特殊毒性作用及其試驗與評價方法學(xué)習(xí)教案

1、會計學(xué)1特殊毒性作用及其試驗特殊毒性作用及其試驗(shyn)與評價方與評價方法法第一頁，共40頁。野生型His+突變型突變型 His-正向(zhn xin)突變回復(fù)突變物理化學(xué)等因素物理化學(xué)等因素(yn s)(yn s)處理處理受受 試試 物物His-His-培養(yǎng)基培養(yǎng)基接種能生長有致突變性有致突變性不能生長無致突變性無致突變性+第2頁/共40頁第二頁，共40頁。; TA102,檢測堿基置換及移碼。第3頁/共40頁第三頁，共40頁。第4頁/共40頁第四頁，共40頁。移碼（frame shift）大段損傷（Large deletion or insertion ）第5頁/共40頁第五頁，共40頁

2、。,* 后果：三聯(lián)密碼子的改變，可能出現(xiàn)同義(tn y)密碼，錯義密碼或終止密碼，從而使基因表達(dá)改變。第6頁/共40頁第六頁，共40頁。第7頁/共40頁第七頁，共40頁。第8頁/共40頁第八頁，共40頁。質(zhì)粒與染色體之間可能出現(xiàn)轉(zhuǎn)移位置的小段DNA。這種位置的轉(zhuǎn)動稱為轉(zhuǎn)座（transposition)* 后果：a.gene突變； b.產(chǎn)生新的gene c.染色體畸變；d.生物進(jìn)化。第9頁/共40頁第九頁，共40頁。色體寬度的無著絲粒斷片,常成雙出現(xiàn)。* 環(huán)狀染色體(ring chromosome)* 倒位(inversion): 斷片倒轉(zhuǎn)180再重接。第10頁/共40頁第十頁，共40頁。 ex

3、change, SCE):用5-Brdurd摻入DNA合成代替了T，產(chǎn)生染色單體差示染色，可見到兩條姐妹染色單體染色一深一淺，如某一染色體在姐妹染色單體間發(fā)生了同源節(jié)段內(nèi)換，同源節(jié)段染色一深一淺，這種現(xiàn)象稱SCE。用以分析染色體畸變。(圖示)第11頁/共40頁第十一頁，共40頁。各有一互補鏈不帶Brdude的原鏈第二周期插入Brdu產(chǎn)生同等干擾帶Brdu的新鏈合成(hchng)出現(xiàn)差示染色斷裂(dun li)、重排同位節(jié)段互換第12頁/共40頁第十二頁，共40頁。染色體畸變?nèi)旧w畸變裂隙裂隙(gap)(gap) 斷裂斷裂(break) (break) 斷片斷片(fragment)(fragme

4、nt)和缺失和缺失(deletion)(deletion) 微小體微小體(minute body)(minute body) 無著絲點環(huán)無著絲點環(huán)環(huán)狀染色體環(huán)狀染色體 雙著絲點染色體雙著絲點染色體 倒位倒位(inversion)(inversion) 易位易位(translocation)(translocation) 插入插入(insertion)(insertion)和重復(fù)和重復(fù)(duplication) (duplication) 輻射體輻射體 第13頁/共40頁第十三頁，共40頁。2n-1,2n-2,2n+1,2n+2,染色體數(shù)目畸變的原因： a.不分離； b.染色體丟失； c.染色體

5、橋； d.核內(nèi)復(fù)制。第14頁/共40頁第十四頁，共40頁。第15頁/共40頁第十五頁，共40頁。,微小體微小體,環(huán)狀環(huán)狀,粉碎粉碎,多射體多射體* 劑量設(shè)計及分組劑量設(shè)計及分組:最高劑量組最高劑量組: LD50的的1/8-1/10;中間劑量組中間劑量組: 最高劑量組的最高劑量組的1/15;最低劑量組最低劑量組: 最高劑量組的最高劑量組的1/20。第16頁/共40頁第十六頁，共40頁。色體分離改變色體分離改變,表明受試物對表明受試物對遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)產(chǎn)生了損傷。產(chǎn)生了損傷。（五）分子生物學(xué)方法（五）分子生物學(xué)方法（PCR檢檢測）測）第17頁/共40頁第十七頁，共40頁。 第18頁/共40頁第十八

6、頁，共40頁。第19頁/共40頁第十九頁，共40頁?；蛘咭詫嶋H接觸量為低劑量，以其10倍量為高劑量。（三）觀察內(nèi)容產(chǎn)前剖腹產(chǎn)，檢查活胎，死胎，吸收胎，黃體數(shù)及外形和內(nèi)臟畸形情況。第20頁/共40頁第二十頁，共40頁。第21頁/共40頁第二十一頁，共40頁。評價：致畸危險指數(shù)300, 說明致畸危險性小；致畸危險指數(shù)100300，為中等致畸危險性；致畸危險指數(shù)100, 為致畸危險性較大。第22頁/共40頁第二十二頁，共40頁。 2. 除了解受試物有無致癌作用的可能性外,還要確定其最小致癌作用劑量:第23頁/共40頁第二十三頁，共40頁。第24頁/共40頁第二十四頁，共40頁。 3. 病毒感染細(xì)胞:

7、常用RLV/RE Cell 和SA7/SHE Cell第25頁/共40頁第二十五頁，共40頁。.一般9個月可結(jié)束試驗,本法多適用于PAH類物質(zhì) 雌性SD大鼠乳腺癌誘發(fā)試驗:一般試驗期9個月。第26頁/共40頁第二十六頁，共40頁。第27頁/共40頁第二十七頁，共40頁。法，簡寫為 CPBS法，即：Carcinogenicity predication and battery selection method（致癌性預(yù)測與試驗組合選擇）。第28頁/共40頁第二十八頁，共40頁。 試驗項目數(shù)：一般項目數(shù)越多，預(yù)測(yc)就越準(zhǔn)，但費用會增大。一般使用奇數(shù)項目數(shù)，如3項或5項就比4項或6項要好。第2

8、9頁/共40頁第二十九頁，共40頁。第30頁/共40頁第三十頁，共40頁。 a+i： 某短期試驗的敏感性。 a-i： 某短期試驗的特異性，如缺乏此參數(shù)，取值可為0.5代之。第31頁/共40頁第三十一頁，共40頁。第32頁/共40頁第三十二頁，共40頁。或雌或雌16到到20只，雄只，雄8到到10只只第33頁/共40頁第三十三頁，共40頁。（斷奶（斷奶(dun ni)或出生周）或出生周） 給予給予(jy)(jy)受試物到周受試物到周 第一次交配第一次交配第二次交配第二次交配觀察三個月，喂飼普通飼料，觀觀察三個月，喂飼普通飼料，觀察其生長發(fā)育情況察其生長發(fā)育情況 斷乳后給予受試物到周斷乳后給予受試物

9、到周 觀察三個月，喂飼普通飼料，觀觀察三個月，喂飼普通飼料，觀察其生長發(fā)育情況察其生長發(fā)育情況 斷乳后給予受試物到周斷乳后給予受試物到周 第34頁/共40頁第三十四頁，共40頁。F F斷奶，檢查發(fā)育情況斷奶，檢查發(fā)育情況F F出生，每窩留只幼仔出生，每窩留只幼仔F F交配交配斷奶，給予受試物斷奶，給予受試物F F（每窩選留幼仔只，雌雄各半）（每窩選留幼仔只，雌雄各半）第第 周周雌雄交配雌雄交配出生第周給予受試物（出生第周給予受試物（F F）第35頁/共40頁第三十五頁，共40頁。v除上述除上述(shngsh)個指標(biāo)外，個指標(biāo)外，還應(yīng)該注意出生幼仔是否有畸形還應(yīng)該注意出生幼仔是否有畸形存在，對死亡的幼仔應(yīng)進(jìn)行畸形存在，對死亡的幼仔應(yīng)進(jìn)行畸形檢查，可為下一步致畸試驗提供檢查，可為下一步致畸試驗提供參考參考%100(%)交配雌性動物數(shù)妊娠雌性動物數(shù)受孕率第36頁/共40頁第三十六頁，共40頁。孕、妊娠過程、分娩、授乳以及幼仔斷