第十三章高效液相色譜法

1、分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材1第十三章 高效液相色譜法 學(xué)習目的學(xué)習目的 知識要求知識要求 能力要求能力要求 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材2學(xué)習目的學(xué)習目的u 通過通過學(xué)習高效液相色譜法的特點、類型、速率理論、學(xué)習高效液相色譜法的特點、類型、速率理論、分離條件和高效液相色譜儀的主要部件及工作流程，分離條件和高效液相色譜儀的主要部件及工作流程，加深對高效液相色

2、譜法的分離原理、條件的理解，熟加深對高效液相色譜法的分離原理、條件的理解，熟悉主要類型特別是化學(xué)鍵合相色譜法的特點和應(yīng)用，悉主要類型特別是化學(xué)鍵合相色譜法的特點和應(yīng)用，能利用高效液相色譜儀對待測組分進行分離與分析。能利用高效液相色譜儀對待測組分進行分離與分析。為學(xué)習藥物分析、天然藥物化學(xué)等專業(yè)課程奠定基礎(chǔ)為學(xué)習藥物分析、天然藥物化學(xué)等專業(yè)課程奠定基礎(chǔ)。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材3知識要求知識要求1.熟悉高效液相色譜法的主要類型，化學(xué)鍵合相色譜法熟悉高效液相色譜法的主要類型，

3、化學(xué)鍵合相色譜法及其流動相、固定相的選擇；高效液相色譜法速率理及其流動相、固定相的選擇；高效液相色譜法速率理論的特點及分離條件的選擇，高效液相色譜儀的主要論的特點及分離條件的選擇，高效液相色譜儀的主要部件，定性與定量分析方法。部件，定性與定量分析方法。2.了解高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法、氣相色譜法了解高效液相色譜法與經(jīng)典液相色譜法、氣相色譜法的區(qū)別，其他類型高效液相色譜法在分析中的應(yīng)用。的區(qū)別，其他類型高效液相色譜法在分析中的應(yīng)用。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材4能力要求能

4、力要求u掌握高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及儀器的基本操作掌握高效液相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及儀器的基本操作方法，學(xué)會使用高效液相色譜儀對藥物進行分離與方法，學(xué)會使用高效液相色譜儀對藥物進行分離與分析的操作技術(shù)。分析的操作技術(shù)。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材5第一節(jié) 概 述 第一節(jié)第一節(jié) 概概 述述 u高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLC）的特點：）的特點：高壓高壓- -壓力可達壓力可達151530Mpa30Mpa。高速高速- -流速為流速為0.10.110.0 ml/min10.0

5、ml/min。高效高效- -可達每米可達每米50005000塔板以上。在一根柱中同時分離成份塔板以上。在一根柱中同時分離成份可達可達100100種。種。高靈敏度高靈敏度- -紫外檢測器靈敏度可達紫外檢測器靈敏度可達0.01ng0.01ng。同時消耗樣品。同時消耗樣品少，具有分離、分析雙重作用。少，具有分離、分析雙重作用。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材6第一節(jié) 概 述一、經(jīng)典液相色譜法與搞笑相色譜法性能比較一、經(jīng)典液相色譜法與搞笑相色譜法性能比較 高效液相色譜法高效液相色譜法 經(jīng)

6、典液相色譜法經(jīng)典液相色譜法 柱長：柱長： 101025cm 1025cm 10200cm200cm口徑：口徑： 2 210mm 1010mm 1050mm50mm粒度：粒度：5 550um50um（25002500300300目）目） 7575600um600um（2002003030目）目）柱壓力：柱壓力： 2 220MPa 0.00120MPa 0.0010.1MPa0.1MPa柱效：柱效： 2 2103103 5 5104 /m 2104 /m 250/m50/m進樣量：進樣量： 10-610-610-2g 110-2g 110g10g分析時間：分析時間：3 3分鐘分鐘1 1小時小時 1

7、 12020小時小時分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材7第一節(jié) 概 述二、與氣相色譜法比較二、與氣相色譜法比較氣相色譜法具有選擇性高、分離效率高、靈敏度高，分析速度氣相色譜法具有選擇性高、分離效率高、靈敏度高，分析速度快的特點，快的特點，僅適于分析蒸氣壓低、沸點低的樣品，而不適用于分析高沸點僅適于分析蒸氣壓低、沸點低的樣品，而不適用于分析高沸點有機物、高分子和熱穩(wěn)定性差的化合物以及生物活性物質(zhì)，因有機物、高分子和熱穩(wěn)定性差的化合物以及生物活性物質(zhì)，因而使其應(yīng)用受到限制。而使其應(yīng)用受

8、到限制。在全部有機化合物中僅有在全部有機化合物中僅有20%20%的樣品適用于氣相色譜分析的樣品適用于氣相色譜分析, ,高效高效液相色譜法可對液相色譜法可對80%80%的有機化合物進行分離和分析的有機化合物進行分離和分析。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材8課堂活動課堂活動第一節(jié)概 述分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材9點滴積累點滴積累高效液相色譜法（高效液相色譜法（HP

9、LCHPLC）需用高壓輸送流動相，流）需用高壓輸送流動相，流動相為體。動相為體。高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLCHPLC）具有高壓、高速、高效和）具有高壓、高速、高效和高靈敏度特點高靈敏度特點 第一節(jié)概 述分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材10第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理 第二節(jié)第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理高效液相色譜法的主要類型及原理 一、類型一、類型化學(xué)鍵合相色譜法（主要）化學(xué)鍵合相色譜法（主要）離子抑制色譜法離子抑制色譜法離子對色譜法離子對色譜法離

10、子色譜法離子色譜法親合色譜法親合色譜法分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材11第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理二、化學(xué)鍵合相色譜法二、化學(xué)鍵合相色譜法u以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法，簡稱鍵合相色譜法以化學(xué)鍵合相為固定相的色譜法，簡稱鍵合相色譜法(bonded phase chromatography(bonded phase chromatography；BPC)BPC)。u化學(xué)鍵合相：采用化學(xué)反應(yīng)的方法將官能團鍵合在載化學(xué)鍵合相：采用化學(xué)反應(yīng)的方法將官能團鍵合在載體表面所形成

11、的固定相。體表面所形成的固定相。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材12第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理u鍵合相色譜法的優(yōu)點鍵合相色譜法的優(yōu)點：固定相的均一性和穩(wěn)定性好，使用過程中不易流失，使固定相的均一性和穩(wěn)定性好，使用過程中不易流失，使用周期長；用周期長；柱效高；重現(xiàn)性好；柱效高；重現(xiàn)性好；能使用的流動相和鍵合相的種類多，分離的選擇性高。能使用的流動相和鍵合相的種類多，分離的選擇性高。u 根據(jù)化學(xué)鍵合相與流動相極性的相對強弱分類：分根據(jù)化學(xué)鍵合相與流動相極性的相對強弱分類

12、：分為正相（為正相（normal phasenormal phase，NPNP）和反相（）和反相（reversed reversed phasephase，RPRP）鍵合相色譜法。）鍵合相色譜法。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材13第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理（一）正相鍵合相色譜法（一）正相鍵合相色譜法（固定相極性大于流動相極性固定相極性大于流動相極性）u固定相：極性鍵合相固定相：極性鍵合相 如氰基（如氰基（CNCN）、氨基（）、氨基（NHNH2 2）或二羥基鍵合硅膠

13、。）或二羥基鍵合硅膠。u流動相：非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)節(jié)劑流動相：非極性或弱極性溶劑加極性調(diào)節(jié)劑如烷烴加醇類（正己烷如烷烴加醇類（正己烷- -甲醇）。甲醇）。u適用范圍：溶于有機溶劑的極性至中等極性的分子型化合適用范圍：溶于有機溶劑的極性至中等極性的分子型化合物。物。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材14第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理u分離機制：分離機制： 分配：把有機鍵合層看作一層液膜，溶質(zhì)在兩相間溶解。分配：把有機鍵合層看作一層液膜，溶質(zhì)在兩相間溶解。u極性強的組分

14、極性強的組分k k大，保留時間（大，保留時間（t tR R）長）長, ,后洗脫出柱。后洗脫出柱。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材15第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理（二）反相鍵合相色譜法（二）反相鍵合相色譜法（固定相極性小于流動相極性固定相極性小于流動相極性）u固定相：非極性鍵合相固定相：非極性鍵合相如十八烷基硅烷（如十八烷基硅烷（C18，ODS）、辛烷基（）、辛烷基（C8）鍵合硅膠。）鍵合硅膠。 u流動相：水為基礎(chǔ)溶劑，加入一定量與水混溶的極性調(diào)節(jié)劑，常用甲流動相：水為基

15、礎(chǔ)溶劑，加入一定量與水混溶的極性調(diào)節(jié)劑，常用甲醇醇- -水、乙腈水、乙腈- -水等。水等。u應(yīng)用范圍：較廣泛，適用于非極性至中等極性的組分分離。應(yīng)用范圍：較廣泛，適用于非極性至中等極性的組分分離。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材16第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理u分離機制分離機制保留行為保留行為 主要是利用非極性溶質(zhì)分子或溶質(zhì)分子中主要是利用非極性溶質(zhì)分子或溶質(zhì)分子中非極性基團與極性溶劑接觸時產(chǎn)生排斥力，而從非極性基團與極性溶劑接觸時產(chǎn)生排斥力，而從溶劑中被溶劑中被“擠出

16、擠出”，即產(chǎn)生疏溶劑作用，促使溶，即產(chǎn)生疏溶劑作用，促使溶質(zhì)分子與鍵合相表面的非極性的烷基發(fā)生疏水締質(zhì)分子與鍵合相表面的非極性的烷基發(fā)生疏水締合，而使溶質(zhì)分子保留在固定相中。合，而使溶質(zhì)分子保留在固定相中。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材17第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理u保留行為的主要影響因素保留行為的主要影響因素溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性）溶質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)（極性） 極性越弱極性越弱，疏水性越強，疏水性越強，k k越大，越大，t tR R也越大；反之亦然也越大；反之亦然。固定相

17、固定相 鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長而增加，溶質(zhì)的鍵合烷基的疏水性隨碳鏈的延長而增加，溶質(zhì)的k k也也增大。增大。 硅膠表面鍵合烷基的濃度越大，則溶質(zhì)的硅膠表面鍵合烷基的濃度越大，則溶質(zhì)的k k越大。越大。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材18第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理流動相流動相 極性越強，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)的極性越強，洗脫能力越弱，使溶質(zhì)的k k越大越大溶劑種類：水（洗脫能力弱）為弱溶劑，醇溶劑種類：水（洗脫能力弱）為弱溶劑，醇（洗脫能力強）為強溶劑（洗脫能力強

18、）為強溶劑溶劑比例：水的比例增加，使溶劑比例：水的比例增加，使k k增大增大分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材19第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材20第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理三、其他高效液相色譜法三、其他高效液相色譜法（一）離子抑制色譜法（一）離子抑制色譜法（ion suppression chromatograph

19、yion suppression chromatography；ISC ISC ）u通過調(diào)節(jié)流動相的通過調(diào)節(jié)流動相的pHpH，抑制組分的解離，增加組，抑制組分的解離，增加組分在固定相中的溶解度，改善峰形，以達到分離分在固定相中的溶解度，改善峰形，以達到分離有機弱酸、弱堿的目的，有機弱酸、弱堿的目的， u適用于適用于3p3pK Ka a77的弱酸、的弱酸、7p7pK Kb b88的弱堿。的弱堿。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材21第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理（二）離子對色

20、譜法（二）離子對色譜法 （ion pair chromatography；IPC）u把離子對試劑加入到含水流動相中，組分離子在流動相中把離子對試劑加入到含水流動相中，組分離子在流動相中與離子對試劑的反離子（與離子對試劑的反離子（counter ion）生成中性離子對，增）生成中性離子對，增加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使加溶質(zhì)與非極性固定相的作用，使k增加，改善分離效果。增加，改善分離效果。 u該方法適用于分離可離子化或離子型的化合物，如生物堿該方法適用于分離可離子化或離子型的化合物，如生物堿類、兒茶酚氨類、有機酸類、維生素類、抗生素類藥物等。類、兒茶酚氨類、有機酸類、維生素類、抗生素類藥物等。

21、分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材22第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理-u 離子對模型離子對模型以通式表示為：以通式表示為：分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材23第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理分析酸類或帶負電荷的物質(zhì)，一般用季銨鹽；如分析酸類或帶負電荷的物質(zhì)，一般用季銨鹽；如四丁基銨磷酸鹽；四丁基銨磷酸鹽； 分析堿類或帶正電荷的物質(zhì)，一般用烷基磺酸鹽分析堿

22、類或帶正電荷的物質(zhì)，一般用烷基磺酸鹽或硫酸鹽?；蛄蛩猁}。 u 適用范圍和離子對試劑的選擇適用范圍和離子對試劑的選擇分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材24（三）離子色譜法（三）離子色譜法（ion chromatography，IC） 離子交換色譜法對許多正、負離子可實現(xiàn)分離。離子交換色譜法對許多正、負離子可實現(xiàn)分離。但由于一些常見的無機離子在可見或近紫外區(qū)沒但由于一些常見的無機離子在可見或近紫外區(qū)沒有吸收，因此難用紫外有吸收，因此難用紫外- -可見檢測器進行檢測?？梢姍z測器進行檢測。

23、19751975年年Small提出了將離子交換與電導(dǎo)檢測器相提出了將離子交換與電導(dǎo)檢測器相結(jié)合分析各種離子的方法并稱為離子色譜法。結(jié)合分析各種離子的方法并稱為離子色譜法。適用于分離陰、陽離子，以及氨基酸、糖類、適用于分離陰、陽離子，以及氨基酸、糖類、DNA和和DNA水解物等。水解物等。 第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材25（四）親和色譜法（四）親和色譜法（affinity chromatography，AC） 親和色譜法是將具有生物活性的配位

24、基鍵合到親和色譜法是將具有生物活性的配位基鍵合到載體或基質(zhì)表面形成固定相，利用蛋白質(zhì)和生物載體或基質(zhì)表面形成固定相，利用蛋白質(zhì)和生物大分子與固定相表面上配位基的專屬性親和力進大分子與固定相表面上配位基的專屬性親和力進行分離的色譜方法。行分離的色譜方法。是生物大分子分離和分析的重要方法。是生物大分子分離和分析的重要方法。第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材26第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維

25、斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材27點滴積累 高效液相色譜法（高效液相色譜法（HPLCHPLC）分為液固吸附色譜法、液液分配色譜）分為液固吸附色譜法、液液分配色譜法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排法（正相與反相）、離子交換色譜法、離子對色譜法及分子排阻色譜法等。阻色譜法等。 化學(xué)鍵合相色譜法是將固定液的官能團通過化學(xué)反應(yīng)鍵合到載化學(xué)鍵合相色譜法是將固定液的官能團通過化學(xué)反應(yīng)鍵合到載體表面而制得的化學(xué)鍵合相（固定相）的色譜法。體表面而制得的化學(xué)鍵合相（固定相）的色譜法。 鍵合相色譜法分為正相（固定相極性比流動相極

26、性強）和反相鍵合相色譜法分為正相（固定相極性比流動相極性強）和反相( (固定相極性比流動相極性弱固定相極性比流動相極性弱) )鍵合相色譜法。鍵合相色譜法。第二節(jié) 高效液相色譜法的主要類型及原理分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材28第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及選擇一、固定相一、固定相uHPLC的固定相多采用化學(xué)的固定相多采用化學(xué)鍵合相。鍵合相。u鍵合相的特點：鍵合相的特點： 使用過程中不流失；化學(xué)穩(wěn)定性好；適用梯度使用過程中不流失；化學(xué)穩(wěn)定性好；適用梯度洗脫；載樣量大。洗脫

27、；載樣量大。第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及選擇第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及選擇分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材29第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及選擇（一）非極性鍵合相（一）非極性鍵合相 非極性烴基，如非極性烴基，如C18C8等鍵合在硅膠表面；等鍵合在硅膠表面；用于反相色譜；用于反相色譜；長鏈烷基可使溶質(zhì)的長鏈烷基可使溶質(zhì)的k k增大，載樣量提高，穩(wěn)增大，載樣量提高，穩(wěn)定性更好。定性更好。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職

28、高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材30第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及選擇鍵合反應(yīng)鍵合反應(yīng) 硅氧烷（硅氧烷（SiSiO OSiSiC C）型：氯硅烷與硅膠進行）型：氯硅烷與硅膠進行硅烷化反應(yīng)硅烷化反應(yīng) 22SiOHClCH+SiSiSiClH18OR118HC3737RRR1分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材31第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇（二）中等極性鍵合相（二）中等極性鍵合相醚基鍵合相醚基鍵合相用于反相或正相色

29、譜用于反相或正相色譜（三）極性鍵合相（三）極性鍵合相常用氨基（常用氨基（NHNH2 2）氰基（氰基（CNCN）鍵合相）鍵合相一般用于正相色譜一般用于正相色譜分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材32第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇不與固定相發(fā)生反應(yīng)。不與固定相發(fā)生反應(yīng)。對試樣有適宜的溶解度，要求對試樣有適宜的溶解度，要求k在在110范圍內(nèi)。范圍內(nèi)。與檢測器相匹配，例如用紫外檢測器時，不能選與檢測器相匹配，例如用紫外檢測器時，不能選用對紫外光有吸收的溶劑。用對紫外光有吸收的溶

30、劑。純度高，黏度小。常使用低黏度的甲醇、乙腈，純度高，黏度小。常使用低黏度的甲醇、乙腈，可以降低柱壓，提高柱效。可以降低柱壓，提高柱效。 二、化學(xué)鍵合相的流動相二、化學(xué)鍵合相的流動相u 對流動相的要求：對流動相的要求：分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材33第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇 u 流動相對分離的影響：流動相對分離的影響：溶劑的配比影響流動相的洗脫能力，改變保留時間；溶劑的配比影響流動相的洗脫能力，改變保留時間；溶劑種類影響流動相的選擇性，改變分離效果。溶劑種

31、類影響流動相的選擇性，改變分離效果。正相色譜法：溶劑的極性越強，洗脫能力越強。正相色譜法：溶劑的極性越強，洗脫能力越強。反相色譜法：溶劑的極性強，洗脫能力弱。反相色譜法：溶劑的極性強，洗脫能力弱。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材34第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇例如：例如：水的極性大于甲醇，所以在反相色譜法中，甲醇水的極性大于甲醇，所以在反相色譜法中，甲醇的洗脫能力比水強，增大甲醇的比例，流動相的的洗脫能力比水強，增大甲醇的比例，流動相的洗脫能力增強，洗脫能力增強

32、，k與與tR減小。減小。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材35第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材36第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇反相鍵合相色譜法常選用甲醇、乙腈和四氫呋喃反相鍵合相色譜法常選用甲醇、乙腈和四氫呋喃為極性調(diào)節(jié)劑，水為底劑（洗脫強度較弱的溶為極性調(diào)節(jié)劑，水為底劑（洗脫強度較弱的溶劑）。一般情況下，甲

33、醇劑）。一般情況下，甲醇- -水能滿足多數(shù)樣品的水能滿足多數(shù)樣品的分離要求，黏度小且價格低，因而是反相鍵合相分離要求，黏度小且價格低，因而是反相鍵合相色譜法中最常用的流動相。色譜法中最常用的流動相。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材37第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇正相鍵合相色譜法常選用乙醚、氯仿和二氯正相鍵合相色譜法常選用乙醚、氯仿和二氯甲烷為極性調(diào)節(jié)劑，正己烷為底劑。甲烷為極性調(diào)節(jié)劑，正己烷為底劑。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國

34、高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材38第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材39點滴積累點滴積累常用的反相固定相：常用的反相固定相：C C1818，正相固定相：硅膠與氨基鍵，正相固定相：硅膠與氨基鍵合、氰基鍵合。合、氰基鍵合。反相鍵合相色譜法中常選用的流動相甲醇反相鍵合相色譜法中常選用的流動相甲醇水，正相水，正相鍵合相色譜法中常選用乙醚、三氯甲烷和二氯甲烷為鍵合相色譜法中常選用乙醚、三氯甲烷和

35、二氯甲烷為極性調(diào)節(jié)劑，正己烷為溶劑。極性調(diào)節(jié)劑，正己烷為溶劑。 第三節(jié)高效液相色譜法的固定相和流動相及其選擇分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材40第四節(jié)分離條件的選擇第四節(jié)分離條件的選擇第四節(jié)分離條件的選擇一、一、 高效液相色譜中的速率理論高效液相色譜中的速率理論uGC中的速率理論方程式：中的速率理論方程式：uHPLC中的速率理論方程式：中的速率理論方程式： H H = =A A + +C Cm mu u + +C Csmsmu u 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟

36、李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材41第四節(jié)分離條件的選擇u渦流擴散項渦流擴散項( (A A) ) A A = 2= 2ddp p 減少固定相顆粒的直徑減少固定相顆粒的直徑（d dp p）； 采用球形、粒度均勻的固定相，用勻漿法裝柱，采用球形、粒度均勻的固定相，用勻漿法裝柱， 以減小填充因子以減小填充因子（同（同GC）。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材42第四節(jié)分離條件的選擇u縱向擴散項縱向擴散項(B/u) 該項可

37、忽略該項可忽略 B=2rDm 溶質(zhì)在流動相中的擴散系數(shù)（溶質(zhì)在流動相中的擴散系數(shù)（Dm）很小，室）很小，室溫操作，且溫操作，且u大于大于u最佳最佳。u傳質(zhì)阻力項（傳質(zhì)阻力項（Cu） 固定相傳質(zhì)阻力：固定相傳質(zhì)阻力：CS可以忽略可以忽略，因，因df（固定液膜厚度）（固定液膜厚度）極小。極小。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材43第四節(jié)分離條件的選擇流動相傳質(zhì)阻力：流動相傳質(zhì)阻力： Cm與固定相顆粒粒度（與固定相顆粒粒度（ dp ）及組分分子在流動相中的擴散）及組分分子在流動相中的擴散

38、系數(shù)系數(shù) Dm有關(guān)。有關(guān)。 Dp越小，越小，Cm越?。辉叫?；Dm越大，越大，Cm越小。越小。 要求：要求： dp小，小，Dm大。大。靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻力：靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻力： 由部分流動相在固定相微孔內(nèi)的滯留而產(chǎn)生。由部分流動相在固定相微孔內(nèi)的滯留而產(chǎn)生。 靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗系數(shù)靜態(tài)流動相傳質(zhì)阻抗系數(shù)Csm Csm dp2， Csm 1/Dm，DmT/ 要求要求: 固定相粒度（固定相粒度（dp2）、）、 流動相黏度（流動相黏度（）都小。）都小。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材44第

39、四節(jié)分離條件的選擇uHPLC中的速率理論可表示為：中的速率理論可表示為： H=A+Cmu+Csmu 原因：原因： HPLCHPLC中流動相為液體，固定相為化學(xué)中流動相為液體，固定相為化學(xué)鍵合相。鍵合相。結(jié)果：結(jié)果：HPLCHPLC的實驗條件應(yīng)該是：小而均勻的的實驗條件應(yīng)該是：小而均勻的球形化學(xué)鍵合相；低粘度的流動相，流速不球形化學(xué)鍵合相；低粘度的流動相，流速不宜過快；適當?shù)牧魉?。分析型一般流量為宜過快；適當?shù)牧魉佟７治鲂鸵话懔髁繛?ml/min1ml/min左右。左右。柱溫適當。柱溫適當。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品

40、類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材45第四節(jié)分離條件的選擇 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材46第四節(jié)分離條件的選擇二、正相鍵合相色譜法的分離條件二、正相鍵合相色譜法的分離條件u固定相固定相極性鍵合相如氰基、氨基鍵合相等極性鍵合相如氰基、氨基鍵合相等u流動相流動相烷烴加適量極性調(diào)節(jié)劑（正己烷烷烴加適量極性調(diào)節(jié)劑（正己烷- -甲醇）甲醇）分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃

41、教材規(guī)劃教材47第四節(jié)分離條件的選擇三、反相鍵合相色譜法的分離條件三、反相鍵合相色譜法的分離條件u 固定相非極性鍵合相固定相非極性鍵合相 如如C18u 流動相以水為基礎(chǔ)溶劑，加入甲醇、乙腈流動相以水為基礎(chǔ)溶劑，加入甲醇、乙腈 等極性調(diào)節(jié)劑。等極性調(diào)節(jié)劑。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材48第四節(jié)分離條件的選擇點滴積累點滴積累高效液相色譜法中影響柱效主要因素為渦流擴散項和傳高效液相色譜法中影響柱效主要因素為渦流擴散項和傳質(zhì)阻抗項。由于液體黏度比載氣大得多，而且柱溫多為質(zhì)阻抗項。由于

42、液體黏度比載氣大得多，而且柱溫多為室溫，其縱向擴散項很小，可忽略不計。范氏方程簡化室溫，其縱向擴散項很小，可忽略不計。范氏方程簡化為為 H=A +C H=A +C HPLCHPLC的理論塔板高度的理論塔板高度H H與流動相的流速（與流動相的流速（u u）成正比，為）成正比，為了獲得較高的柱效，流速不宜快，一般流量為了獲得較高的柱效，流速不宜快，一般流量為1ml/min1ml/min。一般情況下，甲醇一般情況下，甲醇- -水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求，水系統(tǒng)已能滿足多數(shù)樣品的分離要求，乙腈乙腈- -水系統(tǒng)要優(yōu)于甲醇水系統(tǒng)要優(yōu)于甲醇- -水系統(tǒng)水系統(tǒng)。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟

43、謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材49第五節(jié)高效液相色譜儀第五節(jié)高效液相色譜儀第五節(jié)高效液相色譜儀輸液系統(tǒng)輸液系統(tǒng)進樣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)分離系統(tǒng)分離系統(tǒng)檢測系統(tǒng)檢測系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng)數(shù)據(jù)記錄處理系統(tǒng) u 組成：組成：分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材50進樣口進樣口檢測器檢測器色譜圖色譜圖色譜柱色譜柱溶劑溶劑高壓泵高壓泵混合器混合器高效液相色譜儀示意圖高效液相色譜儀示意圖第五節(jié)高效液相色譜儀分析化學(xué)（第分析化學(xué)（

44、第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材51u輸液泵應(yīng)具備的性能：輸液泵應(yīng)具備的性能：流量精度高且穩(wěn)定流量精度高且穩(wěn)定流量范圍寬且可調(diào)流量范圍寬且可調(diào)能在高壓下連續(xù)工作能在高壓下連續(xù)工作液缸容積小液缸容積小密封性能好，耐腐蝕密封性能好，耐腐蝕第五節(jié)高效液相色譜儀一、輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵）一、輸液系統(tǒng)（高壓輸液泵）分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材52第五節(jié)高效液相色譜儀u高壓輸液泵：高壓輸液泵：恒

45、流泵：在輸送流動相過程中流量恒定，常恒流泵：在輸送流動相過程中流量恒定，常用柱塞往復(fù)泵。用柱塞往復(fù)泵。雙泵：為了克服流量的脈動，常用串聯(lián)式。雙泵：為了克服流量的脈動，常用串聯(lián)式。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材53 柱塞往復(fù)泵結(jié)構(gòu)示意圖柱塞往復(fù)泵結(jié)構(gòu)示意圖1. 轉(zhuǎn)動凸輪轉(zhuǎn)動凸輪 2. 柱塞柱塞 3. 密封墊密封墊 4. 液缸液缸 5.入口單向閥入口單向閥6. 出口單向閥出口單向閥 7. 流動相入口流動相入口 8. 流動相出口流動相出口第五節(jié)高效液相色譜儀分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第

46、2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材54泵1泵2阻尼器單向閥串聯(lián)式柱塞往復(fù)泵示意圖串聯(lián)式柱塞往復(fù)泵示意圖第五節(jié)高效液相色譜儀分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材55等強度洗脫等強度洗脫 在同一分析周期內(nèi)流動相的組成保持恒定，適在同一分析周期內(nèi)流動相的組成保持恒定，適合于組分數(shù)目少，性質(zhì)差別小的試樣。合于組分數(shù)目少，性質(zhì)差別小的試樣。 梯度洗脫梯度洗脫 在一個分析周期內(nèi)，程序控制改變流動相的組在一個

47、分析周期內(nèi)，程序控制改變流動相的組成，如溶劑的極性、離子強度、成，如溶劑的極性、離子強度、pHpH值等。分析組值等。分析組分數(shù)目多、性質(zhì)差別大的復(fù)雜試樣。分數(shù)目多、性質(zhì)差別大的復(fù)雜試樣。 u洗脫方式：洗脫方式：第五節(jié)高效液相色譜儀分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材56第五節(jié)高效液相色譜儀u進樣器進樣器進樣閥（六通閥），進樣閥（六通閥），常用帶有定量管的六通閥常用帶有定量管的六通閥自動進樣裝置自動進樣裝置二、進樣系統(tǒng)二、進樣系統(tǒng)分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李

48、維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材57充樣位置（充樣位置（load)load)進樣位置進樣位置(inject)(inject)來自泵來自泵至色譜柱至色譜柱 來自泵來自泵至色譜柱至色譜柱廢廢液液廢廢液液六通閥進樣示意圖六通閥進樣示意圖 第五節(jié)高效液相色譜儀分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材58u色譜柱（色譜柱（column） 由柱管和固定相組成由柱管和固定相組成可重復(fù)使用可重復(fù)使用實驗結(jié)束，要用經(jīng)過濾和脫氣的適當溶劑沖洗實驗結(jié)

49、束，要用經(jīng)過濾和脫氣的適當溶劑沖洗色譜系統(tǒng)色譜系統(tǒng) 第五節(jié)高效液相色譜儀分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材59第五節(jié)高效液相色譜儀u對檢測器（對檢測器（detector）的要求）的要求：靈敏度（靈敏度（sensitivity）高（檢測限低）高（檢測限低）噪音（噪音（noise）低）低線性范圍（線性范圍（linear range）寬）寬重復(fù)性（重復(fù)性（repeatability）好）好適用范圍廣（通用型、專屬型）適用范圍廣（通用型、專屬型） 四、檢測系統(tǒng)四、檢測系統(tǒng)分析化學(xué)（第分析化

50、學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材60第五節(jié)高效液相色譜儀u檢測原理：朗伯檢測原理：朗伯- -比爾定律：比爾定律：A=EClu特點：特點：紫外檢測器的靈敏度、精密度及線性范圍好，紫外檢測器的靈敏度、精密度及線性范圍好，不易受溫度和流速的影響，可用于梯度洗脫。不易受溫度和流速的影響，可用于梯度洗脫。 u局限：局限：只能檢測有紫外吸收的物質(zhì)，流動相的截止波只能檢測有紫外吸收的物質(zhì)，流動相的截止波長應(yīng)小于檢測波長。長應(yīng)小于檢測波長。 u為專屬型、濃度型檢測器。為專屬型、濃度型檢測器。（一）紫外檢測器（一）

51、紫外檢測器( (ultraviolet detector) )分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材61固定波長檢測器固定波長檢測器 ：254nm可變波長檢測器：可變波長檢測器： 200400（800）nm，光電二極管陣列檢測器光電二極管陣列檢測器 (photodiode array detector； PDAD)： 一系列光電二極管，可以進行波長快速掃描，同一系列光電二極管，可以進行波長快速掃描，同時獲得樣品的色譜圖和每個色譜組分的光譜圖。時獲得樣品的色譜圖和每個色譜組分的光譜圖。

52、吸收光譜用于組分的定性，色譜峰面積用于定量，吸收光譜用于組分的定性，色譜峰面積用于定量， 判斷峰純度。判斷峰純度。第五節(jié)高效液相色譜儀u紫外檢測器的紫外檢測器的分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材62第五節(jié)高效液相色譜儀（二）熒光檢測器（二）熒光檢測器( (fluorescence detector；FD) )u特點：特點：選擇性好，專屬型檢測器選擇性好，專屬型檢測器靈敏度比紫外檢測器高（檢測限靈敏度比紫外檢測器高（檢測限10-10 g/ml）分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟

53、謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材63第五節(jié)高效液相色譜儀（三）示差折光檢測器（三）示差折光檢測器 利用樣品池和參比池之間折光率的差別來對組分進行檢測，測得利用樣品池和參比池之間折光率的差別來對組分進行檢測，測得折光率差值與樣品組分濃度成正比。折光率差值與樣品組分濃度成正比。 每種物質(zhì)的折射率不同，原則上講都可以用示差折光檢測器來檢每種物質(zhì)的折射率不同，原則上講都可以用示差折光檢測器來檢測。測。 其主要缺點是折光率受溫度影響較大，且檢測靈敏度較低，不能其主要缺點是折光率受溫度影響較大，且檢測靈敏度較低，不能用于梯度洗脫。

54、用于梯度洗脫。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材64第五節(jié)高效液相色譜儀（四）蒸發(fā)光散射檢測器（四）蒸發(fā)光散射檢測器樣品組分在蒸發(fā)室內(nèi)形成氣溶膠，而后進入檢測室。樣品組分在蒸發(fā)室內(nèi)形成氣溶膠，而后進入檢測室。用強光或激光照射氣溶膠而產(chǎn)生散射，測定散射光強而用強光或激光照射氣溶膠而產(chǎn)生散射，測定散射光強而獲得組分的濃度信號。獲得組分的濃度信號。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教

55、材規(guī)劃教材65第五節(jié)高效液相色譜儀（五）安培檢測器（五）安培檢測器利用組分在氧化還原過程中產(chǎn)生的電流或電壓變化來對樣品進行利用組分在氧化還原過程中產(chǎn)生的電流或電壓變化來對樣品進行檢測。檢測。只適于測定具有氧化還原活性的物質(zhì)，測定的靈敏度較高，檢測只適于測定具有氧化還原活性的物質(zhì)，測定的靈敏度較高，檢測限可達限可達10-9g/ml10-9g/ml。分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材66第五節(jié)高效液相色譜儀u微機采集和分析色譜數(shù)據(jù)：給出峰寬、峰高、峰面積、對稱因微機采集和分析色譜數(shù)據(jù)：

56、給出峰寬、峰高、峰面積、對稱因子、分離度等色譜參數(shù)。子、分離度等色譜參數(shù)。 u復(fù)雜的試樣，需要復(fù)雜的試樣，需要“色譜專家系統(tǒng)色譜專家系統(tǒng)”。 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材67第五節(jié)高效液相色譜儀 u流量精度流量精度 u噪音噪音 u漂移漂移 u檢測限檢測限 u定性與定量重復(fù)性定性與定量重復(fù)性 分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材68課堂活動課堂活動試說出高效液相色譜儀

57、的基本組成及工作流程。試說出高效液相色譜儀的基本組成及工作流程。 第五節(jié)高效液相色譜儀分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材69高效液相色譜儀主要包括輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系高效液相色譜儀主要包括輸液系統(tǒng)、進樣系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng)。統(tǒng)、檢測系統(tǒng)和數(shù)據(jù)記錄及處理系統(tǒng)。高效液相色譜使用的高壓泵按輸液性能可分為恒壓泵和高效液相色譜使用的高壓泵按輸液性能可分為恒壓泵和恒流泵，按機械結(jié)構(gòu)又分為液壓隔膜泵、氣動放大泵、恒流泵，按機械結(jié)構(gòu)又分為液壓隔膜泵、氣動放大泵、螺旋注

58、射泵、往復(fù)柱塞泵四種。螺旋注射泵、往復(fù)柱塞泵四種。常用的高效液相色譜檢測器有紫外檢測器、熒光檢測器、常用的高效液相色譜檢測器有紫外檢測器、熒光檢測器、示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、安培檢測器等。示差折光檢測器、蒸發(fā)光散射檢測器、安培檢測器等。 第五節(jié)高效液相色譜儀分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材70第六節(jié) 定性與定量分析方法一、定性分析方法一、定性分析方法 HPLC HPLC的定性分析方法與的定性分析方法與GCGC相似，有色譜鑒定法、化學(xué)鑒相似，有色譜鑒定法、化學(xué)鑒定法、多譜

59、聯(lián)用鑒定法。利用純物質(zhì)和樣品的保留時間定法、多譜聯(lián)用鑒定法。利用純物質(zhì)和樣品的保留時間或相對保留時間的相互對照進行定性判斷?；蛳鄬ΡＡ魰r間的相互對照進行定性判斷。第六節(jié)第六節(jié) 定性與定量分析方法定性與定量分析方法分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材71第六節(jié)定性與定量分析方法二、定量分析方法二、定量分析方法 HPLC HPLC的定量方法與的定量方法與GCGC相同，常用外標法、內(nèi)標法和內(nèi)加相同，常用外標法、內(nèi)標法和內(nèi)加法，而歸一化法應(yīng)用較少。在進行樣品測定前要做系統(tǒng)法，而歸一化法應(yīng)用較

60、少。在進行樣品測定前要做系統(tǒng)適用性試驗，即用規(guī)定的方法對儀器進行試驗和調(diào)整，適用性試驗，即用規(guī)定的方法對儀器進行試驗和調(diào)整，檢查儀器系統(tǒng)是否符合藥品標準的規(guī)定。檢查儀器系統(tǒng)是否符合藥品標準的規(guī)定。中華人民共中華人民共和國藥典和國藥典（20102010年版）規(guī)定的色譜系統(tǒng)適用性試驗包年版）規(guī)定的色譜系統(tǒng)適用性試驗包括：理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子、重復(fù)性。括：理論塔板數(shù)、分離度、拖尾因子、重復(fù)性。第六節(jié)第六節(jié) 定性與定量分析方法定性與定量分析方法分析化學(xué)（第分析化學(xué)（第2版）版）謝慶娟謝慶娟 李維斌李維斌全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部全國高職高專藥品類專業(yè)衛(wèi)生部“十二五十二五”規(guī)劃教材規(guī)劃教材72