的推動(dòng)作用。四月五月六月產(chǎn)品名稱數(shù) 量金 額利 潤(rùn)產(chǎn)品名稱數(shù) 量金 額利 潤(rùn)產(chǎn)品名稱數(shù) 量金 額利 潤(rùn)合計(jì)合 計(jì)合 計(jì)下午 13 : 00 17 : 00B-實(shí)行不定時(shí)工作制的員工，在保證完成甲方工

18、作任務(wù)情況下，經(jīng)公司同意，可自行安排工作和休息時(shí)間。3.1.2打卡制度.3.1.2.1 公司實(shí)行上、下班指紋錄入打卡制度。全體員工都必須自覺(jué)遵守工作時(shí)間，實(shí)行不定時(shí)工作制的員工不必打卡。3.1.2.2 打卡次數(shù)：一日兩次，即早上上班打卡一次，下午下班打卡一次。3.1.2.3 打卡時(shí)間：打卡時(shí)間為上班到崗時(shí)間和下班離崗時(shí)間；3.1.2.4 因公外出不能打卡：因公外出不能打卡應(yīng)填寫(xiě)外勤登記表，注明外出日期、事由、外勤起止時(shí)間。因公外出需事先申請(qǐng)，如因特殊情況不能事先申請(qǐng)，應(yīng)在事畢到崗當(dāng)日完成申請(qǐng)、審批手續(xù)，否則按曠工處理。因停電、卡鐘（工卡）故障未打卡的員工，上班前、下班后要及時(shí)到部門考勤員處填寫(xiě)

19、未打卡補(bǔ)簽申請(qǐng)表，由直接主管簽字證明當(dāng)日的出勤狀況，報(bào)部門經(jīng)理、人力資源部批準(zhǔn)后，月底由部門考勤員據(jù)此上報(bào)考勤。上述情況考勤由各部門或分公司和項(xiàng)目文員協(xié)助人力資源部進(jìn)行管理。3.1.2.5 手工考勤制度3.1.2.6 手工考勤制申請(qǐng)：由于工作性質(zhì)，員工無(wú)法正常打卡（如外圍人員、出差），可由各部門提出人員名單，經(jīng)主管副總批準(zhǔn)后，報(bào)人力資源部審批備案。3.1.2.7 參與手工考勤的員工，需由其主管部門的部門考勤員（文員）或部門指定人員進(jìn)行考勤管理，并于每月26日前向人力資源部遞交考勤報(bào)表。3.1.2.8 參與手工考勤的員工如有請(qǐng)假情況發(fā)生，應(yīng)遵守相關(guān)請(qǐng)、休假制度，如實(shí)填報(bào)相關(guān)表單。3.1.2.9

20、外派員工在外派工作期間的考勤，需在外派公司打卡記錄；如遇中途出差，持出差證明，出差期間的考勤在出差地所在公司打卡記錄；3.2加班管理3.2.1 定義加班是指員工在節(jié)假日或公司規(guī)定的休息日仍照常工作的情況。A.現(xiàn)場(chǎng)管理人員和勞務(wù)人員的加班應(yīng)嚴(yán)格控制，各部門應(yīng)按月工時(shí)標(biāo)準(zhǔn)，合理安排工作班次。部門經(jīng)理要嚴(yán)格審批員工排班表，保證員工有效工時(shí)達(dá)到要求。凡是達(dá)到月工時(shí)標(biāo)準(zhǔn)的，應(yīng)扣減員工本人的存休或工資；對(duì)超出月工時(shí)標(biāo)準(zhǔn)的，應(yīng)說(shuō)明理由，報(bào)主管副總和人力資源部審批。B-因員工月薪工資中的補(bǔ)貼已包括延時(shí)工作補(bǔ)貼，所以延時(shí)工作在4小時(shí)（不含）以下的，不再另計(jì)加班工資。因工作需要，一般員工延時(shí)工作4小時(shí)至8小時(shí)可申

21、報(bào)加班半天，超過(guò) 8小時(shí)可申報(bào)加班1天。對(duì)主管（含）以上管理人員，一般情況下延時(shí)工作不計(jì)加班，因特殊情況經(jīng)總經(jīng)理以上領(lǐng)導(dǎo)批準(zhǔn)的延時(shí)工作，可按以上標(biāo)準(zhǔn)計(jì)加班。3.2.2.2 員工加班應(yīng)提前申請(qǐng)，事先填寫(xiě)加班申請(qǐng)表，因無(wú)法確定加班工時(shí)的，應(yīng)在本次加班完成后3個(gè)工作日內(nèi)補(bǔ)填加班申請(qǐng)表。加班申請(qǐng)表經(jīng)部門經(jīng)理同意，主管副總經(jīng)理審核報(bào)總經(jīng)理批準(zhǔn)后有效。加班申請(qǐng)表必須事前當(dāng)月內(nèi)上報(bào)有效，如遇特殊情況，也必須在一周內(nèi)上報(bào)至總經(jīng)理批準(zhǔn)。如未履行上述程序，視為乙方自愿加班。3.2.2.3 員工加班，也應(yīng)按規(guī)定打卡，沒(méi)有打卡記錄的加班，公司不予承認(rèn)；有打卡記錄但無(wú)公司總經(jīng)理批準(zhǔn)的加班，公司不予承認(rèn)加班。3.2.2.

22、4 原則上，參加公司組織的各種培訓(xùn)、集體活動(dòng)不計(jì)加班。3.2.2.5 加班工資的補(bǔ)償：?jiǎn)T工在排班休息日的加班，可以以倒休形式安排補(bǔ)休。原則上，員工加班以倒休形式補(bǔ)休的，公司將根據(jù)工作需要統(tǒng)一安排在春節(jié)前后補(bǔ)休。加班可按1 : 1的比例沖抵病、事假。3.2.3加班的申請(qǐng)、審批、確認(rèn)流程3.2.3.1 加班申請(qǐng)表在各部門文員處領(lǐng)取，加班統(tǒng)計(jì)周期為上月26日至本月25日。3.2.3.2 員工加班也要按規(guī)定打卡，沒(méi)有打卡記錄的加班，公司不予承認(rèn)。各部門的考勤員（文員）負(fù)責(zé)加班申請(qǐng)表的保管及加班申報(bào)。員工加班應(yīng)提前申請(qǐng)，事先填寫(xiě)加班申請(qǐng)表加班前到部門考勤員（文員）處領(lǐng)取加班申請(qǐng)表，加班申請(qǐng)表經(jīng)項(xiàng)目管理中

23、心或部門經(jīng)理同意，主管副總審核，總經(jīng)理簽字批準(zhǔn)后有效。填寫(xiě)并履行完審批手續(xù)后交由部門考勤員（文員）保管。3.2.3.3 部門考勤員（文員）負(fù)責(zé)檢查、復(fù)核確認(rèn)考勤記錄的真實(shí)有效性并在每月27日匯總交人力資源部，逾期未交的加班記錄公司不予承認(rèn)。下午 13 : 00 17 : 00度。全體員工都必須自覺(jué)遵守工作時(shí)間，實(shí)行不定時(shí)工作制的員工不必打卡。3.1.2.2 打卡次數(shù)：一日兩次，即早上上班打卡一次，下午下班打卡一次。3.1.2.3 打卡時(shí)間：打卡時(shí)間為上班到崗時(shí)間和下班離崗時(shí)間；3.1.2.4 因公外出不能打卡：因公外出不能打卡應(yīng)填寫(xiě)外勤登記表，注明外出日期、事由、外勤起止時(shí)間。因公外出需事先申

24、請(qǐng)，如因特殊情況不能事先申請(qǐng)，應(yīng)在事畢到崗當(dāng)日完成申請(qǐng)、審批手續(xù)，否則按曠工處理。因停電、卡鐘（工卡）故障未打卡的員工，上班前、下班后要及時(shí)到部門考勤員處填寫(xiě)未打卡補(bǔ)簽申請(qǐng)表，由直接主管簽字證明當(dāng)日的出勤狀況，報(bào)部門經(jīng)理、人力資源部批準(zhǔn)后，月底由部門考勤員據(jù)此上報(bào)考勤。上述情況考勤由各部門或分公司和項(xiàng)目文員協(xié)助人力資源部進(jìn)行管理。3.1.2.5 手工考勤制度3.1.2.6 手工考勤制申請(qǐng)：由于工作性質(zhì)，員工無(wú)法正常打卡（如外圍人員、出差），可由各部門提出人員名單，經(jīng)主管副總批準(zhǔn)后，報(bào)人力資源部審批備案。3.1.2.7 參與手工考勤的員工，需由其主管部門的部門考勤員（文員）或部門指定人員進(jìn)行考勤管理，并于每月26日前向人力資源部遞交考勤報(bào)表。3.1.2.8 參與手工考勤的員工如有請(qǐng)假情況發(fā)生，應(yīng)遵守相關(guān)請(qǐng)、休假制度，如實(shí)填報(bào)相關(guān)表單。3.1.2.9 外派員工在外派工作期間的考勤，需在外派公司打卡記錄；如遇中途出差，持出差證明，出差期間的考勤在出差地所在公司打卡記錄；3.2加班管理3.2.1 定義加班是指員工在節(jié)假日或公司規(guī)定的休息日仍照常工作的情況。A.現(xiàn)場(chǎng)管理人員和勞務(wù)人員的加班應(yīng)嚴(yán)格控制，各部門應(yīng)按月工時(shí)標(biāo)準(zhǔn)，合理安排工作班次。部門經(jīng)理要嚴(yán)格審批員工排班表，保證員工有效工時(shí)達(dá)到要求。凡是達(dá)到月工時(shí)標(biāo)準(zhǔn)的，應(yīng)扣減員工本人的