習(xí)題2核酸分子雜交技術(shù)

1、第二章核酸雜交技術(shù)E原位雜交（一）名詞解釋1 .原位雜交2 .核酸分子雜交技術(shù)3 .探針4 .反向點雜交5 .缺口平移標(biāo)記法6 .隨機引物標(biāo)記法7 .末端標(biāo)記法8 .Southernblot雜交9 .熒光原位雜交10 .菌落雜交（二）選擇題A型題】1 .DNA鏈的Tm值主要取決于核酸分子的（AGC含量BA-T含量CA-G含量DA-C含量ET-G含量2 .液相雜交是下列哪一種（）ASouthem印跡雜交BNorthem印跡雜交CDot印跡雜交DSlot印跡雜交ERPA實驗3 .研究得最早的核酸分子雜交種類是（）A菌落雜交BSouthern雜交CNorthern雜交D液相雜交4 .Southern

2、雜交通常是指（）ADNA和RNA雜交BDNA和DNA雜交CRNA和RNA雜交D蛋白質(zhì)和蛋白質(zhì)雜交EDNA和蛋白質(zhì)雜交5 .最容易降解的核酸探針是（）AcDNA探針BdsDNA探針CssDNA探針DgDNA探針E:RNA6 .探針基因芯片技術(shù)的本質(zhì)就是（）A核酸分子雜交技術(shù)B蛋白質(zhì)分子雜交技術(shù)C聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)D基因重組技術(shù)E酶切技術(shù)7 .DNAf針的長度通常為（）A10002000個堿基B5001000個堿基C400500個堿基D100400個堿基E.<100個堿基8 .寡核昔酸探針的最大的優(yōu)勢是（）A雜化分子穩(wěn)定B可以區(qū)分僅僅一個堿基差別的靶序列C易標(biāo)記D易合成E易分解9 .在Sout

3、hern印跡中常用的核酸變性劑是（）A甲醛B乙醛C氫氧化鈉D碳酸鈉E鹽酸10 .鹽酸硝酸纖維素膜最大的優(yōu)點是（）A脆性大B本底低C共價鍵結(jié)合D非共價鍵結(jié)合E高結(jié)合力11 .最常用的DNA探針標(biāo)記方法是（）A隨機引物B切口平移C3'-末端標(biāo)記D5-末端標(biāo)記EPCR法12 .為了除去探針，重復(fù)使用濾膜，以下哪種情況不可以發(fā)生（）A探針在預(yù)雜交與除去探針之間的過程中曾經(jīng)干燥過B探針在預(yù)雜交與除去探針之間的過程中曾經(jīng)濕潤過C探針在預(yù)雜交與除去探針之間的過程中曾經(jīng)溫浴過D探針在預(yù)雜交與除去探針之間的過程中曾經(jīng)漂洗過E探針在預(yù)雜交與除去探針之間的過程中曾經(jīng)標(biāo)記過13 .5'一末端的DNA探

4、針標(biāo)記主要依靠的酶是（）AT4多聚核昔酸激酶B末端轉(zhuǎn)移酶CAKPDDNApolIIEDNApol14 .血友病是一種（）A染色體病BX連鎖遺傳病C先天性代謝缺陷病D先天畸形E常染色體隱性遺傳病15 .預(yù)雜交中最常用的封閉劑是（）ADenhavdt's溶液B5XTBEC1XTBED1XTAEE1XTPE16 .檢測目標(biāo)是RNA的技術(shù)是（）ASouthern雜交BWestern雜交CNorthern雜交DEastern雜交E雜交淋巴瘤17 .檢測靶序列是DNA的技術(shù)是（）ASouthern雜交BWestern雜交CNorthern雜交DEastern雜交E雜交淋巴瘤18 .DNA雙螺旋之間

5、氫鍵斷裂，雙螺旋解開，DNA分子成為單鏈，這一過程稱（）A變性B復(fù)性C復(fù)雜性D雜交E探針19 .具有堿基互補區(qū)域的單鏈又可以重新結(jié)合形成雙鏈，這一過程稱()A變性B復(fù)性C復(fù)雜性D雜交E探針20 .一種標(biāo)記核酸與另一種核酸單鏈進行配對形成異源核酸分子的雙鏈，這一過程稱()A變性B復(fù)性C復(fù)雜性D雜交E探針21 .點/狹縫雜交可以用于()A快速確定是否存在目的基因B不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息C用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測22 .放射自顯影時反射光產(chǎn)生的潛影在低溫下較穩(wěn)定，最適溫度是()A-70B-30CC-20

6、D-10E4cA不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息B檢測的目標(biāo)是RNAC用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測24 .寡核昔酸探針的Tm簡單計算公式為()ATm=4(G+C)+2(A+T)BTm=2(G+C)+4(A+T)CTm=6(G+C)+4(A+T)DTm=2(G+C)+6(A+T)ETm=6(G+C)+2(A+T)25 .Northern印跡雜交可以用于()A快速確定是否存在目的基因B不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息C檢測的目標(biāo)是RNAD用于基因定位分

7、析E陽性菌落的篩選2626 .熒光原位雜交可以用于()A快速確定是否存在目的基因B檢測的目標(biāo)是RNAC用于基因定位分析D陽性菌落的篩選E蛋白水平的檢測27 .以等位基因特異的寡核昔酸探針雜交法診斷某常染色體隱性遺傳病時，若能與突變探針及正常探23.Southern印跡雜交可以用于()A正常人針接合，則該樣本為()B雜合體患者C純合體患者D攜帶者E不能確定28 .在pH為下述何種范圍時，Tm值變化不明顯（）ApH為35BpH為45CpH為56DpH為59EpH為81129 .一般來說，設(shè)計的寡核昔酸探針的長度為（）A2-10bpB17-50bpC60-100bpD100-200bpE200-30

8、0bp30 .變性劑可使核酸的Tm值降低，常用的變性劑是（）A甲酰胺B氫氧化鈉C濃鹽酸D稀鹽酸E甲醇31 .下列有關(guān)cDNA探針的描述不正確的為（）A利用mRNA通過RT-PCR在體外反轉(zhuǎn)錄可制備大量的cDNA探針BcDNA探針不包含內(nèi)含子CcDNA探針不包含大量的高度重復(fù)序列D由于cDNA探針自身所攜帶的poly（dT）,有可能產(chǎn)生非特異性雜交的問題EcDNA探針合成方便，成為探針的重要來源32.一般來說核酸雜交的溫度低于其Tm值的多少度進行（）A1525cB1015cC510cD3040cE4050c33 .對于寡核昔酸探針，雜交溫度一般般低于其Tm值（）A3040cB2030cC1530

9、cD1015cE5c34 .一般情況下，不含變性劑甲酰胺時，雜交反應(yīng)常在多少C下進行（）A90B80C75D68E5835 .在含50湖酰胺時，雜交反應(yīng)在多少C進行（）A70B65C55D42E3536 .雜交時的溫度與錯配率有關(guān)，錯配率每增加1%則Tm值下降（）A0.5CB11.5CC22.5CD33.SCE44.5C37 .RNA/RNA勺雜交體的Tm值一般應(yīng)增加（）A15cB510cC1015cD1520cE2025c38 .雜交的時間一般為。11/2的（）A4B13倍C35倍D58倍E10倍以上39 .為封閉非特異性雜交位點，可在預(yù)雜交液中加入（）AssDNAB1XSSCC10>

10、SSCD5燈BECE50燈AE40 .隨機引物法標(biāo)記探針常用的AGC、T聚合體的數(shù)目是（）A4個B6個C8個D10個E12個【X型題】41 .下列哪些是影響DNA復(fù)性的因素（）ADNA濃度BDNA的分子量C溫度D堿基組成EDNA的來源42 .DNA探針的優(yōu)點有（）A制備方法簡單BDNA探針易降解CDNA探針的標(biāo)記方法成熟，有多種方法可以選擇D克隆在質(zhì)粒載體中，可以無限繁殖，取之不盡E單鏈，不存在競爭性的自身復(fù)性43 .以下哪些方法可以用于探針的全程標(biāo)記（）ADNA加尾法BDNA切口平移標(biāo)記法C隨機引物標(biāo)記法E尾端標(biāo)記44 .關(guān)于DNA變性的描述正確的是（）A二級結(jié)構(gòu)破B一級結(jié)構(gòu)破壞C黏度降低D

11、生物活性喪失E浮力密度增加45 .以下哪些因素可以使DNA變性（）A增加溶液的濃度B加熱C改變?nèi)芤旱膒H值D有機溶劑E冷藏46 .預(yù)雜交中，下列能起封閉作用的是（）AssDNABBSAC小牛胸腺DNAD脫脂奶粉EDTT47 .變性的DNA會發(fā)生哪些理化性質(zhì)的變化（）A粘度下降B沉降速度增加C浮力下降D紫外光吸收增加E紫外光吸收減少48 .下列物質(zhì)適于非放射性探針標(biāo)記的是（）AAKPBACPC生物素D地高辛E熒光素49 .關(guān)于人工合成的寡核昔酸探針，下列描述正確的是（）A特異性高B可依賴氨基酸序列推測其序列D末端標(biāo)記C分子量小E可用末端轉(zhuǎn)移酶進行5'端標(biāo)記預(yù)雜交55.整個雜交反應(yīng)主要以下

12、哪些步驟組成（D可用于相似基因順序差異性分析AB采用大片段探針少量的反應(yīng)體積CD洗脫固定C高反應(yīng)溫度E轉(zhuǎn)移D不斷的振搖56.放射自顯影可以被分為（）E大量的反應(yīng)體積A直接放射自顯影51.關(guān)于切口平移法下述正確的是（）B氧化顯影AB可標(biāo)記線性DNA可標(biāo)記松散螺旋DNAC封閉顯影C可標(biāo)記超螺旋DNAD間接放射自顯影D可標(biāo)記存在缺口的雙鏈DNAE固定顯影E可標(biāo)記隨機引物57.()52.以下哪些方法可以用于從凝膠上轉(zhuǎn)移DNA（）AB快速、高效需要特殊設(shè)備A毛細(xì)轉(zhuǎn)移C緩沖?用TA豉TBEB真空轉(zhuǎn)移D可產(chǎn)生高溫C負(fù)壓轉(zhuǎn)移E常用NC膜作為支持介質(zhì)D電泳轉(zhuǎn)移58.預(yù)雜交的主要目的是（）E冷凍轉(zhuǎn)移A平衡濾膜53

13、.關(guān)于隨機引物法標(biāo)記探針下述正確的是（）B封閉非特異性雜交的位置AB可標(biāo)記單鏈DNA可標(biāo)記雙鏈RNAC提高雜交信號的檢測效率C可標(biāo)記單鏈RNAD便于從濾膜上除去探針D比活性高達108cpm/iigDNA以上E清除用于雜交反應(yīng)檢測的顯色物質(zhì)E常經(jīng)過SephadexG-50純化才可使用59.關(guān)于非放射性探針標(biāo)記，下列描述正確的是54.可以采用哪些方法來標(biāo)記探針（）()A對人體危害小A雜交標(biāo)記法B需要特殊設(shè)備B切口平移標(biāo)記法C可長時間使用C5'-末端的標(biāo)記DE靈敏度不如放射性探針重新雜交新探比較容易D3'-末端的標(biāo)記雜交50.通過哪些措施可以提高雜交反應(yīng)的速度（)60.對于改變DNA

14、片段長度的突變，可以由于缺E化學(xué)法延長標(biāo)記失或插入產(chǎn)生，或由于限制性酶切位點改變而導(dǎo)致限制性片段長度改變?？梢酝ㄟ^哪些方法檢測（）APCR擴增BRAPDCSoutherm印跡雜交DNorthern印跡雜交E以上都不是61 .重組DNA的篩選可用核酸分子雜交的方法，常用于檢測DNA的雜交方法有哪些（）A菌落印跡雜交BNorthern印跡雜交CWestern印跡雜交D原位雜交E斑點雜交62 .關(guān)于RNA探針的描述下列正確的是（）A可用于隨機引物標(biāo)記B特異性高C靈敏度高D可用非同位素標(biāo)記法標(biāo)記E不易降解63 .下列哪些可以作為核酸探針使用（）AmicroRNAB單鏈DNAC寡核昔酸DmRNAE雙鏈R

15、NA64.關(guān)于核酸探針的描述下列正確的是（）A可以是DNAB可以是RNAC可用放射性標(biāo)記D可用非放射性標(biāo)記E必須是單鏈核酸（三）問答題1 .根據(jù)哪三種不同的分類標(biāo)準(zhǔn)可以將雜交分為哪幾類？2 .簡述反義核酸技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用范圍3 .試述Northernblot雜交的操作步驟？4 .什么是肽核酸？并簡述其應(yīng)用？5 .請舉例說明雜交技術(shù)在臨床檢驗科基因診斷方面的應(yīng)用。6 .請敘述雜交探針標(biāo)記方法的種類。7 .簡述直接放射自顯影的原理。參考答案退火溫度下，能與各種單鏈DNA模板結(jié)合。首先（一）名詞解釋1 .原位雜交：是首先應(yīng)用核酸探針與組織或細(xì)胞中的核酸按堿基互補配對原則進行特異性結(jié)合形成雜交體

16、，然后應(yīng)用組織化學(xué)或免疫組織化學(xué)方法在顯微鏡下進行細(xì)胞內(nèi)基因定位或基因表達的檢測技術(shù)。2 .核酸分子雜交技術(shù)：單鏈的核酸分子在合適的條件下，與具有堿基互補序列的異源核酸形成雙鏈雜交體的過程稱作核酸分子雜交。利用核酸分子雜交檢測靶序列的一類技術(shù)稱核酸分子雜交技術(shù)。3 .探針：是一段單鏈或雙鏈核甘酸，用放射性核素或非放射性物質(zhì)標(biāo)記其末端或全鏈，可依堿基配對規(guī)律與具有互補序列的待測核酸進行雜交，以探測它們的同源程度。這一段標(biāo)記的核甘酸被稱為探針。4 .反向點雜交：是將多種探針固定在同一膜上，同時參與檢測的樣品DNA又互不干擾，故能一次性篩查出多種不同的序列，而不是像傳統(tǒng)的雜交法，一次僅能檢測一個未知

17、序列。5 .缺口平移標(biāo)記法：該法是利用低濃度DNaseI在DNA雙鏈上隨機切開若干個切口，然后利用E.coliDNA聚合酶I的5'外切酶活性和5'聚合酶活性，使DNA鏈上的核昔酸不斷被切除，而帶放射性核素標(biāo)記的dNTP不斷地被填入缺口位置，從而形成兩條鏈被均勻標(biāo)記的高放射活性的探針。6 .隨機引物標(biāo)記法：隨機引物是各種可能序列的寡核昔酸混合物，可以人工合成，也可以使用小牛胸腺DNA的DNaseI降解物。隨機引物在較低的使雙鏈DNA分子變性成為單鏈，然后退火使隨機引物結(jié)合于兩條單鏈模板上，當(dāng)反應(yīng)液中存在的4種dNTP中有一種帶放射性核素標(biāo)記時，在DNA聚合酶催化下合成新的帶標(biāo)記的

18、DNA鏈。反應(yīng)結(jié)束后經(jīng)純化即可得到標(biāo)記的DNA探針。7 .末端標(biāo)記法：寡核甘酸探針由于較其他類型的探針短，需要采用末端標(biāo)記法。該法需要DNA分子的末端帶有羥基，而人工合成寡核甘酸的5'端本身即為羥基。其原理是利用多核昔酸激酶將732PATP分子上7位磷酸基轉(zhuǎn)移至寡核甘酸鏈的5'末端，末端標(biāo)記也可在3'端進行。8 .Southernblot雜交：是研究DNA圖譜的基本技術(shù)，在遺彳診斷、DNA圖譜分析及PCR產(chǎn)物分析等方面有重要價值。Southern印跡雜交的方法是將標(biāo)本DNA用限制性內(nèi)切酶消化后，經(jīng)瓊脂糖電泳分離各酶切片段，接著，使酶切片段DNA發(fā)生變性并轉(zhuǎn)印到一固相支持

19、物（通常是硝酸纖維素薄膜或尼龍膜）上，經(jīng)固定后和標(biāo)記探針進行雜交。這種方法不僅可以檢測DNA樣品中是否存在某一特定的基因，而且還可以獲得基因片段的大小及酶切位點分布的信息。9 .熒光原位雜交：是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進行檢測的技術(shù)。它將熒光信號的高靈敏度、安全性，熒光信號的直觀性和原位雜交的高準(zhǔn)確性結(jié)合起來，通過熒光標(biāo)記的DNA探針與待測樣本的DNA進行原位雜交，在熒光顯微鏡下對熒光信號進行辨別和計數(shù)，從而對染色體或基因異常的細(xì)胞、組織樣本進行檢測和診斷，為各種基因相關(guān)疾病的分型、預(yù)前和預(yù)后提供準(zhǔn)確的依與DNA雜交，DNA與RNA雜交，RNA與RNA10 .菌落雜交：用于重組

20、細(xì)菌克隆篩選的固相雜交,雜交；根據(jù)雜交探針標(biāo)記的不同，可以分為同位稱菌落雜交，主要步驟包括：菌落平板培養(yǎng)；素雜交和非同位素雜交；根據(jù)雜交介質(zhì)的不同,濾膜滅菌后放到細(xì)菌平板上，是菌落粘附到經(jīng)適當(dāng)可以分為液相雜交、固相雜交和原位雜交；其中固飽和的吸水紙上；菌斑溶解產(chǎn)生單練的DNA固相雜交又可以分為菌落雜交、Southern雜交、定DNA用32P標(biāo)記的探針與菌落進行雜交；雜Northern雜交、點雜交和狹縫雜交。交后，洗脫未結(jié)合的探針，將濾膜暴露于X線膠片2.簡述反義核酸技術(shù)的基本原理及其應(yīng)用范圍進行放射自顯影；將自顯影膠片、濾膜、培養(yǎng)平反義核酸技術(shù)是近幾年發(fā)展起來的一項新的板相比較，就可以確生物技

21、術(shù)。它是根據(jù)堿基互補的原理，設(shè)計出能特定陽性菌落。異地同相應(yīng)靶基因結(jié)合的RNA或DNA,從而影響（二）選擇題靶基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯，以達到調(diào)控靶基因表達的目【A型題】的。反義核酸技術(shù)包括反義RNA技術(shù)，反義DNA2.E3.D4.B5.E6.A技術(shù)及核酶技術(shù)。7.C8.B9.C10B11A123.試述Northernblot雜交的操作步驟?13A1415A16C17A18RNA的變性瓊脂糖電泳；將硝酸纖維薄19B2021A2223A24膜放在含有RNA電泳條帶的凝膠上；轉(zhuǎn)印盤中25C26C27D28D29B30的轉(zhuǎn)移緩沖液將逐漸為膠和膜上覆蓋的吸水紙吸31E32A33E34D35收，從而利用毛細(xì)作用

22、將膠中的變性RNA分子36B3738B39A40.B轉(zhuǎn)移到硝酸纖維薄膜上；轉(zhuǎn)印完成后，使RNA分子固定到膜上；膜上的RNA分子與探針雜交;41ABCD42ACD43BC44.CACDE寸自顯影5淇BCD測技術(shù)顯松雜BCD帶。47ABD48ACDE49ABCD50.4BCD么是肽核睇玄觸其應(yīng)用?52.ABD肽核酸是一種全新的DNA類似物，在20世紀(jì)53ABCD54BCD55ABC56AD57ABCD90年代由丹麥科學(xué)家發(fā)明。58AB肽核酸中以中性的肽鏈59ABCD60AC61ADE62曉BCD-氨基乙磬昔廉鞭取代了64DNABCD勺戊糖磷（三）問答題酸二酯鍵，其余結(jié)構(gòu)與DNA相似。PNA可以通過

23、1.根據(jù)哪三種不同的分類標(biāo)準(zhǔn)可以將雜交分為哪堿基互補配對的形式識別并結(jié)合DNA或RNA序幾類?列，形成穩(wěn)定的雙螺旋結(jié)構(gòu)。由于PNA不帶電荷,根據(jù)雜交核酸分子的種類，可以分為DNA與DNA和RNA之間不存在靜電斥力，因而結(jié)合的穩(wěn)定性和特異性都大為提高；PNA與DNA或RNA的雜交能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)優(yōu)于DNA、DNA或DNA、RNA雜交，表現(xiàn)在很高的雜交穩(wěn)定性、優(yōu)良的特異性，而且不被蛋白酶和核酸酶水解等方面。鑒于上述諸多優(yōu)點，近年來，PNA被廣泛應(yīng)用在許多高科技領(lǐng)域。如：病原體、遺傳病的檢測，抗癌、抗病毒反義核酸的研究和應(yīng)用。特別是PNA可取代核酸用于基因芯片的制備，被認(rèn)為是基因芯片的升級產(chǎn)品。PNA還可用

24、于定量PCR分析。隨著對PNA研究的不斷深入，PNA將顯示出更大的優(yōu)越性和更為廣闊的應(yīng)用前景。5 .請舉例說明雜交技術(shù)在臨床檢驗科基因診斷方面的應(yīng)用在臨床檢驗科，雜交技術(shù)最常用于基因診斷的例子是鐮狀細(xì)胞貧血病的基因診斷。鐮狀細(xì)胞貧血是一種單基因遺傳性疾病，病因是編碼血紅蛋白的基因發(fā)生點突變導(dǎo)致編碼下連第6位的谷氨酸被繳氨酸取代，表示為先(A3)谷-繳。在血紅蛋白基因的堿基序列上表現(xiàn)為第6位密碼子GAA突變?yōu)镚TA,也就是在這一位點發(fā)生了A到T的點突變。由于這一突變導(dǎo)致基因內(nèi)部一個MstII限制性酶切位點丟失，因而針對這一情況，可以設(shè)計與？珠蛋白基因雜交的核酸探針。先擴增靶片斷，并用MstII消化擴增的DNA片斷，電泳分離消化的DNA片斷。將DNA片斷轉(zhuǎn)印到硝酸纖維素薄膜上，采用Southern雜交技術(shù)檢測DNA片斷。以此將正常人、攜帶者和患者區(qū)分開來。止匕外，還可以用凝血因子IX基因探針檢測B型血友病，凝血因子XW基因探針檢測A型血友病，用胰島素基因探針檢測糖尿病，用苯丙氨酸羥化酶基因探針檢測苯丙酮尿癥。以上都是雜交技術(shù)在臨床檢驗科進行基因診斷的例子。6 .請敘述雜交探針標(biāo)記方法的種類探針的標(biāo)記方法可分為放射性核素標(biāo)記法和非放射性核素標(biāo)記法兩大類。(1)放射性核素標(biāo)記的探針，靈敏度高、特異性強，主要缺點是容易造成放射性污染，而且放射性核素的半衰期較短，必須隨