生物化學(xué)實驗：α—淀粉酶蛋白質(zhì)含量及活力測定

1、淀粉酶蛋白質(zhì)含量及活力測定生物化學(xué)實驗安排1 1、淀粉酶蛋白質(zhì)含量及活力測定（淀粉酶蛋白質(zhì)含量及活力測定（5 5課時課時2 2周）周）2 2、動物組織中核酸的提取與鑒定、動物組織中核酸的提取與鑒定 （5 5課時課時2 2周）周）3 3、細胞色素、細胞色素C C的制備及測定的制備及測定 （1212課時課時3 3周）周）4 4、SDS-PAGESDS-PAGE測定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量測定蛋白質(zhì)分子質(zhì)量 （8 8課時課時2 2周周9,109,10周）周）5 5、層析技術(shù)分離生物大分子、層析技術(shù)分離生物大分子 （7 7課時課時2 2周周1111，1212周）周）6 6、凝膠等電聚焦法測定蛋白質(zhì)等電點（、凝膠

2、等電聚焦法測定蛋白質(zhì)等電點（8 8課時課時2 2周周1313，1414周）周）淀粉酶蛋白質(zhì)含量測定一、常用蛋白質(zhì)含量測定方法一、常用蛋白質(zhì)含量測定方法n凱氏定氮法凱氏定氮法n雙縮脲法雙縮脲法n考馬斯亮藍考馬斯亮藍G250染色法染色法 nFolin酚法酚法n紫外分光光度法紫外分光光度法二、實驗方法及設(shè)計思路二、實驗方法及設(shè)計思路1、樣品預(yù)處理、樣品預(yù)處理 準(zhǔn)確稱取準(zhǔn)確稱取1.5000克酶粉，用蒸餾水溶解，放入研缽中研磨后定容克酶粉，用蒸餾水溶解，放入研缽中研磨后定容50毫毫升，過濾（升，過濾（準(zhǔn)備準(zhǔn)備5-6個漏斗，同時過濾個漏斗，同時過濾），除去沉淀，合并濾液，制成），除去沉淀，合并濾液，制成酶

3、儲備液。此溶液測定蛋白質(zhì)含量。酶儲備液。此溶液測定蛋白質(zhì)含量。 2、標(biāo)準(zhǔn)曲線測定、標(biāo)準(zhǔn)曲線測定3、待測樣品測定、待測樣品測定(樣品平行做兩次樣品平行做兩次）4、數(shù)據(jù)處理（、數(shù)據(jù)處理（用電腦處理用電腦處理）復(fù)習(xí)與思考n1、凱氏定氮法和比色法測定蛋白質(zhì)含量有何不、凱氏定氮法和比色法測定蛋白質(zhì)含量有何不同？（從測定原理進行分析）同？（從測定原理進行分析）n2、用計算機制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法？（簡單描述）、用計算機制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法？（簡單描述）n寫出流程。寫出流程。n3、分析測定誤差形成的原因。、分析測定誤差形成的原因。淀粉酶活力測定n一、原理一、原理n淀粉淀粉 糊精糊精n 淀粉酶淀粉酶n葡萄糖殘基葡萄

4、糖殘基60 藍色糊精藍色糊精n葡萄糖殘基葡萄糖殘基20 紅色糊精紅色糊精n葡萄糖殘基葡萄糖殘基6 無色糊精無色糊精n二、實驗方法及設(shè)計思路二、實驗方法及設(shè)計思路n1、取酶儲備液、取酶儲備液5.00mL，稀釋至，稀釋至50mL，制成酶應(yīng)用液。，制成酶應(yīng)用液。n 或或準(zhǔn)確稱取準(zhǔn)確稱取0.1500克酶粉，用蒸餾水溶解，放入研缽中研磨后定容克酶粉，用蒸餾水溶解，放入研缽中研磨后定容50毫升，制成酶應(yīng)用液毫升，制成酶應(yīng)用液（不測蛋白質(zhì)含量時）。用時搖勻。（不測蛋白質(zhì)含量時）。用時搖勻。 n2、取、取l.00mL標(biāo)準(zhǔn)糊精液置于盛有標(biāo)準(zhǔn)糊精液置于盛有3.00mL比色稀碘液的試管中，作為顏色的標(biāo)準(zhǔn)管。所有試管

5、應(yīng)選用比色稀碘液的試管中，作為顏色的標(biāo)準(zhǔn)管。所有試管應(yīng)選用管徑一致的。管徑一致的。n3、在、在60mL的試劑瓶（反應(yīng)瓶）中加入的試劑瓶（反應(yīng)瓶）中加入2%可溶性淀粉溶液可溶性淀粉溶液20.00mL，pH6.0緩沖液緩沖液5.00mL，在，在60水浴中平衡溫度（約水浴中平衡溫度（約10min），加入），加入0.50mL酶應(yīng)用液，酶應(yīng)用液，即刻記時，即刻記時，充分混勻，定時（充分混勻，定時（開始開始1分鐘左右，分鐘左右，后可以稍快后可以稍快）取出）取出lmL（用帶刻度的小滴管或移液槍用帶刻度的小滴管或移液槍）反應(yīng)液于試管內(nèi)（試管中先盛有）反應(yīng)液于試管內(nèi)（試管中先盛有3mL比色稀碘比色稀碘液，液，預(yù)先準(zhǔn)備預(yù)先準(zhǔn)備8支支），當(dāng)由紫色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樽爻壬?，與標(biāo)準(zhǔn)比色管顏色相同時，即為反應(yīng)終點，記錄時），當(dāng)由紫色逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)樽爻壬c標(biāo)準(zhǔn)比色管顏色相同時，即為反應(yīng)終點，記錄時間即為液化時間間即為液化時間(t)，重復(fù)做一次取平均值。，重復(fù)做一次取平均值。n4、液化型淀粉酶的活力（、液化型淀粉酶的活力（u/g粗酶）粗酶）n 200.0260t10.5（50）1W復(fù)習(xí)與思考