第十一章動物實驗技術(shù)

1、整理ppt第十一章第十一章 動物實驗技術(shù)動物實驗技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 實驗動物的固定、標(biāo)記實驗動物的固定、標(biāo)記 第二節(jié)第二節(jié) 實驗動物的給藥途徑和采血方法實驗動物的給藥途徑和采血方法 第三節(jié)第三節(jié) 實驗動物用藥量的確定及計算方法實驗動物用藥量的確定及計算方法 第四節(jié)第四節(jié) 實驗動物的麻醉和處死方法實驗動物的麻醉和處死方法 第五節(jié)第五節(jié) 動物實驗基本設(shè)計動物實驗基本設(shè)計 整理ppt常用藥物的最大給藥量常用藥物的最大給藥量動物動物項項 目目 灌灌 胃胃 皮下注射皮下注射 肌肉注射肌肉注射 腹腔注射腹腔注射 靜脈注射靜脈注射 大鼠大鼠最大給藥量最大給藥量2mL lmL0.4mL2mL4mL 使用針頭使用

2、針頭16號號(鈍頭鈍頭) 6號號 6號號 6號號 5號號小鼠小鼠最大給藥量最大給藥量lmL0.4mL0.4mL lmL0.8mL 使用針頭使用針頭9號號(鈍頭鈍頭)5 l/2號號5 1/2號號5 1/2號號 4號號豚鼠豚鼠最大給藥量最大給藥量3mL LmL0.5mL 4mL 5mL 使用針頭使用針頭16號號(鈍頭鈍頭)6 1/2號號6 1/2號號 7號號 5號號家兔家兔最大給藥量最大給藥量20 mL 2mL 2mL 5mL 10mL 使用針頭使用針頭10號導(dǎo)尿號導(dǎo)尿管管6 1/2號號6 1/2號號 7號號 6號號整理ppt人與實驗動物之間藥物劑量的換算人與實驗動物之間藥物劑量的換算人與實驗動物

3、對同一藥物的耐受性，動物比人大，即單位體重的用藥量比人要大。1.一般可按下列比例換算，每單位體重人的藥量為1，則小鼠、大鼠為25-50，兔、豚鼠為15-20，狗、貓為5-10。整理ppt在新藥藥效研究中多以下列公式轉(zhuǎn)換人及不同動物之間的藥量：整理ppt人及不同實驗動物之間藥物量對應(yīng)值人及不同實驗動物之間藥物量對應(yīng)值整理ppt例如：某藥物在60kg體重的病人的劑量為21.0g.kg-1 . d-1，一只5kg的猴為53.6 g.kg-1 . d-1，一只10kg重的犬為40.4 g.kg-1 . d-1 ，一只20g的小鼠則為260.6 g.kg-1 . d-1 。整理ppt實驗動物的血樣采取實

4、驗動物的血樣采取一、小、大鼠一、小、大鼠剪尾采血剪尾采血此法每鼠可采此法每鼠可采10次以上。次以上。小鼠每次小鼠每次0.1ml。大鼠每次大鼠每次0.4ml。眼眶后靜脈叢采血眼眶后靜脈叢采血小鼠每次小鼠每次0.2-0.3ml。1)大鼠每次大鼠每次0.5ml。整理ppt股動脈采血股動脈采血小鼠每次小鼠每次0.5ml。大鼠每次大鼠每次2.0ml。二、豚鼠二、豚鼠耳緣切口采血：耳緣切口采血： 0.5ml。心臟采血：心臟采血：足背正中靜脈采血：足背正中靜脈采血：整理ppt三、家兔三、家兔耳緣靜脈采血：耳緣靜脈采血：5-10ml。耳中動脈采血：耳中動脈采血：15ml。心臟采血：心臟采血：20-25ml。四

5、、犬四、犬前肢皮下頭靜脈和后肢外側(cè)小隱靜脈采血：前肢皮下頭靜脈和后肢外側(cè)小隱靜脈采血：10-20ml。頸靜脈采血：頸靜脈采血：1.心臟采血：心臟采血：整理ppt常用實驗動物的常用實驗動物的最大安全采血量與最小致死采血量最大安全采血量與最小致死采血量動物種類動物種類最大安全采血量最大安全采血量(mL)最小致死采血量最小致死采血量(mL)小鼠小鼠0.1 0.3大鼠大鼠 1 2豚鼠豚鼠 5 10家兔家兔 10 40 狗狗 50 300 猴猴 15 60整理ppt常用麻醉劑的用法及劑量常用麻醉劑的用法及劑量 麻醉劑麻醉劑 動物種類動物種類 給藥途徑給藥途徑 劑量劑量(mg/kg) 常用濃度常用濃度()

6、 戊巴比妥鈉戊巴比妥鈉犬、兔犬、兔靜脈靜脈303 腹腔腹腔 4050 3大鼠、小鼠、大鼠、小鼠、豚鼠豚鼠 腹腔腹腔 4050 2硫噴妥鈉硫噴妥鈉 犬、兔犬、兔 靜脈靜脈 15-20 2 大鼠大鼠 腹腔腹腔 40 1 小鼠小鼠 腹腔腹腔 15-20 1氯胺酮氯胺酮犬、貓犬、貓 腹腔腹腔 10-40 10 大鼠、小鼠大鼠、小鼠 腹腔腹腔 100200 10 氯醛糖氯醛糖 兔兔 靜脈靜脈 80-100 2 大鼠大鼠 腹腔腹腔 50 2烏拉坦烏拉坦 兔兔 靜脈靜脈750-1000 30 大鼠、小鼠大鼠、小鼠 皮下或肌肉皮下或肌肉 800-1000 20 整理ppt第五節(jié)第五節(jié) 動物實驗基本設(shè)計動物實驗

7、基本設(shè)計一、設(shè)計原則一、設(shè)計原則1.對照（對照（antitheses）性原則）性原則： 是要求在實驗中設(shè)立可與實驗組比較，用于消除各種無關(guān)因素影響的對照組。 空白對照：不施加任何處理因素實驗條件對照： 不用處理因素，但施加某種與處理因素相同的實驗條件。 標(biāo)準(zhǔn)對照 ： 用現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)方法對照，如已知有效藥物、公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)療法。整理ppt2隨機(jī)（隨機(jī)（random）化原則）化原則 動物實驗一般采用完全隨機(jī)分配或分層隨機(jī)分配。小動物實驗一般先配對或配伍，然后“對”內(nèi)或“伍”內(nèi)進(jìn)行隨機(jī)分配 大動物多半先分層，然后在層內(nèi)隨機(jī)分配。 整理ppt3重復(fù)（重復(fù)（repetition）的原則）的原則 指同一處理要設(shè)置多

8、個樣本例數(shù)降低試驗誤差。 應(yīng)該在保證實驗結(jié)果具有一定可靠性的條件下，確定最低的樣本例數(shù) 整理ppt一般估測的樣本數(shù) 小動物(大鼠、小鼠、蛙、魚)：每組10-30例,計量資料每組不少于10例, 計數(shù)資料每組不少于30例；中等動物(豚鼠、家兔) 每組8-20例,計量資料每組不少于8例, 計數(shù)資料每組不少于20例；大動物(犬、貓、豬、羊等) 每組6-20例,計量資料每組不少于6例, 計數(shù)資料每組不少于20例. 整理ppt按統(tǒng)計學(xué)方法測算的樣本數(shù) n=22(t+t)2/2n為樣本含量，為標(biāo)準(zhǔn)差；t取有顯著性的t分布值，t0.05=1.96；t為無顯著性的t分布值，1-為實驗檢驗?zāi)芰?，動物實驗一般?-

9、=0.80，t0.20=0.842；為處理組與對照組均值間的差異，可從預(yù)實驗或文獻(xiàn)資料庫中獲得。 整理ppt舉例： 給某種動物飼喂一種藥物，預(yù)實驗預(yù)實驗中每月體重增長比對照增加3015g（均值標(biāo)準(zhǔn)差）。設(shè)顯著水平為95%，檢驗?zāi)芰?0%，則正式實驗所需樣本含量n為： n=2152（1.96+0.842）2/302=3.93 即每組只需4只動物。 整理ppt二、基本設(shè)計方法二、基本設(shè)計方法單組比較設(shè)計單組比較設(shè)計 指在同一個體上觀察實驗處理前后某種觀測指標(biāo)的變化。 優(yōu)點：能排除個體間生物差異。 缺點：不適用于在同一個體上多次進(jìn)行實驗和觀察的情況。 整理ppt配對比較設(shè)計配對比較設(shè)計 指實驗前將

10、動物按性別、體重或其它有關(guān)因素加以配對，以基本相同的兩個動物為一對，配成若干對，然后將一對動物隨機(jī)分配到兩組中。優(yōu)點：減少兩組實驗誤差及動物間的個體差異。 缺點：應(yīng)考慮種屬、品系、性別、年齡與體重、同父母、同胎次出生等因素對實驗結(jié)果的影響。 整理ppt舉例：舉例：為研究為研究VitE缺乏飼料對大鼠肝臟中缺乏飼料對大鼠肝臟中VitA含量含量(u/mg)的影響，的影響，選取同性別選取同性別(雌、雄各半雌、雄各半)、同月齡、同月齡(斷乳斷乳1個月個月)、同體重、同體重(50g+2g)等正常大鼠配成等正常大鼠配成10對，對每對中每只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表對，對每對中每只大鼠按隨機(jī)數(shù)字表(或抽簽或抽簽)隨機(jī)分

11、配到給以正常飼料組和隨機(jī)分配到給以正常飼料組和VitE缺乏飼料組，分飼條件相同的缺乏飼料組，分飼條件相同的不同籠中，經(jīng)不同籠中，經(jīng)1個月飼食后殺掉，按每對分別取肝臟，測得個月飼食后殺掉，按每對分別取肝臟，測得VitA含量含量(u/mg)如表。如表。 大白鼠對別大白鼠對別正常飼料組正常飼料組VitE缺乏組缺乏組13.952.6523.803.3533.452.4543.352.6553.702.6563.903.1573.802.9083.051.9093.651.70102.002.50整理ppt完全隨機(jī)化設(shè)計完全隨機(jī)化設(shè)計 將動物隨機(jī)分配到處理組及對照組做實驗觀察。優(yōu)點：統(tǒng)計分析也比較簡單，

12、抗數(shù)據(jù)缺失能力較強(qiáng)。 缺點：對非實驗因素缺乏有效控制 ，適用于實驗對象同質(zhì)性較好的實驗設(shè)計。 整理ppt舉例：為比較小白鼠接種3種不同菌型傷寒桿菌(9D、11C、DSC1)后存活日數(shù)的差異，選擇同品系、性別(雌、雄各半)、體重(土1s)、月齡(土2天)、生理精神狀態(tài)、飼養(yǎng)條件等小鼠30只，依隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為3組，在相同條件下接種菌苗，后觀察存活日數(shù)如下表。 9D11CDSC125746113862567109775212115664634710整理ppt隨機(jī)區(qū)組設(shè)計隨機(jī)區(qū)組設(shè)計 在動物實驗時，可將一窩小鼠或大鼠劃為一個區(qū)組，確定數(shù)個區(qū)組后，按區(qū)組隨機(jī)化原則將各區(qū)組的動物隨機(jī)分配到處理組和對照

13、組。 優(yōu)點：均衡性好，可減少誤差，提高實驗效率，統(tǒng)計分析也較簡易。 缺點：抗數(shù)據(jù)缺失能力較低。若一個區(qū)組的某個動物發(fā)生意外，那么整個區(qū)組都得放棄，或不得已采取缺項估計。 整理ppt舉例：舉例：有人用有人用4種不同種系的未成年大鼠做實驗，每一種不同種系的未成年大鼠做實驗，每一種以同窩雌大白鼠種以同窩雌大白鼠3只，隨機(jī)分配注射只，隨機(jī)分配注射3種不同劑量的種不同劑量的雌性激素雌性激素(mg/100g)后，在相同條件下稱其子宮重量后，在相同條件下稱其子宮重量(g)，見表：，見表： 大鼠種系大鼠種系0.20.40.811611614524268115370111133442358480整理ppt析因設(shè)

14、計析因設(shè)計 可以分析多種交互作用，但一般采用較簡可以分析多種交互作用，但一般采用較簡單的析因試驗。當(dāng)水平和因素過多，不但計算復(fù)雜單的析因試驗。當(dāng)水平和因素過多，不但計算復(fù)雜而且解釋困難。而且解釋困難。舉例：舉例：觀察絕經(jīng)促性腺激素觀察絕經(jīng)促性腺激素(HMG)、絨促激素、絨促激素(HCG)及其交互作用，隨機(jī)將及其交互作用，隨機(jī)將20只幼雌大白鼠分成只幼雌大白鼠分成4組。第組。第一組空白，第二組每天注射一組空白，第二組每天注射HMG l個單位，第三組個單位，第三組每天注射每天注射HCG 20單位，第四組每天單位，第四組每天HMG l單位、單位、HCG 20單位，一定時間后取卵巢稱重，以每單位，一定

15、時間后取卵巢稱重，以每10g大大白鼠體重卵巢白鼠體重卵巢mg數(shù)表示數(shù)表示(mg/10g)，結(jié)果如表：，結(jié)果如表： 整理ppt1234空白空白HMGHCGHMG+HCG912143912111729111416411315134610131940 556579195整理ppt三、三、實驗結(jié)果變異分析實驗結(jié)果變異分析 實驗間變異實驗間變異 處理會使對照組和實驗組平均度量值發(fā)生變處理會使對照組和實驗組平均度量值發(fā)生變化，即實驗間變異化，即實驗間變異 。 降低實驗間效應(yīng)變異將減少對同一實驗的重降低實驗間效應(yīng)變異將減少對同一實驗的重復(fù)性。復(fù)性。 1.實驗結(jié)果必須是建立在可重復(fù)實驗的基礎(chǔ)上。實驗結(jié)果必須是建立在可重復(fù)實驗的基礎(chǔ)上。 整理ppt實驗內(nèi)變異實驗內(nèi)變異 包括：實施實驗過程造成的變異、分析變異、包括：實施實驗過程造成的變異、分析變異、個體內(nèi)變異和固有的個體間變異。個體內(nèi)變異和固有的個體間變異。通過明顯的減少實驗結(jié)果中個體間變異來減通過明顯的減少實驗結(jié)果中個體間變異來減少實